拟南芥gydF4y2Ba的基因,gydF4y2BaAtNPR1, AtTGA2gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtPR-5gydF4y2Ba，对大豆囊线虫具有部分抗性(gydF4y2Ba异皮线虫属甘氨酸gydF4y2Ba)在转基因大豆根系中过表达gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

使用模型系统进行广泛研究gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba植物防御信号通路网络研究表明，水杨酸(SA)是触发植物对生物营养型和半生物营养型病原体防御反应的关键激素，茉莉酸(JA)及其衍生物是触发植物对坏死性病原体防御反应的关键激素。一些报告证明SA限制线虫繁殖。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

在这里，我们翻译从研究中获得的知识gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba大豆。三十一的能力gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba编码大豆囊线虫(SCN)抗性中SA和JA合成和信号传导的重要成分的基因:gydF4y2Ba异皮线虫属甘氨酸gydF4y2Ba)进行调查。我们证明了31个中3个的过度表达gydF4y2BaArabidoposisgydF4y2Ba复合植物转基因大豆根中的基因使SCN形成的包囊数量减少到对照根(即AgydF4y2BatNPR1gydF4y2Ba(33%),gydF4y2BaAtTGA2gydF4y2Ba(38%)和gydF4y2BaAtPR-5gydF4y2Ba(38%)。三个额外的gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因使SCN囊肿数量减少40%或更多:gydF4y2BaAtACBP3gydF4y2Ba(控制值的53%)，gydF4y2BaAtACD2gydF4y2Ba(55%)和gydF4y2BaAtCM-3gydF4y2Ba(57%)。其他影响较小或没有影响的基因包括gydF4y2BaAtEDS5gydF4y2Ba(77%),gydF4y2BaAtNDR1gydF4y2Ba(82%),gydF4y2BaAtEDS1gydF4y2Ba(107%)和gydF4y2BaAtPR-1gydF4y2Ba(80%)，与对照组相比。过度的gydF4y2BaAtDND1gydF4y2BaSCN囊肿数量的大量增加(对照的175%)表明敏感性大大增加。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

从模型系统的研究中获得的病原体防御系统的知识，gydF4y2Ba拟南芥,gydF4y2Ba可以gydF4y2Ba直接gydF4y2Ba翻译成大豆通过直接过度表达gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因。当基因，gydF4y2BaAtNPR1 AtGA2,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtPR-5,gydF4y2Ba编码SA调控、合成和信号转导的特定成分，在大豆根系中过表达，对SCN的抗性增强。这说明了某些功能的兼容性gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba与大豆基因和鉴定基因可能用于工程对线虫的抗性。gydF4y2Ba

植物寄生线虫每年在全球造成数十亿美元的损失[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba］．根结线虫，属gydF4y2Ba有gydF4y2Ba，攻击超过3000种植物[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]，而大豆囊线虫(gydF4y2Ba异皮线虫属甘氨酸gydF4y2Ba)的宿主范围要窄得多，每年在美国造成近10亿美元的损失[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba］．虽然一些大豆基因型对特定的SCN群体具有抗性，但没有已知的大豆基因型对所有SCN群体具有抗性。几个基因赋予部分gydF4y2BaRgydF4y2Baesistance来gydF4y2BaHgydF4y2BaeteroderagydF4y2BaggydF4y2Ba甜菜碱gydF4y2Ba(Rhg)已被绘制，最近，rhg1和Rhg4位点的基因已被阐明[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba］．的defense response of soybean to SCN has been examined at the physiological, genetic, and molecular level, and several reports indicate that salicylic acid (SA), jasmonic acid (JA), ethylene (ET), and indole acetic acid (IAA) play a role in resistance and susceptibility of plants to nematodes [8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba10gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．然而，与防御相关的激素及其合成和信号通路中的特定成分在植物对线虫的抗性中的作用尚不清楚。gydF4y2Ba

植物的防御反应很复杂。植物启动无数的局部和系统防御反应，以保护自己免受害虫和病原体的入侵。几种激素参与诱导防御反应和调节防御反应网络，包括SA、JA、ET和IAA [gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba16gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba18gydF4y2Ba］．植物对病原体相关或微生物相关的分子模式(PAMPs/MAMPs)作出反应，植物通过富含leucine重复序列(LRR)受体感知这些分子模式。PAMPs信号气孔关闭和刺激植物先天免疫。一般来说，SA激活对生物营养型和半生物营养型病原体的防御反应，诱导系统性获得性抵抗(SAR)，并触发SAR相关发病机制相关基因的表达gydF4y2BaPR-1gydF4y2Ba，gydF4y2BaPR-5gydF4y2Ba，及其他[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba18gydF4y2Ba］．SA调控、合成和信号传导的特定成分在保护植物免受寄生线虫侵害中的作用尚不清楚。然而，SA确实在降低豇豆根结线虫(RKN)易感性方面发挥了作用[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]和番茄[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]，而对于囊肿线虫，gydF4y2Ba异皮线虫属schachtii,gydF4y2Ba在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba［gydF4y2Ba10gydF4y2Ba］．同样，JA也在植物对线虫的抗性中发挥作用。叶面喷施JA可减少番茄的赤霉病，降低RKN最终种群数量(gydF4y2Bam .隐姓埋名的女人gydF4y2Ba）;［gydF4y2Ba22gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]，与JA预处理番茄种子的效果相同[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]，表明JA在植物对线虫的抗性中起作用。gydF4y2Ba

目前尚不清楚大豆与大豆囊线虫(SCN;gydF4y2Ba异皮线虫属甘氨酸gydF4y2Ba)，是美国大豆的主要害虫。虽然大豆对SCN具有抗性的基因已经被鉴定出来，但这些基因并不对所有SCN群体具有抗性。大豆对SCN的抗性是多基因的，已经确定了几个主要的抗性位点[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba，gydF4y2Ba27gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba31gydF4y2Ba］．例如，在北京大豆cv中，几个基因(gydF4y2Barhg1gydF4y2Ba，gydF4y2Barhg2gydF4y2Ba，gydF4y2Barhg3gydF4y2Ba,gydF4y2BaRhg4gydF4y2Ba)已被报道可对SCN 1种产生抗性[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba，gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]，但这些基因中没有一个对所有SCN群体具有完全抗性。因此，我们将从模式植物研究中获得的大量知识的一部分应用于大豆gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba及其大量SA和JA在植物防御反应中的作用的突变体，以确定可能有助于降低植物对线虫的敏感性的重要成分，特别是大豆对SCN的敏感性。gydF4y2Ba

