图5
杨树叶片细胞中蛋白质-蛋白质和蛋白质- dna的相互作用。在上述结果部分所述的最佳实验参数下，利用注射器渗透在杨树叶片中瞬时共转化的各种方法说明了蛋白质-蛋白质相互作用。一个。AtWRKY40-YFP的BiFC测定N和AtWRKY40-YFPC。AtWRKY40-YFP的结合N和YFPC作为阴性对照。5 dpi时，分离渗透叶片，在尼康倒置荧光显微镜TE2000-E下观察YFP荧光信号。YFP信号与DAPI荧光在细胞核内重叠。b。分离荧光素酶检测AtNRT3.1-Nluc和AtNRT2.1-Cluc，与AtNRT3.1-Nluc和Cluc阴性对照组合相比，显示更强的LUC活性。在5 dpi时，用无针注射器将转化后的叶片浸入2 mM荧光素中，静置6 min熄灭荧光，分离后进行荧光强度测定。颜色刻度表示发光强度，蓝色表示最低，红色表示最高。c。共免疫沉淀实验的图像显示PtoUBC34s与PtoMYB221的相互作用。PtoUBC34s-Flag与PtoMYB221-Myc共表达，蛋白提取液与anti-Flag偶联琼脂糖孵育。免疫沉淀(IP)和输入蛋白用抗flag和抗myc抗体进行免疫印迹分析。未裁剪的图像见图S7。d。以YFP-PtoUBC34s为供体，共表达YFP-PtoUBC34s和PtoMYB221-RFP的体内Förster共振能量转移(FRET-FLIM)测量。仅YFP-PtoUBC34s供体作为阴性对照。数据以平均值±SE (n= 3)。＊P< 0.05,学生的t以及。e。双LUC检测超人的ear样基序抑制域(SUPRD)的抑制能力[48，54]．在与报告基因和效应基因共转化后测量相对LUC活性，其中pGreen-SK作为控制载体。数据以平均值±SE (n= 6)。Arunachal Pradesh，P< 0.01,学生的t以及