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PT-Flax(亚麻的表型和TILLinG):一种亚麻(亚麻属植物usitatissimumL.)突变群体和正向和反向遗传TILLinG平台

摘要

背景

亚麻(亚麻属植物usitatissimum是一种经济上重要的纤维和油料作物,已经种植了数千年。基因组最近进行了测序,转录组学正在提供可能与农学重要性状相关的候选基因的信息。为了加速这些基因的功能表征,我们已经产生了一个亚麻EMS突变群体,可以用作TILLinG(靶向诱导局部病变基因组)平台的正向和反向遗传学。

结果

用3种不同浓度的EMS(0.3%、0.6%和0.75%)培养4894个M2突变种子家族,用于M2植株的表型分析和DNA提取。共有4033科(10839株)M2活株,其中1552科(38.5%)表现出视觉发育表型(茎粗、株型、花相关)。这些家族中的大多数表现出不止一种表型。突变表型数据被组织在一个数据库中,可以在UTILLdb (http://urgv.evry.inra.fr/UTILLdb).对非典型纤维和种子表型也进行了初步筛选。从3515个M2家族中提取基因组DNA,并进行8倍汇总,用于随后的ENDO1核酸酶错配切割检测突变体。为了验证收集的反向遗传学,对木质素生物合成途径的两个基因编码酶进行了DNA池筛选:Coumarate-3-Hydroxylase摘要:),肉桂醇脱氢酶计算机辅助设计).我们发现了79和76个突变摘要:计算机辅助设计基因,分别。平均突变率计算为1/41 Kb,每个基因组约有9000个突变。52根亚麻中的35根计算机辅助设计含有错义或密码子停止突变的突变家族表现出典型的橙棕色木质部表型计算机辅助设计其他物种的下调/突变植物。

结论

我们开发了一个可以作为有效的正向和反向遗传工具的亚麻突变群体。该集合具有极高的突变率,通过筛选相对较少的M2家族,可以检测到大量独立的突变家族。该种群将被证明是基础研究和鉴定亚麻作物改良的重要农艺学基因的宝贵资源。

背景

亚麻(亚麻属植物usitatissimum是一种重要的经济油料和纤维作物,已被人类驯化和种植了数千年。从亚麻籽(亚麻籽)中提取的油是omega-3脂肪酸、α-亚麻酸(ALA)的重要来源,亚麻籽还含有对人体健康有益的生物活性木脂素[1]。亚麻韧皮部纤维的细胞壁富含纤维素,用作纺织品(亚麻)和增强复合聚合物,作为玻璃纤维的环保替代品[2]。亚麻也被用作生物学模型,研究不同纤维物种(如亚麻、大麻、黄麻、红麻等)低聚化次生细胞壁形成的分子机制[3.- - - - - -6]。

最近,许多不同的亚麻资源和方法,包括高密度微阵列平台,物理和遗传图谱,分子标记,代谢组学和蛋白质组学[6- - - - - -12已经发展起来。最近的基因组测序[13]也为亚麻基因组学开辟了道路,导致基因和基因家族结构鉴定的快速发展[1415]。然而,虽然所有这些方法都允许鉴定大量可能参与各种不同生物过程的基因,但确认其生物学作用需要功能表征。亚麻可以进行基因工程改造,该物种中有限数量的基因已被上调/下调,从而提供了这些基因作用的重要功能信息[51617]。为了加速对不同农艺性状相关基因的功能鉴定,我们开发了一个化学诱变(EMS)亚麻种群和TILLinG (targeted Induced Local lesion In Genomes)平台。

TILLinG (Targeting Induced Local lesion IN genomics)是一种高通量的反向遗传方法,用于在突变群体中获得靶向突变基因的等位基因系列[1819]。化学诱变是T-DNA插入或辐射等其他方法的补充,已广泛应用于不同的植物物种[20.- - - - - -24]。目前,最常用的检测方法依赖于使用特异性错配内切酶ENDO1来检测化学诱导的snp。然而,NGS技术的高通量测序结合变异检测算法也开始用于检测这类突变[2526]。在亚麻中开发这种方法是及时的,因为尽管该物种可以通过农杆菌属,这个过程既费时又效率较低[27]。乙烷甲基磺酸钠(EMS)以前曾被用作化学诱变剂引入亚麻的遗传变异,但尚未用于反向遗传[28]。