拟南芥gydF4y2Ba已被广泛用作研究植物防御途径的模型系统，通常是细菌和真菌病原体[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba17gydF4y2Ba，gydF4y2Ba33gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba39gydF4y2Ba］．SA的产生和信号通路的使用是目前研究的热点gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba被细菌和真菌病原体感染的突变体(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba) [gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba16gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba35gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba44gydF4y2Ba］．例如，当一种生物营养病原体的剧毒菌株，gydF4y2Ba两gydF4y2Ba,攻击gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba的AvrRPS4效应蛋白gydF4y2Bap .两gydF4y2Ba由III型分泌系统分泌的蛋白被植物受体RPS4检测到，RPS4是一种toll -白介素-核苷酸结合-富亮氨酸重复序列(TIR-NB-LRR)，介导抗菌素防御的诱导以提供抗病性。核细胞质蛋白ENHANCED DISEASE SUSCEPTIBILITY 1 (EDS1)是一种类脂肪酶蛋白，连接RPS4与下游防御途径，调节SA的积累[gydF4y2Ba45gydF4y2Ba，gydF4y2Ba46gydF4y2Ba］．EDS1对于产生超敏反应和动员防御途径至关重要[gydF4y2Ba47gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba49gydF4y2Ba］．EDS1可以二聚并与另一种类脂肪酶蛋白，植物抗毒素缺乏4 (PAD4)相互作用[gydF4y2Ba48gydF4y2Ba，gydF4y2Ba49gydF4y2Ba］．这两个gydF4y2BaEDS1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaPAD4gydF4y2Ba是SA积累所必需的，它们参与ROS信号传导[gydF4y2Ba46gydF4y2Ba，gydF4y2Ba50gydF4y2Ba］．PAD4蛋白是病原体感染产生的微弱信号扩增所必需的。防御反应的另一个重要组成部分是EDS5，它是MATE转运体家族中的一种多药物转运体[gydF4y2Ba50gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

假设SA可以通过两种不同的途径合成gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba［gydF4y2Ba51gydF4y2Ba，gydF4y2Ba52gydF4y2Ba］．一种途径涉及酶等chorisate合成酶(ICS;EC 5.4.4.2)，它催化了等脉络酸盐向等脉络酸盐的转化。chorismate mutase (CM;EC 5.4.99.5)催化竞争的化学反应，并将chorisate转化为prephenate。这将使脉络酸盐产生其他化合物，如苯丙氨酸和酪氨酸。的gydF4y2Ba拟南芥sid2-2gydF4y2Ba（gydF4y2BaSa诱导不足2)gydF4y2Ba突变位点已被定位到gydF4y2BaICSgydF4y2Ba（gydF4y2BaSID1gydF4y2Ba)基因[gydF4y2Ba52gydF4y2Ba］．SA在合成后可以直接与NPR1结合，NPR1由gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba（gydF4y2Bapr1的非表达子gydF4y2Ba)，也被称为NIM1(非诱导免疫1)。NPR1是一种SA受体，是参与SA依赖防御反应的基因的转录调节因子[gydF4y2Ba53gydF4y2Ba]，包括SA标记基因gydF4y2BaPR-1gydF4y2Ba（gydF4y2Ba发病机制gydF4y2Ba)．NPR1与转录因子TGA2家族成员相互作用，包括AHBP-1b，该复合物结合到sa反应的启动子元件gydF4y2BaPR-1gydF4y2Ba和其他sa依赖的防御基因来调节表达[gydF4y2Ba54gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

SA也可以独立于EDS1和PAD4进行调控。NDR1 (NON-RACE SPECIFIC DISEASE RESISTANCE 1)是SA的正向调控因子，独立于EDS1和PAD4 [gydF4y2Ba55gydF4y2BaNDR1是一种整合素样蛋白，可与RIN4结合，而RIN4可与RPM1和RPS2结合[gydF4y2Ba56gydF4y2Ba］．NDR1可能在感染时的电解质释放中起作用gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba通过gydF4y2Bap .两gydF4y2Ba，而RIN4则与植物质膜的H +−ATPases共同调节气孔孔径gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba在病原体攻击期间[gydF4y2Ba57gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

是的,是的gydF4y2Ba_ilegydF4y2Ba，而相关的脂源性化合物也作为植物防御反应的信号，并与对坏死性病原体的抗性有关[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba，gydF4y2Ba58gydF4y2Ba，gydF4y2Ba59gydF4y2Ba］．导致JA和JA的途径gydF4y2Ba_ilegydF4y2Ba图中描述了JA信号和控制相关的合成和一些组件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba．烯氧化物合酶(AOS)和烯氧化物环化酶(AOC)是合成茉莉酸的两种重要酶。JAR1编码一种依赖于atp的JA-酰胺合酶，将异亮氨酸与JA结合形成JAgydF4y2Ba_ilegydF4y2Ba，在JA信号中起着至关重要的作用。gydF4y2Ba

在本文中，我们研究了植物防御反应的一些组成部分在赋予大豆对SCN的抗性中的作用。我们展示了gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因，即AgydF4y2BatNPR1gydF4y2Ba，gydF4y2BaAtTGA2, AtICS1gydF4y2Ba,gydF4y2BaAtPR5gydF4y2Ba它们编码SA调控、生物合成和下游效应因子的组成部分，在转基因大豆根中表达时，可以降低大豆对SCN的敏感性。我们还演示了的表达式gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba编码AOS、AOC和JAR1的基因参与了JA的合成和修饰，仅能适度降低大豆根系对SCN的易感性。这些结果表明一些gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因可以直接用于大豆，从而直接应用从研究中获得的防御反应知识gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba作为降低大豆对线虫易感性的模式系统。gydF4y2Ba

的表达gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba大豆根中的基因gydF4y2Ba

SA和JA是众所周知的植物防御反应调节剂，通过对模型植物的研究，gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba．来确定是否有一些gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因可以直接应用于大豆中转化知识gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba我们从描述大豆防御反应的文献中选择并克隆了编码SA和JA合成、调控和信号传导的大量成分的基因gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba对病原体的影响(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．为了扩大我们的研究范围，我们还选择了几个gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba功能定义不明确或代表植物防御反应的其他部分不太依赖SA和JA的基因。31的开放阅读框(orf)gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因克隆到基因表达载体pRAP15 [gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba60gydF4y2Ba，gydF4y2Ba61gydF4y2Ba]使用附加文件中列出的引物gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S1。插入的orf被测序以确认它们的身份并确保它们的序列是保守的。对具有insert的向量进行变换gydF4y2Ba农杆菌属rhizogenesgydF4y2Ba将K599注入大豆幼苗切茎基部的细胞中。转化后约35天，从复合植株中去除未转化的根系，将转化后的根系接种SCN。gydF4y2Ba

确定了31个基因在接种后35天表达对SCN囊肿数量的影响(表2)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．6个基因使囊肿数量减少40%以上，从而对SCN产生部分抗性。其中三个基因，gydF4y2BaAtNPR1 AtTGA2,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtPR-5,gydF4y2Ba减少了超过60%的囊肿数量，而另外三个，gydF4y2BaAtACBP3 AtACD2,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtCM3gydF4y2Ba减少了40%的囊肿。一个拟南芥基因，gydF4y2BaAtDND1,gydF4y2Ba将SCN的包囊数增加到对照的175%，从而使大豆根系对SCN更敏感(表2)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

RNA从附加文件中列出的基因转化根的子集中提取gydF4y2Ba2gydF4y2Ba的表达式gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因PCR检测。扩增子分离，凝胶电泳和染色观察(图gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba)，以确认orf在复合根中表达。所有测试的根都表达了转录本。gydF4y2Ba

