跳过主要内容gydF4y2Ba

基因组广泛的比较分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2BaSuperfamily在七种玉米杆菌物种和梨中表达分析(gydF4y2BaPyrus bretschneiderigydF4y2Ba)gydF4y2Ba

摘要gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

的gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba酰基转移酶超家族在植物中发挥着多种生物学作用,包括调节果实品质,催化合成萜类、酚类和酯类,提高植物的抗逆性等。然而,拷贝数、表达特征及与果实香气形成的联系gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因尚不清楚。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

总共,717gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba7个蔷薇科(gydF4y2BaPyrus bretschneiderigydF4y2Ba,gydF4y2Ba马吕斯有明显gydF4y2Ba,gydF4y2Ba普鲁尼乌斯唉gydF4y2Ba,gydF4y2BaPrunus PersicagydF4y2Ba,gydF4y2Ba草莓属vescagydF4y2Ba,gydF4y2BaPyrus Communis.gydF4y2Ba和gydF4y2Ba悬钩子属植物occidentalisgydF4y2Ba).在对模式植物进行系统发育分析和分类的基础上,对模式植物进行了系统发育分类gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba将家族基因分为I-a、I-b、II-a、II-b、III-a、IV和v 7个类群gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba在七种Rosaceae物种中检测到具有78个同步基因对的超家族。不同类型的基因复制事件共同推动扩展gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba超科,净化选择支配着进化gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba小Ka / ks比率支持的基因。基于酯含量与表达水平的相关分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba选择4个候选基因进行qRT-PCR鉴定。结果表明gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba和gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba是梨果实发育过程中香气形成的重要候选基因。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

我们已经彻底确定了gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba对7种蔷薇科植物的系统发育关系、扩展模式和表达特征进行了全面的比较分析,并获得了4个参与梨果实香气合成的候选基因。这些结果为进一步研究其特异的生物学功能提供了理论基础gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba超级家族成员与梨果实品质的改善。gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

梨是全球一个重要的温带枸杞果树。根据历史记录,梨起源于55至6500万年前,他们的培养历史可以追溯到30,000多年[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba].2012年,梨的基因组序列(gydF4y2BaPyrus bretschneiderigydF4y2Ba简历。“DangShansuli”)被释放,为梨中的基因组学和分子生物学提供研究资源。目前,还提供了六种其他枸杞果实种类的基因组序列,允许在经济上重要的鼠尾草物种中进行比较基因组学研究。果质质量,包括糖含量,果实尺寸,水果香气,紧密与消费者选择和商业价值紧密相连。水果香气是一种固有的质量/特征,其区分不同的水果种类甚至在物种中的不同品种。在苹果中,主要芳族成分为1-己醇[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba].在红肉桃果实中,果味内酯γ-己内酯是主要的香气成分[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba].在香蕉中,乙酸2-戊酯、乙酸3-甲基丁酯是最重要的香气贡献者[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba].在欧洲梨品种中,挥发性有机化合物主要属于初级酯,醇和烷烃[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba].此外,已经指出,酯和醛是由33种中国梨的33种品种共享的关键挥发性化合物gydF4y2BaPyrus ussuriensisgydF4y2Ba[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba].由此可见,果香是由大量挥发性化合物组成的复杂混合物,但以酯类化合物最为广泛。gydF4y2Ba

研究发现,挥发性香气化合物的生物合成途径主要有脂肪酸途径、氨基酸途径、萜类途径和类胡萝卜素途径。其中,脂肪酸是大多数水果种类香气挥发物的主要前体[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba],脂肪酸衍生的直链醇、醛和酯是重要的芳香化合物,负责新鲜水果风味,由三个过程组成:α-氧化、β-氧化和脂肪加氧酶途径[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba].脂肪酸的β-氧化是主要的生物合成过程,为酯的形成提供醇和酰基辅酶A (CoAs) [gydF4y2Ba7gydF4y2Ba].此前的研究表明,梨和苹果的果香挥发物是通过β氧化形成的[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba].多种酶已被报道参与β氧化。例如,酰基辅酶a可被酰基辅酶a还原酶还原为醛,醛再被醇脱氢酶不断还原为醇,最后由醇酰基转移酶(gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba)[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba].此外,在氨基酸途径中,这些氨基酸也可以是酰基-CAA的前体,涉及催化的醇酯化反应gydF4y2BaAATS.gydF4y2Ba[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba].一旦基本骨架通过这些途径产生,这些挥发性化合物的多样性可以通过酰基化、脱羧化、糖基化、氧化/还原、羟基化和甲基化来实现,这扩展了基本骨架并修改了酶[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba].gydF4y2Ba

酰基化是植物生长发育过程中次生代谢产物修饰的重要过程。gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba酰基转移酶家族主要使用辅酶酯作为酰基供体,并使用醇或胺作为受体催化酰化,形成各种酰化产物,包括木质素单体,花青素,三萜类化合物,酯类等[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba].的gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba(苄醇O-乙酰转移酶,花青素O-羟基氨基酰基烯酰基转移酶,N-羟基氨基酰基苯甲酸苯甲酰基转移酶和脱乙酰vindoline 4-O-乙酰转移酶[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)超家族由具有两个共同结构域(HXXXD和DFGWG)和相似氨基酸序列的酶组成[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba].HXXXD基序区域位于反应通道中心,参与催化作用。DFGWG基序是反应不可缺少的基序,其位置远离活性位点[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba].来自加州野花鉴定的苄醇O-乙酰基转移酶gydF4y2Ba山字草brewerigydF4y2Ba可以生产花挥发性苄基乙酸酯[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba],脱乙酰戊啉4-O-乙酰转移酶鉴定gydF4y2BaCatharanthus roseus也叫gydF4y2Ba与生物碱vindoline的合成有关[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba, n -羟基肉桂酰邻氨基苯甲酸苯甲酰转移酶gydF4y2BaDianthus Caryophyllus.gydF4y2Ba负责产生一类称为苯酰胺的植物脂蛋素[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]和鉴定的花青素o-羟基氨基酰基酰基转移酶gydF4y2BaGentiana Triflora.gydF4y2Ba能催化花青素合成[gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba].gydF4y2Ba