在本文中,我们介绍了一个亚麻EMS诱变群体的发展和特性。并成功鉴定了大量的视觉表型计算机辅助设计摘要:木质素基因突变体验证了我们的种群作为一种有价值的正向和反向遗传学工具的使用。在后续的研究中利用这一种群将极大地促进这一重要经济物种中不同靶基因的功能表征。

结果

亚麻EMS突变体群体的产生及表型分析

初步测试和压井曲线分析(附加文件)1)在亚麻(亚麻属植物usitatissimumL. cv Diane)种子,以确定合适的EMS浓度,如前所述[29- - - - - -32]。在此基础上,采用0.3%、0.6%和0.75% 3种不同浓度的EMS诱变了1万粒亚麻种子。这些诱变的种子被播种,产生了5000株M1植株。从M1植株中采集M2种子,将M1植株单株产生的所有种子汇集起来,构成相应的M2科。通过对M1植株的种子采集,获得不同种子科4894 M2,作为亚麻分蘖资源的基础。

每个M2科各取5粒(0.3、0.6% EMS)和3粒(0.75% EMS)种子,在温室条件下种植,产生M2植株,进行表型分析和DNA提取。共有10,839 M2植物分布在4,033个科(0.3% - 1,700个科,0.6% - 1,409个科,0.75% - 924个科),见表1、附加文件2)。861个M2科(17.6%)种子不萌发。所有M2植株在6个主要类和13个亚类的基础上进行了表型分析(表2)2),发芽后2个月。将突变家族与在相同温室条件下生长的WT植株进行比较。

表1不同EMS浓度下M2突变体群体组成及不育率
表2用于描述亚麻M2突变群体的表型分类标准

在4033个M2家族中,1552个(38.5%)表现出视觉表型(图2)12).最具代表性的表型是茎(大小和直径占65%)、叶(形状和颜色占46.1%)和植株结构(分枝节间大小占26.1%),其次是花相关表型(开花后期和/或果实形成、颜色、形态占9%)、下胚轴大小占3.5%)和子叶(形状和数量占1.8%)。大多数(55.2%)家族表现出多重表型修饰(图2)1).大约8.6% (937)M2植株是不育的,分析表明,不育性随EMS浓度的变化而变化,范围从6.31% (0.3% EMS)到18.36% (0.75% EMS)1).

图1
图1

亚麻M2突变体在不同视觉表型类别中的分布。蓝色列=多表型,橙色列=单表型,数字表示给定类别中显示多/单表型的M2家族数量。

图2
figure2

亚麻表型突变的例子。一)花瓣颜色改变的开花突变体;b)白色突变体;c)有额外生殖器官和非生殖器官的开花突变体;d)具有分枝和茎大小变化的突变体;e)叶片形态改变的突变体(卷叶);f)节间减少的突变体;g)叶片形态改变的突变体(拉长的琵鹭形状)。

有关亚麻突变表型的数据已被引入到UTILLdb数据库中,并可在网站上查阅http://urgv.evry.inra.fr/UTILLdb

亚麻木质素基因TILLinG

在反向遗传方面,采集M2植株单株叶片,按科汇总提取DNA。收集M3种子用于长期储存和生产进一步的材料。为了估计突变密度并验证该物种种群的未来反向遗传,对两个基因进行了tiled。由于亚麻的种子和韧皮纤维都是栽培的目的,而细胞壁木质素含量是影响韧皮纤维品质的重要因素,因此我们决定TILL两个木质素基因(coumarate-3-hydroxylase,影响肉桂醇脱氢酶).C3H在单木质素生物合成途径的早期起作用,在G和S木质素单体的生产中起关键作用,而CAD则催化木质素单体(单木质素)生产的最后一步[33]。