此外，两种基因转录的丰度对SCN提供了最大的保护，gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtTGA2,gydF4y2Ba基因特异性引物qRT-PCR检测(附加文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba:表S2)。采用s型法计算转录本数[gydF4y2Ba62gydF4y2Ba］．的抄本数gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba40,500个分子gydF4y2BaAtTGA2gydF4y2Ba在转化根中有60500个分子，而在对照根中没有检测到这两种基因的转录本。在所有样本中，管家基因编码泛素-3的表达水平相似(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

三种防御相关基因的转录本数量，gydF4y2BaGmPR5gydF4y2Ba，gydF4y2BaGmCHIB1gydF4y2Ba,gydF4y2BaGmERF1gydF4y2Ba也通过qRT-PCR检测(图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)．根的过度表达gydF4y2BaAtNPR1,gydF4y2Ba有178份抄本gydF4y2BaGmPR5gydF4y2Ba，而在词根过度表达gydF4y2BaAtTGA2,gydF4y2Ba共有159份转录本。在对照根中，只有38个转录本gydF4y2BaGmPR5gydF4y2Ba．因此，GmPR5在根过表达中升高约4倍gydF4y2BaAtTGA2。gydF4y2Ba成绩单的gydF4y2BaGmCHIB1gydF4y2Ba在这些根部也被提升了。有403份成绩单gydF4y2BaGmCHIB1gydF4y2Ba根的过度表达gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba根过表达的转录本有133份gydF4y2BaAtTGA2。gydF4y2Ba只有53份抄本gydF4y2BaGmCHIB1gydF4y2Ba在控制根中。这代表了表达的增加gydF4y2BaGmCHIB1gydF4y2Ba大豆根过表达量约为8倍和2.5倍gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtTGA2,gydF4y2Ba分别。相比之下，抄本的数量gydF4y2BaGmERF1gydF4y2Ba大豆根系过表达减少gydF4y2BaAtNPR1。gydF4y2Ba只有42份gydF4y2BaGmERF1gydF4y2Ba存在，而对照植物含有1921个转录本。类似地，根过度表达gydF4y2BaAtTGA2gydF4y2Ba包含更少的gydF4y2BaGmEFR1gydF4y2Ba只有75个转录本存在于对照根。因此,gydF4y2BaGmERF1gydF4y2Ba两组转基因根的表达量均显著降低。gydF4y2Ba

SA-related基因gydF4y2Ba

植物防御反应的激活是通过几个平行信号通路启动的。在基因对基因抗性中，宿主抗性(R)蛋白间接识别病原体效应物以启动抗性[gydF4y2Ba63gydF4y2Ba］．卷曲-卷曲-核苷酸结合位点-富亮氨酸重复序列(CC-NB-LRR)和TIR-NB-LRR类蛋白是R蛋白的两个主要亚群[gydF4y2Ba64gydF4y2Ba］．在本研究中，我们选择了拟南芥蛋白NON-RACE-SPECIFIC DISEASE RESISTANCE 1 (NDR1)作为CC-NB-LRR r蛋白的代表，因为已知它在拟南芥中激活sa介导的防御反应gydF4y2Ba．gydF4y2BaRPS2，由gydF4y2BaAtRPS2gydF4y2Ba，被选为TIR-NB-LRR类蛋白的代表。这两个gydF4y2BaAtNDR1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtRPS2gydF4y2Ba在转基因大豆根中过表达，以确定它们对SCN生长和成熟的影响，通过雌性指数(FI)来衡量，该指数表示根接种后35天成熟的雌性SCN数量占对照值的百分比。AtNDR1过表达对SCN发育有轻微抑制作用(FI = 80)，而AtRPS2的抑制作用略大(FI = 71)，但效果无统计学意义(P > 0.05)(表2)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

拟南芥NON-EXPRESSOR OF pathogenesis related GENES 1 (AtNPR1)位于R蛋白NDR1和RPS2的下游。NPR1是SAR的关键调节器，在SAR中作为SA信号换能器发挥着关键作用gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba［gydF4y2Ba38gydF4y2Ba，gydF4y2Ba44gydF4y2Ba］．当gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba过表达时，FI下降至对照组的33%。gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba的FI值最低gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba本研究中检测的基因(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

将AtNPR1的593个碱基与最接近的大豆产物Glyma09g07440.1进行比对，表明只有273个碱基是保守的，尽管也有许多保守的取代(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)．有5个大豆基因编码与AtNPR1密切相关的蛋白质。Glyma09g07440.1编码的蛋白与Glyma09g02430.1编码的蛋白亲缘关系最密切，而这些蛋白又与Glyma15g13320.1、Glyma14g03510.1、Glyma02g45260.1编码的蛋白亲缘关系密切。所有5个大豆推测的NPR1蛋白都包含一个BTB/POZ结构域、锚蛋白重复序列(结构域CLO465)、一个NPR1/ nim1样防御蛋白C末端和一个未知功能结构域(DUF3420)， AtNPR1也是如此。gydF4y2Ba

的表达gydF4y2BaAtTGA2gydF4y2Ba编码tga型碱性亮氨酸拉链bZip转录因子AHBP-1B，在大豆根中使SCN的FI降低到对照的38%(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．有许多大豆同源物gydF4y2BaAtTGA2gydF4y2Ba．最保守的四种是Glyma13g26280.1、Glyma15g37220.1、Glyma20g39050.2和Glyma10g44270.1。AtTGA2的氨基酸序列与Glyma20g24766.1 (5e-56;数字gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)．另一种转录本Glyma20g24766.2与之完全相同，只是它缺少5 '前导序列。Glyma20g24766.1转录本似乎包含叶绿体转运序列，正如使用ChloroP1.1预测的那样，丹麦技术大学，gydF4y2Bahttp://www.cbs.dtu.dk/services/ChloroP/gydF4y2Ba，而Glyma20g24766.2不包含这个5 '传输序列。我们使用了替代序列Glyma20g39050.2，该序列缺少AtTGA2中也缺少的5 '前导序列。AtTGA2和GmTGA2蛋白序列在bZIP结构域高度保守[gydF4y2Ba65gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba68gydF4y2Ba]，在39aa域仅存在2个aa差异。这个区域高度保守，在65个aa区域中只有8个aa取代。第二个域名DOG1 [gydF4y2Ba69gydF4y2Ba]位于羧基末端，参与控制种子休眠[gydF4y2Ba54gydF4y2Ba］．这些拟南芥和大豆蛋白之间的DOG1结构域不太保守。gydF4y2Ba

在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba， SA与受体NPR1相互作用，NPR1再与转录因子TGA2相互作用，调节一些基因的转录，包括gydF4y2BaPR-1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaPR-5gydF4y2Ba．因此，我们检查了过表达的影响gydF4y2BaAtPR-1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtPR -gydF4y2Ba5对SCN的FI。过度的gydF4y2BaAtPR-1gydF4y2Ba无统计学意义(FI = 80;在SCN囊肿数量上P = 0.2)。相反，当gydF4y2BaAtPR-5gydF4y2Ba在大豆根部过表达时，FI降低至对照的38%(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)，而过度表达gydF4y2BaAtPR-1gydF4y2Ba对FI只有轻微的影响，占对照组的80%。大豆有一个超过15个的大家族gydF4y2BaGm-PR-5gydF4y2Ba其中Glyma14g08380和Glyma17g36680与该基因的亲缘关系最密切gydF4y2Ba拟南芥PR-5gydF4y2Ba基因AT1G75040(图gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)．由蛋白质编码的蛋白质序列gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba两个最密切相关的大豆基因高度保守。gydF4y2Ba