近年来,成员gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba与酯代谢相关的酰基转移酶家族已经被发现gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba基因gydF4y2Bampaat1.gydF4y2Ba在Apple [gydF4y2Ba24gydF4y2Ba],gydF4y2BaFaaat2.gydF4y2Ba和gydF4y2Ba种子gydF4y2Ba草莓[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba],它们在酯生物合成的最后一步中发挥作用,催化与辅酶A硫酯作为供体和醇作为受体的酯化合物的产生。潜在的角色gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba在梨和其他果实物种中需要进一步研究水果酯合成中的酰基转移酶系列。因此,系统地识别gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba在梨和筛选候选基因中的基因家族,用于调节酯的合成的候选基因对于人工调节梨酯的含量以及提高梨品质具有重要意义。在这项研究中,我们旨在识别曲目gydF4y2BaBAHDgydF4y2BaSuperfamily成员在梨和其他六种枸杞果实种类中。为了解开进化和扩展机制gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba超家族和屏幕候选人gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba酰基转移酶与果香生物合成尤其是酯合成,我们使用基因组和转录组资源对进化和表达模式进行了综合分析。基因结构,保守的基序,系统发育,基因重复,选择压力和时空表达谱gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba本研究分析了基因。此外,我们通过QRT-PCR验证了基因表达模式,以及几个候选者gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba测定了与梨挥发性酯含量密切相关的基因。这些结果提供了深入了解的演变,扩展和功能角色gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba超级家族,并有助于进一步研究它们在这些果实物种中的分子功能。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

的识别gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba七个蔷薇科物种的基因gydF4y2Ba

的gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba超家族的特征域(Pfam: PF02458)和gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba采用隐马尔可夫模型(HMM)配置文件(PF02458)识别gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba会员。在线网站智能(gydF4y2Bahttp://smart.embl-heidelberg.de/gydF4y2Ba)用于分析候选基因的蛋白质序列,并确定是否存在gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba域。结果,773个假定gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba在e值<1e的7个物种中获得了家族候选基因gydF4y2Ba- 10.gydF4y2Ba.进一步,通过多序列比对验证了HXXXD和DFGWG两个特征保守域的存在gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba家族的基因(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba].因为它们缺少这两个结构域,所以3、6、6、6、7、8和20个基因被移除gydF4y2BaPrunus PersicagydF4y2Ba(桃),gydF4y2BaP. Bretschneideri.gydF4y2Ba(中国白梨),gydF4y2BaPyrus Communis.gydF4y2Ba(欧洲梨),gydF4y2Ba悬钩子属植物occidentalisgydF4y2Ba(黑莓),gydF4y2Ba草莓属vescagydF4y2Ba(草莓),gydF4y2Ba马吕斯有明显gydF4y2Ba(苹果)和gydF4y2Ba普鲁尼乌斯唉gydF4y2Ba(甜樱桃)分别。最后,除去了56个序列,717gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba确定并分析基因(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba).有关特征的详细信息gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因可在附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S1。gydF4y2Ba

表1基因组信息及鉴定gydF4y2BaBAHDgydF4y2BaRosaceae种类的基因数gydF4y2Ba

系统发育和保守的基序分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba中国白梨的基因gydF4y2Ba

由。编码的氨基酸序列gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba中国白梨的基因gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树gydF4y2Ba采用最大似然法构建系统发育树。中国白梨gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba将家庭蛋白质基因分为五片曲巾(I,II,III-A,IV和V;图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba).支I包括两个亚支(支I-a和支I-b)。的gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba属于I-a支的基因参与了芳香和脂肪族醇的修饰gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树gydF4y2Ba[gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba];因此,我们推测了gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba聚在中国白梨I-a支的基因可能编码具有类似功能的蛋白质。分支I-b的成员具有与木质素单体中间体生物合成相关的功能[gydF4y2Ba29gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba],包括烟草和gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Bashikimate hydroxycinnamoyltransferases [gydF4y2Ba31gydF4y2Ba].CLADE II由两个亚克士组成(II-A和II-B)。的功能gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba属于II-A的基因是未知的。Clade II-B包含两个gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因,gydF4y2BaAT3G29590.1gydF4y2Ba(gydF4y2BaAT5MAT.gydF4y2Ba) 和gydF4y2BaAT1G03940.1.gydF4y2Ba(gydF4y2BaAT3AT1gydF4y2Ba),与花青素生物合成有关[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba].支III-a的成员很少,其中4个基因来自中国白梨,3个基因来自中国白梨gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba一种基因来自杨树。进化枝5有9个成员,其中有一个研究得很透彻gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因gydF4y2BaAT4G24510.1.gydF4y2Ba(gydF4y2BaCER2gydF4y2Ba)参与调节切割蜡生物合成[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba].CLADE IV含有许多参与催化芳族醇的乙酰化和乙酰化的小或中链醇[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba].此外,只有3个和4个成员聚集在支III-a和v中。gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba114个基因中有41个基因存在于进化支IV,占36.0%。gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba与梨挥发性酯含量密切相关的基因,如gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba,属于支I和支IV。gydF4y2Ba

图1gydF4y2Ba
图1gydF4y2Ba

系统发育分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Bas froOgydF4y2Ba拟南芥,gydF4y2Ba中国白梨gydF4y2Ba杨树。gydF4y2Ba采用最大似然法构建系统发育树gydF4y2Ba