基于现有序列数据(http://www.phytozome.net/),三摘要:和17计算机辅助设计在亚麻基因组中可以鉴定出基因。为摘要:我们决定筛选[Phytozome: Lus10033524]的突变拟南芥CYP98A3 [Tair: At2G40890.1]参与木质素和类黄酮的生物合成[j]34]。为了鉴别亚麻计算机辅助设计我们建立了一个包含CAD蛋白的系统发育树拟南芥杨树trichocarpa亚麻属植物usitatissimum(图3.).CAD蛋白可分为5类[35具有1类蛋白质参与木质素化的功能证据。四个LuCAD因此,我们决定在亚麻基因[phytozome: Lus10027864]中筛选与AtCAD4 [Tair: AT3G19450.1]和AtCAD5 [Tair: AT4G34230.1]相似性最高的突变。

图3
图3

的根系统发育树(具有默认参数的clustalW程序)拟南芥杨树和亚麻属植物usitatissimumL. CAD蛋白。选择用于突变发现的亚麻CAD蛋白用红色下划线表示。

使用CODDLE程序(密码子优化发现有害病变)结合PRIMER 3工具来定义我们两个基因内有害G/C到a /T转换概率最大的区域,并设计与ENDO1方法兼容的PCR引物。该区域面积为1077 Nt (1170-2247)摘要:[Phytozome: Lus10033524]基因。为计算机辅助设计CODDLE基因[Phytozome: Lus10027864]定位于基因组序列中38 - 1336位之间的区域,与脱氢酶醇结构域相对应。然而,给定不同亚麻之间的序列冗余计算机辅助设计在这个区域中,我们选择了828和1791之间的区域作为目标。该区域由参与辅因子结合的核苷酸结合区域和参与底物结合的催化区域组成[36]。

共计150个计算机辅助设计摘要:如前所述,通过筛选带有错配特异性内切酶ENDO1的突变获得突变[37]。在0.3%、0.6%和0.75%的EMS群体中分别检测到63个、49个和39个突变。一个计算机辅助设计家族(0.6%)包含2个突变。突变密度在1/49 kb和1/30 kb之间变化,这取决于EMS剂量,平均每41 kb有1个突变。

几乎所有突变都是G/C到A/T的转变,正如EMS突变所预期的那样[38]并且只有一个突变涉及A/T到G/C的转变,这很可能是由于在先前的研究中已经观察到的低频ems介导的腺嘌呤向3-甲基腺苷的转化以及随后与胞嘧啶的配对[39]。外显子突变中,66.7%为错义突变,27.6%为沉默突变,5.7%为截断突变(表2)3.).突变饱和度(蛋白水平)分别为22.15%和15.35%计算机辅助设计摘要:分别扩增子。突变沿两个扩增子有规律地分布,但这些区域的G和C核苷酸减少导致内含子减少(图2)4).

表3基因突变的特征计算机辅助设计摘要:扩增子
图4
装具

内部突变的分布计算机辅助设计摘要:扩增子。一)突变沿扩增子分布的示意图。内含子和外显子分别用黑线和蓝框表示。错义、沉默和截断突变分别用黑色三角形、灰色三角形和星号表示。b)突变数与G + C含量的关系。扩增子被分成100 bp片段,并测定[G + C]和突变的数量。内含子用浅蓝色阴影表示。

EMS对G/C碱基对的作用受当地环境的影响

为了研究局部环境对EMS定向G/C向A/T转变的影响,我们分析了突变G碱基两侧的核苷酸组成[4041)(图5).在-1位置,G出现频率高于预期(1.3倍),T出现频率低于预期(0.8倍);在+1位置,A出现频率高于预期(1.2倍),C出现频率低于预期(0.8倍),与之前的结果一致[4041]。我们还观察到在由-1组成的观察到的和预期的三胞胎之间存在偏差;0和+1核苷酸(表14).四个突变三胞胎是GGG、CGT、AGA和GGA,而四个突变三胞胎是AGT、CGC、TGT和CGG,对应于嘌呤碱基在过度代表的三胞胎中频率更高,而嘧啶碱基在不足代表的三胞胎中频率增加。