与SA相关的三个被充分研究的基因是AtPAD4、AtEDS1和AtEDS5。之前，我们演示了的表达式gydF4y2BaAtPAD4gydF4y2Ba大大降低了女性SCN的发育，降至对照组的32% [gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］．在这里，我们检测了AtEDS5和AtEDS1过表达的影响，这两种基因均未显著影响SCN的发育，FI值分别为77和109。gydF4y2Ba

SA可以通过含ICS的较短途径合成，也可以通过使用CM的苯丙氨酸的较长途径合成。因此，我们表示gydF4y2BaAtICS1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtCM-3gydF4y2Ba以确定它们对SCN成熟的影响。过度的gydF4y2BaAtICS1gydF4y2Ba有一定的抑制作用(FI = 67, P = 0.002)。因为gydF4y2BaAtICS1gydF4y2Ba没有强烈影响FI，我们预计CM的表达对SCN的FI有最小的抑制作用，或者，可能会增加敏感性，因为CM与ICS竞争共同的底物chorcyses。然而，表达gydF4y2BaAtCM-3gydF4y2Ba显著抑制SCN生长(FI = 57, P = 0.03)。gydF4y2Ba

WIN3，由gydF4y2BaHOPW1-1-INTERACTING 3gydF4y2Ba（gydF4y2BaWIN3gydF4y2Ba)，参与调节SA和抗病性[gydF4y2Ba70gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba72gydF4y2Ba]，但其机制尚不清楚[gydF4y2Ba73gydF4y2Ba］．过度的gydF4y2BaAtWIN3gydF4y2Ba将SCN的FI降低到对照的47%。gydF4y2Ba

拟南芥gydF4y2BaACBP3是一种酰基辅酶A (CoA)结合蛋白[gydF4y2Ba74gydF4y2Ba］．转基因gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaoverexpressinggydF4y2BaAtACBP3gydF4y2Ba显示发病相关基因的本构表达gydF4y2BaPR-1gydF4y2Ba(未知函数),gydF4y2BaPR-2gydF4y2Ba(β1、3-glucanase)gydF4y2Ba，gydF4y2Ba而且gydF4y2BaPR-5gydF4y2Ba(渗透素)，并抵抗gydF4y2Bap .两gydF4y2BaDC3000依赖于NPR1介导的信号通路[gydF4y2Ba75gydF4y2Ba］．过度的gydF4y2BaAtACBP3gydF4y2Ba在大豆根系中，SCN的FI降低到对照的53%。gydF4y2Ba

过度的gydF4y2BaAtCPR5gydF4y2Ba（gydF4y2Ba病原相关基因的组成表达gydF4y2Ba)对SCN雌性指数影响不大。gydF4y2BaCPR5gydF4y2Ba突变体组成性表达PR基因水平较高[gydF4y2Ba76gydF4y2Ba，gydF4y2Ba77gydF4y2Ba];显示细胞分裂、核内重复和细胞壁生成的缺陷[gydF4y2Ba78gydF4y2Ba，gydF4y2Ba79gydF4y2Ba];身材矮小，并出现自发性病变[gydF4y2Ba79gydF4y2Ba，gydF4y2Ba80gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

JA-related基因gydF4y2Ba

JA及其相关化合物在防御反应中很重要，尤其是对坏死性病原体的反应[gydF4y2Ba81gydF4y2Ba，gydF4y2Ba82gydF4y2Ba］．JA和JAgydF4y2Ba_ilegydF4y2Ba都是通过一系列酶促步骤合成的(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)，包括烯氧化物合酶(AOS (DDE2);EC 4.2.1.92);烯氧化物环化酶(AOC;EC 5.3.99.6);茉莉酸-酰胺合成酶(JAR1;EC 6.3.2. -)。JAR1将JA与异亮氨酸结合形成JA- ile，被认为是JA的活性形式之一[gydF4y2Ba74gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba77gydF4y2Ba］．过度表达gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因gydF4y2BaAtAOS, AtAOCgydF4y2Ba,gydF4y2BaAtJAR1gydF4y2Ba无统计学意义(对照组66% (P = 0.11)、76% (P = 0.06)、69% (P = 0.07);表格gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．这些数据并不表明[的过度表达gydF4y2Ba83gydF4y2Ba这些基因可提高大豆对SCN的抗性。gydF4y2Ba

其他gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因gydF4y2Ba

过度的gydF4y2BaAtRIN4gydF4y2Ba大豆根系基因对SCN雌性指数影响不大(表2)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．RIN4是植物先天免疫的负调节因子[gydF4y2Ba57gydF4y2Ba］．它调节气孔关闭。它似乎是大豆根系对线虫攻击的防御反应的外围，因为它没有显著改变SCN的FI。gydF4y2Ba

在gydF4y2Ba拟南芥,gydF4y2Ba叶绿体蛋白加速细胞死亡2 (ACD2)调节细胞死亡的数量gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba感染了gydF4y2Bap .两gydF4y2Ba［gydF4y2Ba84gydF4y2Ba］．当gydF4y2BaAtACD2gydF4y2Ba基因在大豆根系中过表达后，SCN的FI降低到对照的55%(表2)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

含有c端内质网保留信号(KDEL)的半胱氨酸内肽酶参与植物细胞死亡[gydF4y2Ba85gydF4y2Ba］．半胱氨酸内肽酶编码的过表达gydF4y2BaAtCEP1gydF4y2Ba将SCN的FI降低到对照组的66%，这没有统计学意义(表2)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

过表达时增加易感性的拟南芥基因gydF4y2Ba

的gydF4y2BaAtDND1gydF4y2Ba基因AT5G15410.1编码环核苷酸门控阳离子通道蛋白防御NO死亡1 (DND1)，并参与超敏反应的产生[gydF4y2Ba86gydF4y2Ba］．的gydF4y2Ba拟南芥dnd1gydF4y2Ba突变体产生大量的SA。生产过剩的gydF4y2BaAtDND1gydF4y2Ba大豆根系对SCN无抗性;相反，它增强了易感性。转基因大豆根系的FI含量gydF4y2BaAtDND1gydF4y2Ba为对照组的175%，在这里测试的基因易感性的最大增加(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．DND1蛋白序列之间高度保守gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和大豆(Glyma18g49890.1)，如图所示gydF4y2Ba9gydF4y2Ba．它含有一个环核苷酸结合域，这表明Pfam-A匹配显著(e值= 5.8)。gydF4y2Ba