的ML系统发育树gydF4y2BaBAHDsgydF4y2Ba欧洲梨gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树gydF4y2Ba作为外群体也被构建(图。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba).建立了中国白梨与欧洲梨的系统发育树gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因分为五个枝条。Clades V和III-A分别仅包含四个成员。然而,〜36.1%(35%的97个)基因聚集在Clade IV中,26.8%(26%的97个)在Clade I中聚集。另外,五种功能已知的酰基转移酶gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba[gydF4y2BaAT3G0480.1.gydF4y2Ba(gydF4y2Ba聊天gydF4y2Ba),gydF4y2BaAT2G23510.1gydF4y2Ba(gydF4y2Ba项gydF4y2Ba),gydF4y2BaAT5G48930.1gydF4y2Ba(gydF4y2BaARHCT.gydF4y2Ba),gydF4y2BaAT3G29590.1gydF4y2Ba(gydF4y2BaAT5MAT.gydF4y2Ba) 和gydF4y2BaAT1G03490.1.gydF4y2Ba(gydF4y2BaAT3AT1gydF4y2Ba)]被分为两个亚组(I-a和II-b)。这些结果为基因功能的研究提供了可能的候选者。gydF4y2Ba

图2gydF4y2Ba
figure2gydF4y2Ba

系统发育分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba从gydF4y2Ba拟南芥,Pyrus普通的gydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树。gydF4y2Ba采用最大似然法构建系统发育树。氨基酸序列gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树gydF4y2Ba均从植物菌群(gydF4y2Bahttps://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html#gydF4y2Ba)gydF4y2Ba

此外,为了验证ML方法的系统发育分析的分类的准确性,我们还使用邻接(NJ)方法构建树(附加文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba:图S1;附加文件gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba:图S2)。结果表明,NJ系统也可以分为五个片状。在欧洲梨中,亚克片的类型和数量与ML系统发育树一致。在中国白梨的Nj系统发育树,gydF4y2BaPBR034977.1.gydF4y2Ba在Clade II-B中聚集,gydF4y2BaPbr029351.1gydF4y2Ba而在中国白梨的ML系统发生树中,这2个成员被归为IV类,bootstrap值为100,因此我们推测这2个成员可能属于IV类。同样,3个成员(gydF4y2BaAT4G31910.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba)在NJ树中的Subclade I-B中可能属于Subclade I-A,因为ML树的引导值高于NJ树的引导值。除了上述基因之外,将其他基因分为NJ方法和中国白色梨的ML方法中的相同亚基。此外,我们还发现ML系统发育树的所有分支的引导值高于50,进一步表明了ML树中的分类的可靠性。gydF4y2Ba

我们使用在线软件MEME检测到中国白梨的BAHD蛋白中的20个保守的图案(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba).所有gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba家庭成员中有母题1或母题3,114人中有75人(65.8%)既有母题又有母题3。基于基因结构分析,我们确定了序列为CGGFAIGLSMSHKVADGSSLSTFINSWAE和FYEADFGWGKP的motif1和motif3分别对应于结构域HXXXD和DFGWG。亚枝I-a、I-b、II-a、II-b、III-a和V不包含母题17,但下列亚枝除外gydF4y2BaPR005916.1.gydF4y2Ba,而I-a、I-b、II-a、II-b和III-a亚枝的成员以及V支不包含主题19,除了gydF4y2BaPBR010925.1.gydF4y2Ba.除了gydF4y2BaPbr005746.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr014025.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr035166.1gydF4y2Ba和gydF4y2BaPBR036245.1.gydF4y2Ba,进化枝IV的成员不包含主题10。Motif14和motif16只在演化支II-b中被发现。同一亚枝的保守基序类型和分布相似,进一步支持了进化树的分类(图2)。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba).关于保守图案的信息显示在附加文件中gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S2。gydF4y2Ba

图3gydF4y2Ba
图3gydF4y2Ba

系统发育和保守的主题gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba梨中的基因。MEME工具用于识别主题。不同的颜色代表不同的主题gydF4y2Ba

梨基因复制事件的鉴定gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba总科和gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba七种Rosaceae物种的共同性分析gydF4y2Ba

不同的基因复制模式共同促进了BAHD系列的演变,包括全基因组重复(WGD)或分段重复,串联复制(TD),近端复制(PD),转换重复(TRD)和分散复制(DSD)[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba,gydF4y2Ba35gydF4y2Ba].我们使用DupGen_finder软件[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]检测重复gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba七个蔷薇科基因组的家庭基因对。所有gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因家族成员分为WGD、PD、TD、TRD或DSD。中国白梨和苹果的WGD重复数分别为29和59个,而草莓和桃子只有3个,黑树莓和甜樱桃4个,欧洲梨23个。中国白梨、欧洲梨和甜樱桃的DSDs分别为113、95和142。草莓中有91个,苹果中有81个,高于桃(76个)和黑莓(70个)。基因组重排和基因丢失可能是这些物种中DSDs的主要原因。此外,基于RNA和dna的TRD事件也可以产生这种结果[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba].WGDS和DSD影响了进化gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba中国白梨、苹果和欧洲梨的总科。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba).桃和草莓的TDs和DSDs是主要影响因素,黑莓和甜樱桃的pdds和DSDs则是主要影响因素。梨中,~ 57.1%(198中113)gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因参与DSD事件,而苹果草莓中有66.9%(91个136个),苹果中44.0%(81个中的81个),60.3%(76个中的126个),黑覆盆子67.3%(104个中的70分),甜樱桃66.4%(214分)和欧洲梨55.2%(第172号评分为172个)(附加档案gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S3)。结果表明,DSDs在所有调查物种中普遍存在。gydF4y2Ba

图4gydF4y2Ba
装具gydF4y2Ba

不同的基因复制模式gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba家庭。的gydF4y2BaxgydF4y2Ba-axis代表物种。的gydF4y2BaygydF4y2Ba-轴表示重复基因对的数量gydF4y2Ba