图5
figure5

期望和观测到的基频在g附近。C、G、T、A碱基在所有G或所有突变G周围的预期频率(左列)和观测频率(右列)。预期频率和观测频率之间的差异≥15%用星号表示。

表4三联体基序的频率集中在所有g和突变g上。通过比较两个扩增子中以突变G为中心的特定三联体的频率与以任何可用G为中心的相同三联体的频率,获得比率

从基因型到表现型

鉴别出大量亚麻的计算机辅助设计摘要:然后,我们希望知道这些突变是否与在下调植物或其他物种的自然突变中常见的表型改变有关。这些数据也将在很大程度上有助于验证我们的突变群体对亚麻功能基因组学的兴趣。为此,我们决定将重点放在计算机辅助设计突变自自然计算机辅助设计突变和下调计算机辅助设计其他物种的植物表现出一种特征和容易观察到的红棕色木材,称为“棕色中脉”表型。这种颜色主要是由于木质素聚合物中积累了大量的肉桂醛,而不是更常见的肉桂醇[42- - - - - -48]。与此形成鲜明对比的是摘要:其他物种的下调与木质素结构的改变有关,但没有可见的表型[49]。通过对52个M2突变型CAD家族(108株)的茎横截面进行观察,发现存在错义或停止密码子突变,从而鉴定出62株(属于35个家族)具有棕色中脉表型(表型频率= 0.57)。对33个非cad突变家族(94株)的随机亚组进行比较筛选,发现6株植物具有弱棕色中脉表型(表型频率= 0.06)。这些数据有力地支持这样的观点,即观察到的棕色中脉表型是由目标亚麻内的突变引起的计算机辅助设计基因。

然后根据木质部组织橙棕色的强度将个体分为3类(图2)6).第一组对应最显著的表型,包含9个突变家族的11个个体(8个错义突变和1个密码子停止突变)。这些突变体的特征详见表5。利用SIFT软件对不同错义突变的潜在影响进行评估。http://sift.jcvi.org/)和PARSESNP软件(Project Aligned Related Sequences and Evaluate SNPs;http://www.proweb.org/parsesnp/)以提供基于对齐块的位置特定评分矩阵。8个错义突变中的5个通过PARESSNP获得PSSM评分(表2)5).G176R和P280L突变没有得到评分,很可能是因为缺乏比对块。除了密码子停止突变外,6个PSSM中有4个得分足够高,表明在相应的突变体中CAD蛋白活性可能受到负面影响。另一方面计算机辅助设计突变体(类别0,2和3),33%的预测评分(PSSM和Sift)与观察到的表型一致(附加文件3.).

图6
figure6

亚麻褐色中脉表型计算机辅助设计突变体。在…茎中观察到的棕色中脉表型的例子计算机辅助设计突变体线。根据表型强度将突变体分为4类(1 =强,2 =中,3 =弱,0 =缺失)。野生型亚麻茎。Bar = 2mm。

表5显示1类棕色中脉表型的CAD突变系的PSSM/Sift评分

讨论

亚麻是一种古老的作物,因其纤维和种子而被长期种植。目前的育种计划旨在提高纤维和种子的产量和质量,以及增强对不同病原体的抵抗力。最近对亚麻基因组进行了测序[13],已经开发了物理和遗传图谱,并确定了SNP标记[10]。此外,亚麻特异性微阵列、蛋白质组学和代谢组学[67125051也被用来增加我们对亚麻生物学的了解。在本文中,我们报告了一个亚麻TILLinG平台的发展,为正向和反向遗传这一重要的经济物种。对4,033个独立突变家族进行了表型分析,并将结果组织在tildb数据库中(http://urgv.evry.inra.fr/UTILLdb).UTILLdb是一个开放的表型和基因组突变数据库,包含豌豆突变群体的信息[37],短掌[52],番茄[53和亚麻(本文)。将我们的数据整合到tildb中,将使亚麻育种者和研究亚麻模型的科学家能够在数据库中搜索特定的突变表型。例如,显示茎/纤维形态改变的突变体的详细特征(图2)27)和/或花/种子修饰(图1)28)将证明对纤维形成和种子油/木脂素生物合成感兴趣的科学家和育种者特别感兴趣。数据库将更新特定基因的突变信息,科学家将能够通过序列同源性和/或关键字查询来访问这些信息。