过度表达另外两种gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因对大豆对SCN的易感性无显著影响。第一个基因，gydF4y2Ba本构抗病性gydF4y2Ba（gydF4y2BaAtCDR1gydF4y2Ba)，编码一种天冬氨酸蛋白酶[gydF4y2Ba87gydF4y2Ba］．当gydF4y2BaAtCDR1gydF4y2Ba在大豆根部过表达时，FI为对照的142% (P = 0.23)(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．第二个基因gydF4y2BaAtMC2gydF4y2Ba（gydF4y2BaLOL2gydF4y2Ba（gydF4y2BaLSD1-LIKEgydF4y2Ba)编码超敏反应期间细胞死亡的正调控因子，是LSD1的保守para [gydF4y2Ba88gydF4y2Ba，gydF4y2Ba89gydF4y2Ba］．LSD1是植物细胞程序性死亡的负调控因子。过度的gydF4y2BaAtMC2gydF4y2Ba大豆根的FI为135% (P = 0.06)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

对SCN的抗性是一种多基因性状，已经绘制了几个遗传位点[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba，gydF4y2Ba27gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba29gydF4y2Ba，gydF4y2Ba90gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba93gydF4y2Ba］．最近，身份基因居住在gydF4y2Barhg1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaRhg4gydF4y2Ba已报告基因座[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]从而对SCN产生一定的抗性。然而，这些基因座没有一个单独对任何一个SCN群体提供完全抗性。例如，在大豆品种埃塞克斯和福雷斯特的杂交中，gydF4y2Barhg1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaRhg4gydF4y2Ba在由此产生的自交系群体对SCN的抗性变异中，约占65% [gydF4y2Ba94gydF4y2Ba］．其他大豆基因在根系过表达时也被鉴定为对SCN具有部分抗性[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba，gydF4y2Ba60gydF4y2Ba，gydF4y2Ba61gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

对线虫产生抗性的一个选择是使用文献中描述的防御相关基因。很多文献都描述了防御反应gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba该学科致力于阐明防御反应信号、调控和对攻击植物叶片的细菌和真菌病原体重要的途径。虽然这项研究可能适用于植物对线虫的抗性和对大豆等农艺作物的抗性，但从这些重要研究中获得的知识还很少被发表gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba对大豆和其他重要作物。直接翻译研究gydF4y2Ba拟南芥,gydF4y2Ba包括改造gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因直接植入作物植物中，以确定它们对作物的抗病性是否有积极或消极的影响。这里我们已经展示了一些gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba当基因在大豆根部过表达时，它们是兼容的，并具有抗SCN的能力。gydF4y2Ba

SA在植物对病原体的防御反应中起着重要作用。SA调节SAR、局部抗病、宿主细胞死亡和参与防御反应的基因表达[gydF4y2Ba44gydF4y2Ba］．在番茄中，SA对三个RKN种的抗性很重要[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］．番茄转基因表达gydF4y2BaNahG,gydF4y2Ba编码水杨酸水解酶，降解SA，对RKN抗性较弱。然而，通过应用生物防治菌的细胞悬液，番茄对RKN产生了抗性gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba与SA的积累无关[gydF4y2Ba95gydF4y2Ba］．因此，SA可能在提供番茄对RKN的抗性方面发挥了作用，但可能还有其他不依赖SA的机制也产生了抗性。上原等人。[gydF4y2Ba96gydF4y2Ba结果表明，番茄SA信号通路的抑制gydF4y2Ba一个英雄gydF4y2Ba基因增加易感性gydF4y2BaGlobodera rostochiensis。gydF4y2Ba将番茄种子浸泡在SA [gydF4y2Ba14gydF4y2Ba］．这些报告和其他报告表明SA和线虫抗性之间有很强的联系。gydF4y2Ba

检查gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba突变体在我们理解防御反应中发挥了关键作用，是许多评论的主题[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba，gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba35gydF4y2Ba，gydF4y2Ba36gydF4y2Ba，gydF4y2Ba38gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39gydF4y2Ba］．据推测SA可通过两种不同的生化途径合成[gydF4y2Ba52gydF4y2Ba，gydF4y2Ba97gydF4y2Ba］．在第一种途径中，通过ICS的作用，向等危线转变;然后，由等蹄菜酸丙酮酸裂解酶生成SA。检查gydF4y2BaICS1gydF4y2Ba突变体,gydF4y2Basid2-1gydF4y2Ba而且gydF4y2Basid2-2,gydF4y2Ba的gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba表明ICS1活性的丧失会显著降低SA水平[gydF4y2Ba48gydF4y2Ba］．拟南芥中大多数与植物防御相关的SA都是通过这一途径合成的。的gydF4y2Basid2gydF4y2Ba突变体接种后不积累SAgydF4y2Bap .两gydF4y2Ba,gydF4y2BaPR-1gydF4y2Ba表达量大大减少。然而,gydF4y2BaPR-2gydF4y2Ba而且gydF4y2BaPR-5gydF4y2Ba表示为[gydF4y2Ba90gydF4y2Ba］．第二种可能的途径是通过CM将脉络酸转移到苯丙氨酸，苯丙氨酸被苯丙氨酸解氨酶(PAL)转化为肉桂酸，并通过一系列反应形成SA。此前，我们证明了在转基因大豆根中过表达两种编码PAL的不同大豆基因对SCN成熟影响不大，FI值分别为94和111% [gydF4y2Ba8gydF4y2Ba］．然而，我们在这里发现，CM和ICS作为两种不同途径的代表，过表达分别使对照的FI降低到57%和67%。然而，PAL、CM或ICS单独的过表达并不能对其他几个sa相关基因单独的过表达所提供的水平产生抗性。gydF4y2Ba

降低大豆对SCN易感性的基因gydF4y2Ba

如果SA相关的防御反应是大豆对SCN抗性的主要因素，那么SA调控的成分在过表达时可能会产生对SCN的抗性。我们的研究结果表明gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba在大豆根部过表达时，与SA调控、合成和信号通路有关的基因赋予了对SCN的抗性。的gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因gydF4y2BaAtNPR1, AtTGA2, AtPR-5gydF4y2Ba以及其他几种与SA相关的物质，都强烈地降低了转基因大豆根系SCN的FI(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．NPR1是SA相关防御反应的主要调节因子，也是SA的受体[gydF4y2Ba51gydF4y2Ba］．NPR1结合SA并与TGA转录因子，如转录因子AHBP-1b/TGA2相互作用，可能是通过其锚蛋白结构域[gydF4y2Ba54gydF4y2Ba］．NPR1和TGA转录因子在SA下游工作，对编码PR-1、PR-5和其他基因的表达很重要[gydF4y2Ba98gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba102gydF4y2Ba］．这些基因的表达完全被废除了gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba携带gydF4y2Banpr1gydF4y2Ba突变(gydF4y2Ba83gydF4y2Ba］．最近，Pant等人。[gydF4y2Ba103gydF4y2Ba]证明了一个通用正交物Glyma09g02430的gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaNPR1将SCN囊肿减少到对照组的30%左右，这与我们的数据一致gydF4y2BaAtNPRgydF4y2Ba(fi = 33%)gydF4y2Ba．gydF4y2Ba在许多植物中有报道表明NPR1的过表达导致对真菌和细菌病原体的防御。过度的gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba授予抵抗gydF4y2Bap .两gydF4y2Ba而且gydF4y2Ba霜霉属parasiticagydF4y2Ba［gydF4y2Ba104gydF4y2Ba］．过度的gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba水稻对水稻白叶枯病病原菌具有抗性gydF4y2Ba黄oryzaegydF4y2Ba［gydF4y2Ba105gydF4y2Ba］．过度的gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba在小麦中赋予抗性的赤霉病头，由gydF4y2Ba镰刀菌素graminearum。gydF4y2Ba苹果gydF4y2BaMpNPR1gydF4y2Ba基因赋予苹果对两种真菌病原体的抗性，gydF4y2Ba秦冠gydF4y2Ba而且gydF4y2BaGymnosporangium juniper-virginianaegydF4y2Ba［gydF4y2Ba106gydF4y2Ba，gydF4y2Ba107gydF4y2Ba)补充gydF4y2Ba拟南芥npr1-1gydF4y2Ba大豆同源突变体gydF4y2BaGmNPR1-1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaNPR1-2,gydF4y2Ba诱导转化植株产生PR-1gydF4y2Bap .两gydF4y2Ba用SAR诱导剂2,6-二氯异烟酸处理后。gydF4y2Ba