此外,我们还鉴定了每个物种的基因组内同源块[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba].如图所示。gydF4y2Ba5gydF4y2BaA,这gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba中国白梨的基因随机分布在17条染色体上,13号染色体上只有1个基因。类似地,gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因在其他物种中随机分布。在7种蔷薇科植物中共发现78对同位基因对。其中,17对、21对和29对在欧洲梨(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bag)、中国白梨(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Baa)和苹果(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bab),相比之下,草莓中只有三种(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Baf),桃子(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bad)和黑覆盆子(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bae)和甜樱桃中的两个(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bac)(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S4)。gydF4y2Ba

图5gydF4y2Ba
figure5gydF4y2Ba

基因定位及共线性分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因家庭。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba:中国白梨;gydF4y2BabgydF4y2Ba: 苹果;gydF4y2BacgydF4y2Ba:甜樱桃;gydF4y2BadgydF4y2Ba: 桃;gydF4y2BaegydF4y2Ba:黑覆盆子;gydF4y2BafgydF4y2Ba:草莓和gydF4y2BaggydF4y2Ba:欧洲梨。这些基因位于不同的染色体上。红线代表同基因对gydF4y2Ba

每个位点的非同义(Ka)和同义(Ks)替换和Ka/Ks分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba家庭基因gydF4y2Ba

WGD的演化阶段通常使用KS估计[gydF4y2Ba37gydF4y2Ba,gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba39gydF4y2Ba].除了原始WGD [ks = 1.5-1.8,〜1.4亿年前(Mya)](表示为核心eudicots共享的γ-paleohexaploidization事件)[gydF4y2Ba40gydF4y2Ba],在梨中检测到最近的WGD,并在30-45 mya(Ks = 0.15至0.3)中进行过[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba].如附加文件所示gydF4y2Ba1gydF4y2Ba表S5,中国白梨wgd衍生基因对的Ks值范围为0.006 ~ 3.909,TD、PD、TRD和DSD衍生基因对的Ks值范围分别为0.001 ~ 4.247、0.07 ~ 3.670、0.029 ~ 4.381和0.005 ~ 5.066。在苹果中也发现了类似的结果。在中国白梨中,有9对WGD衍生的基因对,Ks值在0.15 ~ 0.30之间,表明它们可能来源于当前的WGD (30-45 Mya) [gydF4y2Ba1gydF4y2Ba].部分重复基因对的k值较高(1.992 ~ 3.909),提示其可能来源于较古老的重复事件。wgd衍生基因对在黑树莓、欧洲梨、桃和甜樱桃中的Ks值分别为1.356 ~ 2.965、0.145 ~ 4.288、1.416 ~ 4.357和1.469 ~ 4.210。在桃、黑树莓和甜樱桃中,WGD衍生的基因对的k值较高,表明它们是在更古老的WGD事件中复制和保留的,支持这些物种中没有更近的WGD事件。gydF4y2Ba

有害突变可以通过负选择(纯化选择)去除。相反,新的有利突变可以通过正向选择(达尔文选择)积累并在种群中传播[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba].检测选择压力作用gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因,我们分析了七种Rosaceae物种中的Ka和Ka / Ks值(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S5)。选择压力的方向和幅度基于Ka / Ks比(Ka / Ks> 1:阳性选择; Ka / Ks = 1:中性演化;和Ka / Ks <1:净化选择)[gydF4y2Ba41gydF4y2Ba].Ka/Ks值gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba草莓的基因对(图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bad)、桃子(图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bac)和欧洲梨(无花果。gydF4y2Ba6gydF4y2Bab)小于1,说明这些基因是通过纯化选择进化而来的(图2)。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba).在其他四种玉米酸盐物种[中国梨(图。gydF4y2Ba6gydF4y2Baf)、甜樱桃(无花果)。gydF4y2Ba6gydF4y2Baa)、黑覆盆子(图;gydF4y2Ba6gydF4y2Bag)和苹果(图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bae),除了几种基因对,ka / ks值大于1。盒子图也表明数据分布集中,特别是在中国白色梨,甜樱桃和苹果中。gydF4y2Ba

图6gydF4y2Ba
figure6gydF4y2Ba

7种蔷薇科植物的Ka/Ks比值。利用编码序列分析Ka/Ks值。的gydF4y2BaxgydF4y2Ba-轴表示五个不同的复制类别。的gydF4y2BaygydF4y2Ba-AXIS表示KA / KS比率。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba:甜樱桃;gydF4y2BabgydF4y2Ba:欧洲梨;gydF4y2BacgydF4y2Ba: 桃;gydF4y2BadgydF4y2Ba:草莓;gydF4y2BaegydF4y2Ba: 苹果;gydF4y2BafgydF4y2Ba:中国白梨和gydF4y2BaggydF4y2Ba:黑莓gydF4y2Ba

的表达模式gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba中国白梨的基因gydF4y2Ba

基于转录组数据(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S6)来自不同梨组织,我们确定中国白梨中大多数基因在根中表达更高的表达(图。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba),我们发现其中有37个gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因在果实发育的所有四个阶段表达。gydF4y2BaPbr014238.1gydF4y2Ba仅在花粉管发育的四个阶段表达,而gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr027303.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba和gydF4y2BaPR006821.1.gydF4y2Ba在果实发育后期高表达(Fruit_S4)。大多数成员gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba超科在花粉管发育的4个阶段均无表达。gydF4y2Ba

图7gydF4y2Ba
figure7gydF4y2Ba

热图分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba梨中的基因。RNA-SEQ数据用于确定表达式模式gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因。左侧的类IV-II-B表示不同的片状。Fruit_s1-Fruit_s4表示四个不同的阶段:2015年5月16日(Fruit_s1);2015年7月1日(Fruit_s2);2015年7月31日(Fruit_s3);和2015年8月29日(Fruit_s4)。深红色表示高表达,浅粉红色表示低表达gydF4y2Ba