图7
figure7

在韧皮纤维中显示形态改变的亚麻突变体的例子。一)突变体纤维数低,次生细胞壁薄;b)突变体纤维束无组织,含有空洞和具有宽管腔的薄壁纤维;c)纤维含有宽管腔的突变体;d)具扁平韧皮纤维的突变体;e)纤维束紊乱的突变体,含有宽的管腔和薄的次生细胞壁。用间苯三酚- hcl染色成熟亚麻茎的徒手横截面,木质化的细胞壁呈红色。Bar = 0.1 mm。

图8
figure8

在突变群体中观察到的种子和花表型的例子。突变体的种子呈现出不同的颜色,从深黄色(一)到深黑(e)在颜色变化之间(bc)包括野生型(d)(Bar = 0.5 cm)。突变体的花呈现不同的颜色,从白色(g)到parme变化(fh)。形状异常的突变体花(我jk)。4 .形状变异的变种种子(左米)(Bar = 0.5 cm)。2个特定突变体之间的5-种子大小差异(no)(Bar = 0.5 cm)。突变体的种子或多或少充满(p问)(Bar = 0.5 cm)。

为了验证突变体收集作为一种有效的反向遗传学工具,我们从3,515个品系中提取了DNA,并成功地使用ENDO1酶对木质素生物合成中涉及的2个基因进行了TILLed,如前所述[3754]。结果表明,该群体的平均突变率为1/41 Kb。与在其他ems产生的突变群体中观察到的突变率相比,这是一个很高的值(表1)6),并且与观察到的值相似小麦l;芸苔属植物显著l;燕麦属漂白亚麻纤维卷小麦属植物硬质l然而,所有这些种群都是多倍体,这使得它们能够忍受功能丧失的突变[55]。以前在二倍体物种中获得的最高突变率是在小麦属植物monococcum(1/92 Kb)和拟南芥(1/89 Kb),约为我们在亚麻种群中观察到的一半。

表6不同已发表的EMS植物群体的突变频率和倍性水平

基因组大小约为370mb [13我们可以估计每个基因组平均会有大约9000个突变。尽管这一数值很高,但M2群体中的大多数(81.6 - 93.7%)是有活力的,并且产生了种子,这表明亚麻植株可以支持高水平的突变[55]。虽然每个基因组的高突变数可能被认为是一个缺点,因为需要更多的回交来减少总突变数,并通过定位克隆方法识别与特定表型潜在相关的基因,但它也有许多优点。首先,它大大减少了需要筛选以确定突变的家庭数量。例如,计算表明,鉴定1 Kb外显子靶点的错义突变只需要筛选56个家族,鉴定密码子停止突变只需要筛选650个家族,从而减少了鉴定突变体所花费的总体时间和成本。其次,高突变率允许在反向遗传策略中识别大量独立的突变家族。例如,对我们的总人口进行筛选,我们确定了67人计算机辅助设计突变体(仅外显子)和74摘要:突变体(仅外显子)。随后对不同品系中相似表型修饰的表征和鉴定为基因突变与所观察到的表型之间的联系提供了强有力的证据。这在我们的观察中得到了清楚的证明计算机辅助设计在52个家族中,有35个(71%)的突变体显示错义或密码子停止突变计算机辅助设计基因显示了在其他基因中观察到的木质部组织的橘黄色特征计算机辅助设计下调或突变植物[42- - - - - -48]。尽管先前有报道称亚麻RNAi植物中CAD下调与木质素减少有关,但令人惊讶的是,作者没有报道棕色中脉表型的存在/缺失[16]。这可能与这些植物中相对较高的残留活性(60-80%)有关。

我们M3的初步分析计算机辅助设计突变(数据未显示)表明该突变是可遗传的,可分离的,并且可以与棕色/橙色木质部相关,进一步建立了突变与亚麻种群表型之间的联系。湿化学和光谱学将证实这些突变体细胞壁木质素的结构修饰。类似的技术也将用于研究亚麻中木质素聚合物的潜在变化摘要:突变体。该基因在其他物种中的下调与木质素缩聚增加和木质素G和S单位减少有关[4978]评估亚麻木质素的效果将特别有趣,因为亚麻木质素已经高度浓缩,含有少量的S木质素[3.]。