NPR1与转录因子TGA2相互作用，调节一些植物防御基因的表达，如PR-1和PR5 [gydF4y2Ba108gydF4y2Ba］．当我们过表达AtTGA2时gydF4y2Ba，gydF4y2BaSCN的FI降低到38，表明TGA2也具有对SCN的抗性。我们的数据进一步支持了这一点，显示由于PR-5过表达，FI降低到对照的38%。PR-5是一种参与防御反应的类桃马汀蛋白[gydF4y2Ba109gydF4y2Ba]，可能会产生跨膜孔，破坏病原体的细胞膜[gydF4y2Ba110gydF4y2Ba］．一些PR-5蛋白表现出抗真菌活性[gydF4y2Ba109gydF4y2Ba，gydF4y2Ba111gydF4y2Ba］．当gydF4y2Ba李属有gydF4y2BaPR-5在转基因中过表达gydF4y2Ba拟南芥,gydF4y2Ba这些植物对真菌病原体表现出更强的抵抗力gydF4y2Ba链格孢属brassicolagydF4y2Ba［gydF4y2Ba112gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

PAD4是SA产生的上游([gydF4y2Ba113gydF4y2Ba];数字gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．PAD4是一种类似脂肪酶的蛋白质[gydF4y2Ba48gydF4y2Ba]可与EDS1形成分子复合物，调节SA防御信号[gydF4y2Ba114gydF4y2Ba］．异位表达gydF4y2BaPAD4gydF4y2Ba减少转基因绿桃蚜虫的取食时间gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba植物。蚜虫花更多的时间积极地捕食gydF4y2Bapad4gydF4y2Ba突变体(gydF4y2Ba115gydF4y2Ba］．之前我们讲过gydF4y2BaAtPAD4gydF4y2Ba对SCN和RKN的授予抗性[gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］．EDS1也是SA的上游，它可以与PAD4相互作用[gydF4y2Ba114gydF4y2Ba，gydF4y2Ba116gydF4y2Ba，gydF4y2Ba117gydF4y2Ba］．最近，Pant等人。[gydF4y2Ba103gydF4y2Ba证明gydF4y2BaGmEDS1gydF4y2Ba(Glyma06g19890)对SCN有很大的影响，减少了大约80%的SCN囊肿。这与我们的数据相反，我们的数据表明过度表达gydF4y2BaAtEDS1gydF4y2Ba不降低SCN的FI。GmEDS1由620个aa组成，AtEDS1由623个aa组成(图gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)．GmEDS1和AtEDS1的氨基酸序列共有239个aa。此外，它们还有另外140个与取代密切相关的aa。显然，这种保护性还不足以使AtEDS1像GmEDS1那样对SCN产生抗性。gydF4y2Ba

的gydF4y2BaEDS5gydF4y2Ba该基因也在SA上游发现，编码一种与多药和毒素挤压转运体(MATE)同源的膜蛋白[gydF4y2Ba50gydF4y2Ba］．的gydF4y2Baeds5gydF4y2Ba当被线虫感染时，突变体的SA积累量很少，且PR-1转录本减少[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba118gydF4y2Ba］．我们展示了过度表达gydF4y2BaAtEDS5gydF4y2Ba仅将成熟女性囊肿数量适度减少至对照组的75%。gydF4y2Ba

ACBP3是六种酰基辅酶A (CoA)结合蛋白之一gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba［gydF4y2Ba66gydF4y2Ba］．ACBP与酰基辅酶a酯结合并保护酰基辅酶a不被降解[gydF4y2Ba119gydF4y2Ba］．牛ACBP在酵母中的过表达导致酰基辅酶a池大小的增加[gydF4y2Ba120gydF4y2Ba］．过度的gydF4y2BaAtACBP6gydF4y2Ba拟南芥抗冻能力增强[gydF4y2Ba121gydF4y2Ba］．这些植物也表现出磷脂酰胆碱的减少和磷脂酰酸的增加。感染gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba葡萄孢菌gydF4y2Ba或gydF4y2Bap .两gydF4y2Ba光伏gydF4y2Ba番茄gydF4y2BaDC3000诱导表达gydF4y2BaAtACBP3gydF4y2Ba，与用真菌激发子花生四烯酸治疗一样[gydF4y2Ba75gydF4y2Ba］．作者还表明，抵抗gydF4y2Bap .注射器gydF4y2Ba由gydF4y2BaACBP3gydF4y2Ba以npr1依赖的方式过度表达gydF4y2BaPR-1gydF4y2Ba，gydF4y2BaPR-2,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaPR-5gydF4y2Ba都是构式表达的。当我们过度表达gydF4y2BaAtACBPgydF4y2Ba转基因大豆在35 d时，SCN包囊数量减少到对照的53%。gydF4y2Ba

ACD2基因gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba编码红色叶绿素还原酶[gydF4y2Ba122gydF4y2Ba]，可催化叶绿素中卟啉部分的降解[gydF4y2Ba123gydF4y2Ba］．ACD2调节拟南芥感染的细胞死亡gydF4y2Ba两页。gydF4y2Ba它局限于叶绿体。感染后gydF4y2Bap .两gydF4y2Ba蛋白质的定位发生了变化，它定位于叶绿体、线粒体，并在较小程度上定位于细胞质[gydF4y2Ba84gydF4y2Ba］．叶绿素分解产物的积累可引发细胞死亡[gydF4y2Ba122gydF4y2Ba］．当我们过度表达gydF4y2BaAtACD2gydF4y2Ba基因处理后，SCN的FI降低到对照的55%。gydF4y2Ba