基因表达用QRT-PCR分析gydF4y2Ba

基于转录组表达谱和酯含量分析,我们选择了四种潜在的中国白梨基因(gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba),与果实发育过程中总酯含量变化有较强的相关性(图。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba一个,附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S7,附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S8)。我们使用qRT-PCR检测这些候选基因。多个个体基因的表达模式与梨果实发育过程中酯含量的变化高度相关。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba).我们的结果表明gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba8gydF4y2Bac)从S1 (45DAF)下降到S2 (75DAF),从S3 (105DAF)急剧增加到S4 (145DAF),然后达到峰值。令人惊讶的是,三个指数gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba8gydF4y2Bac)各阶段相对表达量、RNA-seq数据与总酯含量变化均呈现相关趋势。此外,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba8gydF4y2Bab),gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba8gydF4y2Bad)和gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)显示出类似的表达模式。从S3 (105DAF)到S4 (145DAF)均急剧增加,并在最后一个时期达到峰值。结果表明,各生育期各基因表达量、RNA-seq数据及总酯含量变化均呈现相关趋势。因此,这四个基因(gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba和gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba)似乎是合成酯的重要候选基因。gydF4y2Ba

图8gydF4y2Ba
figure8gydF4y2Ba

几个相对表达水平gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba不同时期的基因。以微管蛋白和WD-repeat蛋白作为内参基因,测定各时期的表达水平。的gydF4y2BaxgydF4y2Ba-axis表示四个不同的时期(45ddaf,75daf,105ddaf和145ddaf)。的gydF4y2BaygydF4y2Ba-axis表示相对表达和TPM(百万读数的转录人)值。数据表示平均值±SDS(gydF4y2BangydF4y2Ba= 3)。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba:总酯的内容;gydF4y2BabgydF4y2Ba:gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba;gydF4y2BacgydF4y2Ba:gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba;gydF4y2BadgydF4y2Ba:gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba和gydF4y2BaegydF4y2Ba:gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba

为了进一步调查这个结果,有四个gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因(gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba和gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba)和11个生物化学特征gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba来自其他物种的基因被用来构建最大可能树。如图所示。gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,我们发现这些梨gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因与报道的报告分享了高同源性gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba基因。因此,我们推测这些基因可能与酯的合成有很强的相关性。gydF4y2Ba

图9gydF4y2Ba
figure9gydF4y2Ba

候选基因的系统发育分析和11个功能gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba来自其他物种的基因。采用最大似然法构建系统发育树。GenBank登录号如下:gydF4y2BaHCBTgydF4y2Ba(Z84383),gydF4y2BaBanaat.gydF4y2Ba(AX0255O6),gydF4y2BaCM-AAT1gydF4y2Ba(CAA94432),gydF4y2BaPCAAT1gydF4y2Ba(AAS48090),gydF4y2BaMdAAT2gydF4y2Ba(AAS79797),gydF4y2Bampaat1.gydF4y2Ba(AY707098),gydF4y2BaRhAATgydF4y2Ba(AAW31498),gydF4y2BaFcAAT1gydF4y2Ba(FJ548610),gydF4y2Ba种子gydF4y2Ba(AAG13130),gydF4y2BaFVAAT.gydF4y2Ba(AAN07090),gydF4y2Bavaat.gydF4y2Ba(AX025504)gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba

的gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba超家族在各种酯合成途径中具有成员。这里,通过使用HMMER搜索检测其HXXXD和DFGWG主题,我们确定了717gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba来自七个蔷薇科物种的基因。相似的分类结果gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba],gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba梨的家庭编码基因分为五片枝条(I,II,III-A,IV和V)gydF4y2Ba.gydF4y2Ba此外,保守的主题分析这些gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba氨基酸序列表明,相同亚家族中的保守基序的类型和分布类似,表明分类结果是真实的。所有gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba家族成员中含有motif1 (HXXXD)或motif3 (DFGWG),占65.8%(114人中75人)。因此,我们假设基序(1和3)可能与催化活性有关。HXXXD催化基序位于溶剂通道中,也可使特定受体底物上的氧或氮原子去质子化[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba].DFGWG基序对反应至关重要,但其位置远离活性位点[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba42gydF4y2Ba,gydF4y2Ba43gydF4y2Ba].结合系统发育树分类方法和前人的研究结果,我们推测gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba与梨挥发性酯含量密切相关的基因,如gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba,属于支I和支IVgydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba参与酯类的合成,酯类用于确定花和水果的香味[gydF4y2Ba44gydF4y2Ba].目前,功能很多gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba果树的基因已经被确认,例如gydF4y2Bappaat1.gydF4y2Ba在桃gydF4y2Ba45gydF4y2Ba],gydF4y2BaFaaat2.gydF4y2Ba和gydF4y2Ba种子gydF4y2Ba在栽培草莓中[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba],gydF4y2Bampaat1.gydF4y2Ba在Apple [gydF4y2Ba25gydF4y2Ba] 和gydF4y2BaCmAAT1gydF4y2Ba,3,4的甜瓜[gydF4y2Ba46gydF4y2Ba,gydF4y2Ba47gydF4y2Ba].gydF4y2Ba