结论

综上所述,所产生的亚麻EMS群体为该物种的正向遗传和反向遗传提供了重要的生物资源。大量表现出生物学上有趣表型的突变体已经被鉴定出来,并且基因已经成功地利用ENDO1进行了tiled。进一步的靶标可以从文献中确定,以及基于最近在亚麻中进行的转录组学研究,这些研究已经确定了可能参与各种生物过程的不同基因[679]。利用亚麻EMS群体来鉴定突变体将大大加快对该作物物种中农学上感兴趣的基因的功能表征。为了加速我们亚麻EMS群体的突变体鉴定,我们目前正在开发一种基于NGS的高通量测序方法。

方法

诱变与植物生长条件

十批一百粒种子(紫檀。cv Diane)用8种不同的EMS浓度(0.25、0.3、0.5、0.6、0.75、0.8、1.0和2.0%)处理。对两批不同EMS浓度(5 h: 0.3、0.6、0.8、1.0、2.0% EMS;8 h: 0.25、0.5、0.75、1.0、2.0% EMS)。以未经处理的种子为对照。所有种子用自来水冲洗(3 × 5分钟,1 × 30分钟),然后转移到湿润的Whatman纸上,在培养皿中培养,在20°C光周期8 h。以发芽率为基础,选择0.3% EMS/5 h、0.6% EMS/5 h和0.75% EMS/8 h 3个处理,分别代表发芽率和突变率之间的不同平衡。诱变种子(M1)在田间播种,用于M2制种。收集的M2种子与WT种子一起在温室条件下播种,进行表型分析和DNA提取。M2和M3种子在4℃低湿条件下保存,构成EMS亚麻突变体集合。

正向遗传筛选

发芽2个月后,对M2家族进行了与野生型不同的表型评分。对每个家庭中受影响最大的个体进行了详细的表型分析和拍照。为了鉴定棕色中脉表型,用单根制作了徒手切片计算机辅助设计在立体显微镜下比较突变家族植物和对照部分。木质部组织中棕黄色的存在被认为是褐色中脉表型的指示,根据颜色的强度从1到3进行标记,其中1是最强烈的。一个家族的类别是在属于该家族的任何单个个体中观察到的最强烈的表型。

基因组DNA提取和汇集

从M2植株上收集叶片材料,按科收集,然后在通风烘箱中65°C干燥过夜。总DNA的提取方法:采用丹麦Plant 96 Qiagen试剂盒(Qiagen, Hilden, Germany)或Carrier等人描述的方案。79]。在0.8%琼脂糖凝胶上电泳检测每次提取的DNA质量。用Picogreen (InVitrogen)对3515个M2家族的DNA进行定量,采用M1000微孔板阅读器(TECAN-Switzerland),归一化至1 ng.μL1并通过8倍池化策略排列在总共5个96孔板中(附加文件)4),使用GENESYS 150工作站(tecan - swiss)。

PCR扩增和突变检测

PCR扩增基于巢式PCR和通用引物[80]。第一次PCR扩增使用1 ng基因组DNA和目标特异性引物(表2)7),体积25 μl。然后将第一次PCR反应的1微升用作第二次PCR反应的模板,使用两组引物:携带通用M13尾部的目标特异性引物和在5 '端标记有红外染料IRD700和IRD800的M13通用引物(LI-COR, Lincoln, NE, USA)。每个引物体积为0.1 μM,体积为25 μL,采用以下两步程序进行扩增:94°C, 3分钟;在94°C下进行10次循环20 s,引物特定退火温度为30 s, 72°C为1 min;在94°C下循环20秒,50°C下循环30秒,72°C下循环1分钟;然后在72°C下延长5分钟。在琼脂糖凝胶上验证PCR扩增结果。使用LI-COR 4300 DNA分析仪检测突变,如前所述[66]。单个M2家族的DNA测序证实并表征了个体突变。

表7TILLinG实验用引物

生物信息学序列分析

CAD蛋白的系统发育分析使用clustalW程序,默认参数为(http://www.clustal.org/clustal2/).利用codle工具分别设计待tiled基因区和扩增引物(用于发现有害病变的优化密码子http://www.proweb.org/coddle/引物3和OligoCalc体系(http://www.basic.northwestern.edu/biotools/oligocalc.html).利用SIFT软件对错义突变的潜在影响进行评估(从耐受到不耐受;http://sift.jcvi.org/)和PARSESNP软件(Project Aligned Related Sequences and Evaluate SNPs;http://www.proweb.org/parsesnp/).