茉莉酸gydF4y2Ba

JA和乙烯在植物防御反应中也很重要，尤其是对坏死性病原体的反应[gydF4y2Ba58gydF4y2Ba］．JA和乙烯与SA发生拮抗作用。机械损伤和损伤激活拟南芥、马铃薯、番茄等植物JA合成[gydF4y2Ba58gydF4y2Ba，gydF4y2Ba124gydF4y2Ba，gydF4y2Ba125gydF4y2Ba］．几个实验室正在研究JA在防御线虫方面的作用。最近有报道称JA参与水稻植物对线虫的防御[gydF4y2Ba126gydF4y2Ba，gydF4y2Ba127gydF4y2Ba］．外源施用甲基- ja可使每株水稻根瘤病减少63%。相比之下，Bhattarai等人。gydF4y2Ba128gydF4y2Ba]表明番茄对RKN的抗性不需要JA。他们利用抗和易感RKN的近等基因番茄品种，用微阵列技术研究了基因表达。番茄gydF4y2Bajai1gydF4y2Ba突变体JA信号的改变降低了番茄对RKN的敏感性。此外，他们还发现生长素相关基因在与RKN的兼容和不兼容相互作用中表达差异。用SA、JA或甲基JA喷叶或淋土均不影响RKN对番茄根系的侵染[gydF4y2Ba129gydF4y2Ba］．我们发现过表达的三个基因涉及JA/JAgydF4y2Ba_ilegydF4y2Ba生产,gydF4y2BaAtAOS AtAOC,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtJAR1gydF4y2Ba将SCN的FI降低到对照组的66% (P = 0.06)、75% (P = 0.6)和69% (P = 0.06)。虽然数据处于显著性的边缘，但趋势表明，JA/ JAgydF4y2Ba_ilegydF4y2Ba可使大豆对SCN产生一定的抗性。由于SA和JA在根系中的作用尚未被研究，这一领域还需要进一步的研究。SA-JA拮抗作用在根系中也未见文献记载。也许，SA和JA的相互作用在所有组织中都不是完全拮抗的。或者，外源施用植物激素可以提供对线虫的抗性，但在线虫攻击期间通常无法达到达到抗性所需的植物激素水平。gydF4y2Ba

增加大豆对SCN易感性的基因gydF4y2Ba

过度的gydF4y2BaAtDND1gydF4y2Ba在所有测试基因中，大豆根对SCN的易感性增加最大。DND1是已知的植物免疫负调节因子[gydF4y2Ba130gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba132gydF4y2Ba］．其启动子是转录辅抑制因子Topless-related 1 (TPR1)的靶点，TPR1可能通过抑制负调控因子来激活R蛋白介导的免疫应答[gydF4y2Ba133gydF4y2Ba］．当gydF4y2BaAtDND1gydF4y2Ba在大豆根系中过表达，其对SCN的抗性降低，雌性指数比对照降低175%。gydF4y2Ba

拟南芥gydF4y2Ba防御基因不影响SCN易感性gydF4y2Ba

过度的gydF4y2BaAtCDR1gydF4y2Ba编码一种异位天冬氨酸蛋白酶，导致SCN易感性无显著增加。这一结果与以往关于植物对细菌和真菌病原体抗性的研究结果形成了鲜明对比。过度的gydF4y2BaCDR1gydF4y2Ba在T-DNA激活标记研究中产生了矮子gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba植物的抵抗力增强gydF4y2Bap .两gydF4y2Ba［gydF4y2Ba134gydF4y2Ba］．反义gydF4y2BaCDR1拟南芥gydF4y2Ba植物的抵抗力降低了gydF4y2Ba两页。gydF4y2Ba一种水稻天冬氨酸蛋白酶，由gydF4y2BaOsCDR1gydF4y2Ba，由Presad等人确定。[gydF4y2Ba135gydF4y2Ba］．当他们过度表达gydF4y2BaOsCDR1gydF4y2Ba在gydF4y2Ba拟南芥,gydF4y2Ba植株对坏死性真菌病原体更有抵抗力gydF4y2Ba链格孢属brassicicolagydF4y2Ba．当该基因在水稻植株中过表达时，植株的抗性更强gydF4y2Ba黄oryzae,gydF4y2Ba稻瘟病菌，并以gydF4y2BaMagnaporthe oryzae,gydF4y2Ba是什么导致了细菌性枯萎病gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

数的表达gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因为大豆抗SCN提供了保护。事实上，一些基因提供的抗性增加与基因提供的相当或更好gydF4y2BaRhg1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaRhg4gydF4y2Ba，两个天然存在于大豆中的抗性基因位点。然而，并不是所有的gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因提供了抵抗力。其实是过度表达的gydF4y2BaAtEDS1gydF4y2Ba没有增加抵抗力，虽然gydF4y2BaGmEDS1gydF4y2Ba最近有报道称Ortholog具有耐药性。这些数据表明gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因可以直接用于大豆中赋予抗性，特别是与SA调控、信号转导和合成相关的基因，但不是全部gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba同源基因将提供与同源大豆基因相同的结果。这些和类似的研究可以为蛋白质的保护和功能提供有用的见解gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因可能被证明在具有广泛抗线虫能力的工程植物中很有用。gydF4y2Ba

生物信息学gydF4y2Ba

从已发表的研究中选择了31个基因定义gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba显示影响SA和JA产生、调节和信号转导表型的突变体。从拟南芥信息资源(The Arabidopsis Information Resource, TAIR;gydF4y2Bahttp://www.arabidopsis.org/gydF4y2Ba)．大豆基因的DNA序列用于多序列比对gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因从Phytozome.net(联合基因组研究所，美国能源部，加州大学伯克利分校整合基因组学中心)获得gydF4y2Ba大豆gydF4y2Ba基因组(gydF4y2Ba136gydF4y2Ba］．PCR扩增各基因开放阅读框的引物采用Primer 3 (gydF4y2Bahttp://biotools.umassmed.edu/bioapps/primer3_www.cgigydF4y2Ba)或OligoAnalyzer 3.1 (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA)使用CLUSTAL 2.1进行多个序列比对(gydF4y2Bahttp://www.genome.jp/tools/clustalw/gydF4y2Ba)．蛋白结构域用Pfam (gydF4y2Bahttp://pfam.sanger.ac.uk/searchgydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

orf的扩增和克隆gydF4y2Ba

的开放阅读框(orf)gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba目标基因(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S1)通过PCR扩增，并使用Gateway®系统(Invitrogen, Carlsbad, CA)如前所述克隆到pRAP15中[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］．PCR模板来自于cDNA文库gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaRNA。gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba提取的RNA构建cDNAgydF4y2Ba答:芥gydF4y2Ba(哥伦比亚)整株植物并转化为cDNA，如[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］．使用基因特异性PCR引物对orf进行PCR扩增，在正向引物5 '端含有CACC，使用Gateway®(Invitrogen)系统进行定向克隆(附加文件)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S1)。gydF4y2Ba