基因复制模式通常可以分为五种类型,WGD,PD,TD,DSD和TRD [gydF4y2Ba34gydF4y2Ba,gydF4y2Ba35gydF4y2Ba].每一种基因复制模式对基因家族扩展的贡献都不同[gydF4y2Ba48gydF4y2Ba].据估计,90%的基因在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba谱系是由于WGDs的结果[gydF4y2Ba49gydF4y2Ba].WGD、TD和DSD是真核生物基因组进化的主要特征,主要推动基因组和遗传进化系统新功能的发展[gydF4y2Ba50gydF4y2Ba,gydF4y2Ba51gydF4y2Ba].基因家庭,如gydF4y2Ba甜的gydF4y2Ba和羟基肉桂酰转移酶,主要通过WGD和DSD扩展[gydF4y2Ba52gydF4y2Ba,gydF4y2Ba53gydF4y2Ba].TD是扩张的主要力量gydF4y2BaAP2 /小块土地gydF4y2Ba和gydF4y2BaWRKYgydF4y2Ba基因家族(gydF4y2Ba54gydF4y2Ba,gydF4y2Ba55gydF4y2Ba].WGD和DSD扩增了两个基因家族,铝激活苹果酸转运体和热休克转录因子[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba,gydF4y2Ba39gydF4y2Ba].数字的数量gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba由于最近的WGD事件和古代多倍体事件,来自蔷薇科家族的7种植物中鉴定的基因不同。在本研究中,DSD和WGD被确定为扩展的主要力量gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba在苹果,欧洲梨和中国白色梨的基因。数字的数量gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba经历WGD和DSD的基因数量最多,其他复制方式的基因数量相对较少。另外,由于桃子、甜樱桃、草莓和甜樱桃近期未发生WGD事件,DSDs的数量占基因重复的很大比例。因此,苹果和梨的WGD模式占较大比例,可能是因为它们经历了两轮WGD [gydF4y2Ba40gydF4y2Ba].此外,基于KA,KS和KA / KS分析,我们发现,在桃子,黑覆盆子和甜樱桃中,WGD衍生的基因对的KS值大于1.3,表明它们被重复并从更古代保留并保留WGD事件。这进一步支持这些物种中没有更新的WGD事件。我们也发现了所有的gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba草莓,桃子和欧洲梨的基因对具有Ka / Ks <1,表明它们经历了强烈的净化选择。gydF4y2Ba

生物化学功能的多样性gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因已在许多物种中确定。例如,gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba酰基转移酶基因可以催化可卡因生物合成的最后一步[gydF4y2Ba56gydF4y2Ba,该蛋白在植物先天免疫中起重要作用[gydF4y2Ba57gydF4y2Ba].此外,gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba一些物种的基因功能已被确定。例如,gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba苹果中的基因,gydF4y2BaMdAAT2gydF4y2Ba,可以提供对应力的抵抗力,可以改变挥发性化合物剖面[gydF4y2Ba58gydF4y2Ba].在山番木瓜(gydF4y2BaVasconcellea pubescens.gydF4y2Ba),gydF4y2Bavpaat1.gydF4y2Ba参与酯的生物合成[gydF4y2Ba59gydF4y2Ba].尽管有不同的功能gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因家族成员,我们专注于酯合成的作用。由这些产生的挥发性酯类gydF4y2BaAAT.gydF4y2Ba基因通常促进植物的识别作为食物,因为它们有助于食用果实的“果味”香气,并且一些酯也是特定工厂的关键香料或嗅觉组分[gydF4y2Ba60gydF4y2Ba].在这项研究中,我们的RNA-seq数据显示,37gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba在梨果实发育的4个阶段均有不同水平的基因表达。令人惊讶的是,尽管缺少主题(DFGWG)gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba和gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba基因均在所有阶段表达。基于转录组表达谱结合酯含量分析,四种潜在基因(gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba和gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba选择QRT-PCR分析的属于片状I和IV,并且表现出与果实成熟过程中的酯含量变化的强烈相关性。四种基因的评估表达模式,gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba,基本上与RNA-SEQ数据一致。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

这里,我们确定了717gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba7个种中,114个属中国白梨。我们把gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba根据模式植物的分类结果,将超科植物分为五个大枝。gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba7种蔷薇科植物基因扩增,除少数Ka/Ks值大于1的基因对外,均经历了强烈的纯化选择。最后,经过RNA-seq数据和qRT-PCR分析,gydF4y2BaPBR020016.1.gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr029551.1gydF4y2Ba,gydF4y2BaPbr019034.1gydF4y2Ba和gydF4y2BaPBR014028.1.gydF4y2Ba被发现是与酯合成有关的候选基因gydF4y2Ba.gydF4y2Ba这些结果为进一步研究了香气生物合成和释放的分子机制的进一步研究提供了基础。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba

植物来源的gydF4y2Ba

“砀山酥里”[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]在南京江浦梨工程技术研究中心的梨种质果园的四个不同的发育阶段挑选了果实。在2017年7月26日(755家),六月二十七日(75个DAF)和2017年第6次(105个DAF)和第6次(145个DAF)中收集的水果样品。以前公布的RNA-SEQ数据用于分析表达模式‘Dangshan suli’BAHDgydF4y2Ba[gydF4y2Ba61gydF4y2Ba,gydF4y2Ba62gydF4y2Ba].所有样品均在液氮中研磨,保存于−80℃。梨基因组注释文件和基因组序列来源于南京农业大学梨基因组项目网站(gydF4y2Bahttp://peargenome.njau.edu.cngydF4y2Ba),以及其他四种蔷薇科植物的序列(gydF4y2BaFragaria vesca,Pyrus Communis,Prunus AviumgydF4y2Ba和gydF4y2Ba悬钩子属植物occidentalisgydF4y2Ba)下载自蔷薇科基因组数据库(gydF4y2Bahttp://www.rosaceae.orggydF4y2Ba).苹果的序列(gydF4y2BaM. Domestica.gydF4y2Ba)和桃子(gydF4y2BaP. PersicagydF4y2Ba)从联合基因组(gydF4y2Bahttp://www.jgi.doe.gov/gydF4y2Ba).gydF4y2Ba

序列识别和集合gydF4y2Ba

识别推定gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba来自梨和六种其他物种,桃子,苹果,草莓,欧洲梨,甜樱桃和黑覆盆子的基因,采用了几种方法。用一个gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba姓氏(PFAM:PF02458)作为根据HMM配置文件(PF02458)的查询序列gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba,我们使用e值<1e的HMM搜索候选基因gydF4y2Ba- 10.gydF4y2Ba.我们从Pfam网站下载了HMM档案(PF02458) (gydF4y2Bahttps://pfam.xfam.org/gydF4y2Ba).在线网站智能(gydF4y2Bahttp://smart.embl-heidelberg.de/gydF4y2Ba)的结构域PF02458gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba,然后检查他们的HXXXD和DFGWG主题。在线网站mafft(gydF4y2Bahttps://mafft.cbrc.jp/alignment/server/gydF4y2Ba)进行多序列比对,比对结果下载至GeneDoc (gydF4y2Bahttp://www.pscedu/biomed/genedoc.gydF4y2Ba).gydF4y2Ba