支持数据

亚麻表型数据可在tildb (http://urgv.evry.inra.fr/UTILLdb).

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下载参考

致谢

Max。圣歌。感谢北加来海峡共和国和里尔第一大学为博士学位提供的财政支持。SH感谢法国国家研究机构(ANR)对pt -亚麻项目(ANR-09- genm -020-005)的财政支持。

男人。闲谈,聊天我要感谢S.K. Samanta博士、Charles Spillane教授(NUIG)和Anish Kumar就亚麻、突变种群的产生和实验性EMS剂量试验提供的一般性建议。

作者要感谢所有对亚麻植物的收集和表型分析做出贡献的人(Stephane fsamnart, Anne-Sophie Blervacq, Rudy Huis, Guillaume Beaumont, Charles-Henri Biard, Laurent Rigolle, gsamraldine Dambrey, Godfrey neuttings, Michel Burtin, Romain Boucly, valsamrie Devillers, Clarisse Toitot, ssambastien Acket, Melha Lazouk, Thi Mai Huong to, Elis elkassis, Pascal Boulnois)。

作者信息

从属关系

作者

相应的作者

对应到西蒙·霍金斯

额外的信息

相互竞争的利益

作者宣称他们没有竞争利益。

作者的贡献

MChant。参与植物表型分析和样品采集。他做纤维筛选和显微镜,为tiltildb集中数据,提取DNA,所有TILLinG实验和数据解释。他写了手稿。SG管理植物表型和样品采集的组织,参与样品采集、数据集中和DNA提取。LG参与了植物表型分型、样品采集、DNA池归一化和定稿检查。MD为ENDO1 TILLinG提供了科学专业知识和实际帮助,并检查了最终稿件。RT负责温室/田间突变株的生产,参与植物表型分析和样品收集,并检查最终稿件。J-PT管理温室/田间突变植株生产。BT和OvW参与植物表型分析,关注种子收集,对所有种子库进行表型分析。 MChat. Designed the EMS pilot dose experiments, selected the doses and checked the final manuscript. XG represented Laboulet in the PT-Flax consortium. VB organized the phenotypic data set in the UTILLdb web site. AB provided scientific expertise and advice on TILLinG and checked the final manuscript. BC, HD, CT, CP, CP-L, BT, OvW participated in plant growth, phenotyping and sample collection and checked the final manuscript. SH conceived and managed the PT-Flax project, participated in plant phenotyping and sample collection and edited the final manuscript. All authors read and approved the final manuscript.

电子补充资料

亚麻的EMS杀伤曲线分析

附加文件1:(紫檀。(Diane)种子。(pdf 15kb)

附加文件2:每个M2家族表型的单株数量。(pdf 185kb)

CAD突变系的PSSM/Sift评分和表型。

附加文件3:分别使用PARSESNP和Sift程序获得PSSM分数和Sift分数。粗体文本的分数被认为对蛋白质活性有害,而正常文本的分数被认为没有影响。没有得分的突变是由于缺乏给定位置的对齐块。在不同的CAD突变系中,棕色中脉表型(橙色木质部)的强度(0,1,2,3)在“表型类别”栏中表示,对应于图5。0类对应wt表型。ND =未确定。突变(第一列)后括号内的数字表示独立发现特定突变的家族数。括号中没有数字表示该突变只在一个家庭中发现。(pdf 8kb)

附加文件4:8倍1d池方案。(pdf 48kb)

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Chantreau, M., Grec, S., Gutierrez, L.。et al。PT-Flax(亚麻的表型和TILLinG):一种亚麻(亚麻属植物usitatissimumL.)突变群体和正向和反向遗传TILLinG平台。BMC Plant Biol13日,159(2013)。https://doi.org/10.1186/1471-2229-13-159

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关键字

  • 亚麻
  • 耕作
  • 突变体
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  • 木质素
  • 木酚素
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