系统发生分析gydF4y2Ba

我们使用在线网站MAFFT进行多序列比对,然后将比对结果上传到IQ-TREE (gydF4y2Bahttp://www.cibiv.at/software/iqtree.gydF4y2Ba)[gydF4y2Ba63gydF4y2Ba].使用IQ-Tree用1000的引导构建ML系统发育树。为了验证ML系统发育树,使用Mega 7.0构建NJ系统发育树,引导为1000 [gydF4y2Ba64gydF4y2Ba].gydF4y2Ba

保守基序分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba家庭成员gydF4y2Ba

使用在线软件MEME (gydF4y2Bahttp://meme.sdsc.edu/meme4_3_0/intro.html.gydF4y2Ba).motif的最大值设置为20,motif的长度设置为6 ~ 200。gydF4y2Ba

基因复制模式的鉴定及共线性分析gydF4y2Ba

对7个蔷薇科基因组进行了基因重复分析,PGDD (gydF4y2Bahttp://chibba.agtec.uga.edu/duplication/gydF4y2Ba)在本地实施[gydF4y2Ba65gydF4y2Ba].一,染色体地点信息gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因家族成员和相关基因对信息来自每个物种的基因组注释文件,然后是本地化和同意gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba使用TB-Tools软件测定基因[gydF4y2Ba66gydF4y2Ba].McScanx进一步用于识别不同的复制模式gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba总科(gydF4y2Ba67gydF4y2Ba].gydF4y2Ba

计算Ka和KsgydF4y2Ba

使用Calculate_ka_ks_pipeline计算Ka,Ks和Ka / ks比率(gydF4y2Bahttps://github.com/qiaoxin/Scripts_for_GB/tree/master/calculate_Ka_Ks_pipelinegydF4y2Ba)[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba].简而言之,首先制备编码序列和基因对。然后,我们运行Computing_ka_ks_pipe.pl脚本以使用Mafft软件自动执行多次对齐,并将其转换为Kaks_calculator的输入[gydF4y2Ba68gydF4y2Ba],使用GMYN模型计算KA和KS。最后,可读结果,包括ka,ks,ka / ks和gydF4y2BaPgydF4y2Ba值,生成。gydF4y2Ba

表达分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba15个样本中gydF4y2BaP. Bretschneideri.gydF4y2BaqRT-PCR分析gydF4y2Ba

15'Dangshansuli'样本的RNA-SEQ数据用于分析'Dangshansuli'的表达模式gydF4y2BaBAHD,gydF4y2Ba包括fru_s1, fru_s2, fru_s3, fru_s4(来源于NCBI双项目PRJNA563942),根(数据未显示),茎,叶,芽,花瓣,萼片,子房,成熟花粉,水合花粉,花粉管和停止生长花粉[gydF4y2Ba61gydF4y2Ba,gydF4y2Ba62gydF4y2Ba].然后使用TB-Tools绘制基因表达热图[gydF4y2Ba66gydF4y2Ba].gydF4y2Ba

通过对梨果实4个发育阶段转录组与酯含量的相关性分析,筛选出5个可能的转录组gydF4y2BaAAT.gydF4y2BaQRT-PCR的基因。使用引物总理6.0设计所有可能基因的引物。使用植物总RNA分离套件加(富士,中国)提取总RNA,并使用转肌型单步GDNA去除和cDNA合成超混合物(Transgen,China)合成cDNA。PCR混合物如下:1μL感测和抗义引物(10μM),5μL荧光染料,1μL模板和3μL灭菌水。使用LightCycler 480 Sybrgreen I Master(Roche,USA)进行QRT-PCR。我们在下列条件下运行PCR反应:10分钟,在95℃下,接着是35℃的45℃,60℃,60℃,10s和72℃。然后,2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba△gydF4y2Ba△gydF4y2BaCT.gydF4y2Ba方法用于确定具有对小管蛋白和WD重复蛋白的参考基因的相对表达(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S9)。gydF4y2Ba

挥发性香气化合物分析gydF4y2Ba

SPME-GC方法用于测定来自中国白色梨的挥发性香气。组分浓度(μg/ g)= [内标部/峰面积的峰面积×内标(g / ml)×5μl] /质量样品(g)的浓度。内标3-unnone的浓度为0.82×10gydF4y2Ba−3gydF4y2Ba克/毫升(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba].采用65 μm厚的聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯(65 μm PDMS/DVB;Supelco Co, Bellefonte, PA, USA) [gydF4y2Ba6gydF4y2Ba].根据制造商的说明,纤维在取样前被激活。每次提取取5 g果肉放入20 ml螺旋盖顶空棕色小瓶中,加入5 ml NaCl溶液(0.36 g/ml),最后加入5 ul 3-nonanone溶液(0.82 g/l)作为内标[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba].混合物是放置在一个恒温水浴在40°C萃取纤维暴露在30分钟的顶部空间的样本分析物吸附,然后引入进气加热解吸的色谱仪在250°C模式的5分钟离了。具体的气相色谱-质谱联用条件如下:布鲁克320质量选择检测器与布鲁克450气相色谱联用,配备30 m × 0.25 um × 0.25 mm BR-5 MS(5%苯基聚甲基硅氧烷)毛细管柱。氦气作为载气,流速为1.0 ml/min。进样口温度为250℃,检测器温度为280℃。在70 eV的电子碰撞电离模式下记录了质谱。四极质量探测器和离子源的温度分别为150℃和230℃。传输线的温度为280℃。最后,通过将样品的质谱与数据系统库(NIST 2013)进行比较,初步确定了挥发性有机化合物[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba].gydF4y2Ba

可用性数据和材料gydF4y2Ba

目前研究中使用的梨基因组数据集可在我们的梨中心网站(gydF4y2Bahttp://peargenome.njau.edu.cn/gydF4y2Ba),另外四种Rosaceae物种序列(gydF4y2Ba草莓属vescagydF4y2Ba,gydF4y2BaPyrus Communis.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba普鲁尼乌斯唉gydF4y2Ba和gydF4y2Ba悬钩子属植物occidentalisgydF4y2Ba)从GDR下载(gydF4y2Bahttp://www.rosaceae.orggydF4y2Ba).苹果(gydF4y2Ba马吕斯有明显gydF4y2Ba)和桃子(gydF4y2BaPrunus PersicagydF4y2Ba)收集自JGI (gydF4y2Bahttp://www.jgi.doe.gov/gydF4y2Ba).RNA-SEQ数据从NCBI数据库获得(gydF4y2Bahttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/gydF4y2Ba).gydF4y2Ba

缩写gydF4y2Ba

AAT:gydF4y2Ba

醇酰基转移酶gydF4y2Ba

DSD:gydF4y2Ba

分散重复gydF4y2Ba

嗯:gydF4y2Ba

隐藏的马尔可夫模型gydF4y2Ba

ml:gydF4y2Ba

最大似然gydF4y2Ba

mya:gydF4y2Ba

几百万年前gydF4y2Ba

NJ:gydF4y2Ba

邻接gydF4y2Ba

PD:gydF4y2Ba

近端复制gydF4y2Ba

TD:gydF4y2Ba

串联重复gydF4y2Ba

TRD:gydF4y2Ba

转置重复gydF4y2Ba

WGD:gydF4y2Ba

全基因组复制gydF4y2Ba

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致谢gydF4y2Ba

作者要感谢为这篇文章提供贡献的人。gydF4y2Ba

资金gydF4y2Ba

国家重点研发计划项目(no . 2018YFD1000200);国家自然科学基金项目(no . 31701890, no . 31601708);中央高校基本科研业务费专项资金(no . KJQN201818)。关键词:岩石力学,岩石力学,数值模拟,数值模拟这些资助为研究项目提供了资金支持,但不涉及项目设计、数据收集、分析或手稿的准备。gydF4y2Ba

作者信息gydF4y2Ba

从属关系gydF4y2Ba

作者gydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

构思和设计实验:HY和SZ。执行实验:CL,QL,XW,YC和JW。分析了数据:CL,QL,WZ,SW,HY和XQ。写了论文:CL,XQ,HY和SZ。所有作者都读过并批准了稿件。gydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应于gydF4y2Ba郝寅gydF4y2Ba或gydF4y2Ba张张gydF4y2Ba.gydF4y2Ba

道德声明gydF4y2Ba

伦理批准和同意参与gydF4y2Ba

本研究所使用和分析的梨材料均来自南京农业大学梨工程技术研究中心,均为公共非商业用途。这篇文章没有包含任何作者对人类参与者或动物进行的研究。gydF4y2Ba

同意出版物gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

利益争夺gydF4y2Ba

两位作者宣称他们没有相互竞争的利益。gydF4y2Ba

附加信息gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Ba

施普林格《自然》杂志对已出版的地图和机构附属机构的管辖权要求保持中立。gydF4y2Ba

补充信息gydF4y2Ba

额外的文件1:gydF4y2Ba

表S1。gydF4y2Ba所有已识别的基因列表和基本特征gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因。gydF4y2Ba表S2。gydF4y2Ba用模因工具鉴定梨的Motif序列gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba年代。gydF4y2Ba表S3。gydF4y2Ba所有已识别的基因重复事件的信息gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因。gydF4y2Ba表S4。gydF4y2Ba共线性关系gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba相同物种的基因。gydF4y2Ba表S5。gydF4y2BaKa,Ks和Ka / ks重复基因对中的值gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba.gydF4y2Ba表S6。gydF4y2BaTPM值gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba梨中的基因。gydF4y2Ba表S7。gydF4y2Ba中国白梨不同发育阶段的全酯含量。gydF4y2Ba表S8。gydF4y2Ba被鉴定为酯类的分子列表。gydF4y2Ba表S9。gydF4y2Ba中国白梨中候选基因QRT-PCR的引物gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba基因家庭。gydF4y2Ba

额外的文件2:gydF4y2Ba

图S1。gydF4y2Ba系统发育分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba从gydF4y2BaArabidopsis,Pyrus BretschneiderigydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树。gydF4y2Ba软件Mega 7.0用于构建系统发育树。氨基酸序列gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树gydF4y2Ba均从植物菌群(gydF4y2Bahttps://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html#gydF4y2Ba).gydF4y2Ba

额外的文件3:gydF4y2Ba

图S2。gydF4y2Ba系统发育分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2Ba从gydF4y2Ba拟南芥,Pyrus普通的gydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树。gydF4y2Ba软件Mega 7.0用于构建系统发育树。氨基酸序列gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2Ba杨树gydF4y2Ba均从植物菌群(gydF4y2Bahttps://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html#gydF4y2Ba).gydF4y2Ba

权利和权限gydF4y2Ba

开放获取gydF4y2Ba本文根据创意公约署署署的条款分发了4.0国际许可证(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/gydF4y2Ba),它允许在任何媒体上无限制地使用、分发和复制,前提是你给予原作者和来源适当的荣誉,提供一个到知识共享许可协议的链接,并指出是否作出了更改。创作共用及公共领域专用豁免书(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/gydF4y2Ba)适用于本条提供的数据,除非另有说明。gydF4y2Ba

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刘,C.,Qiao,X.,Li,Q.gydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba基因组广泛的比较分析gydF4y2BaBAHDgydF4y2BaSuperfamily在七种玉米杆菌物种和梨中表达分析(gydF4y2BaPyrus bretschneiderigydF4y2Ba).gydF4y2BaBMC植物杂志gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba14(2020)。https://doi.org/10.1186/s12870-019-2230-z.gydF4y2Ba

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  • BAHDgydF4y2Ba
  • 梨gydF4y2Ba
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