pcr扩增的orf使用pENTR™Directional TOPO®Cloning Kit (Invitrogen)克隆到pENTR中，并转化为gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba使用One Shot®Mach1™T-1化学活性细胞(Invitrogen)。用50 μg mL提取转化菌落gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}卡那霉素。使用载体特异性引物M13-F和M13-R对每个克隆的ORF进行DNA测序，以确认身份和完整性(附加文件)gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba:表S3)。然后将每个ORF定向克隆到基因表达载体pRAP15 [gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)，在attR1和attR2位点使用Invitrogen的Gateway®技术和LR Clonase™II酶混合(Invitrogen)。Clonase II反应产物用于转化gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba在10 μg mL条件下选择转化菌落gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}四环素盘子。通过FMV特异性引物FMV- f(附加文件)，PCR证实了从FMV启动子下游正确方向的插入物的存在gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba表S3)和gydF4y2Ba答:芥gydF4y2Ba基因特异性反向引物。采用承载每个ORF的pRAP15向量进行胜任力变换gydF4y2Ba农杆菌属rhizogenesgydF4y2Ba' K599 '细胞采用冻融法[gydF4y2Ba137gydF4y2Ba]，选择5 μg mLgydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}四环素盘子。如上所述，pRAP15载体中ORF的存在得到了证实。ORF的表达由Figwort Mosaic Virus (FMV)启动子控制。pRAP15载体含有基因编码增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP) [gydF4y2Ba138gydF4y2Ba]由gydF4y2BarolDgydF4y2Ba启动子在根中提供强eGFP表达，用于鉴定转化根。使用eGFP- f和eGFP- r引物通过PCR确认了编码eGFP的基因的存在(附加文件gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba:表S3)，转基因根中可见eGFP。存在gydF4y2Ba答:rhizogenesgydF4y2BaRgydF4y2Ba_我gydF4y2Ba质粒经RgydF4y2Ba_我gydF4y2Ba-F和RgydF4y2Ba_我gydF4y2Ba-R primer(附加文件gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba:表S3)。gydF4y2Ba

大豆复合植株的形成与确认gydF4y2Ba

如前所述，生产了由未转化的芽和转化的根组成的复合大豆植株[gydF4y2Ba139gydF4y2Ba，gydF4y2Ba140gydF4y2Ba］gydF4y2Ba答:rhizogenesgydF4y2Ba包含每个ORF的克隆按照前面所述的方式生长[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba］．转化的对照根是用gydF4y2Ba答:rhizogenesgydF4y2Ba含有没有ORF的空pRAP15。简单地说，一百份大豆简历。Williams 82 PI518671植株在Promix温室中生长5-7天。在土壤线处扦插苗，用gydF4y2Ba答:rhizogenesgydF4y2Ba发展到过量gydF4y2Ba_600gydF4y2Ba0.5。将茎冲洗干净，然后将幼苗种在温室中，生长4到5周。将植株从Promix中轻轻移出，并切除未转化的根。在使用Dark Reader Spot灯通过eGFP荧光识别转化的根后保留(Clare Chemical Research, Dolores, CO)。植物被重新种植在普罗米斯，并生长了两周。第二次去除未转化的根，将大约12 ~ 20株只有转化根的健康植株种植在沙土中，并接种SCN。gydF4y2Ba

拟南芥基因在大豆转基因根中的存在被PCR证实。简单地说，每种结构的转基因大豆根都被收获，在液氮中快速冷冻在2毫升微移管中，并在-80℃下储存。用研钵和杵在液氮中研磨100 mg根组织后，使用RNAeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA)提取总RNA。提取的RNA样本用TURBO™DNAse I (Ambion, Carlsbad, CA)处理以去除残留的基因组DNA。采用大豆引物对大豆基因AW31036进行PCR扩增，检测RNA是否受到基因组DNA污染。以RNA样本为模板时不产生扩增产物，而以基因组DNA为模板时产生扩增产物。使用上标III第一链合成系统进行RTPCR (Invitrogen, Carlsbad, CA)，使用寡核苷酸(dT)将每个RNA的1毫克转化为cDNAgydF4y2Ba_{12 - 18gydF4y2Ba}启动cDNA的第一条链。为了检测转基因大豆根中拟南芥结构物的存在，将每个cDNA作为模板，使用基因特异性引物进行Taq DNA聚合酶(Invitrogen) PCR反应进行扩增。每个反应的10微升在2% SB琼脂糖凝胶上电泳，在150伏特下电泳1小时。使用1Kb +阶梯(Invitrogen)来估计扩增子的大小。凝胶是使用紫外线灯箱和EOS Rebel T3i相机(佳能，阿灵顿，弗吉尼亚州)拍摄的，带有高清紫外线滤镜(佳能)。使用EOS成像软件(Canon)创建的图像在Adobe成像软件(Adobe, San Jose, CA)中进行注释。通过PCR检测9条基因特异性引物，证实该扩增子的来源为拟南芥cDNA，而非大豆DNA。含有拟南芥cDNA的PCR得到扩增物，当使用大豆DNA时，只有阳性对照大豆来源的引物才会产生扩增产物，证实引物仅针对大豆根内的拟南芥基因。gydF4y2Ba

线虫的制备gydF4y2Ba

SCN系NL1-RHg在易感株上维持gydF4y2Ba大豆gydF4y2Ba简历。如前所述的《埃塞克斯》[gydF4y2Ba141gydF4y2Ba］．在850 μm和250 μm嵌套筛网中捕获SCN囊肿，冲洗根系以去除SCN囊肿。用蔗糖浮选纯化包囊[gydF4y2Ba142gydF4y2Ba然后在直径7.6厘米、直径250 μm的筛子上碾碎，将橡胶塞子部分浸入水中，使鸡蛋释放出来。在筛子下方的托盘中捕获的鸡蛋通过61 μm的筛子倾倒，然后在25 μm的筛子上收集。用0.5%次氯酸钠浸泡1.5分钟清洗鸡蛋，然后用无菌去离子水冲洗。将鸡蛋倒入一个小托盘中，在3mm ZnSO溶液中孵化gydF4y2Ba_4gydF4y2Ba在26°C和25 rpm的旋转振动筛上。四天后，孵卵液通过30 μm目尼龙布(Spectrum Labs Inc, Rancho Dominguez, CA)，保留未孵化的卵，并在布下收集的溶液中释放J2期SCN。为了浓缩J2s，将200毫升溶液放在1升玻璃烧杯中，并以100转/分钟的速度放在旋转振动筛上。用巴斯德移液管从烧杯中央底部收集J2s。在显微镜下观察了3份5 μ l的J2溶液，以确定J2s的浓度和活力。将溶液稀释至1000 J2 mLgydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}用无菌水。gydF4y2Ba

线虫鉴定gydF4y2Ba

每种结构采用12株转化复合植株，每株接种2000株J2线虫。每棵植物两侧的沙子上都挖了两个4厘米深的洞。一毫升1000j2毫升gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}在每个孔中加入悬浮液，并用沙子覆盖。接种后35天(dai)，在850 μm和250 μm的巢状筛子之间从每株植物的根部收集包囊，并在真空条件下在Buchner漏斗中冲洗到衬里滤纸上[gydF4y2Ba143gydF4y2Ba］．在解剖显微镜下计数囊肿。用空载体转化的植物根作为雌性指数的阳性对照，如下所述。gydF4y2Ba

PCR检测gydF4y2Ba

通过RT-PCR证实了ORFs在转化大豆根系中的表达，如前所述[gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］．每个结构收获三个单独的大豆根。根据制造商的说明，使用Qiagen RNeasy Mini Kit提取RNA。根据制造商的说明，使用TURBO™DNase试剂盒(Ambion)通过DNase消化去除污染DNA。RNA作为模板进行PCR检测，确认无污染DNA存在。根据制造商的说明，使用上标III第一链合成系统进行RT-PCR (Invitrogen)将RNA转化为cDNA。以pRAP15转化的大豆根为对照。引物设计用于产生100 - 200 bp的扩增子(附加文件)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba:表S2)。编码rs-21的基因(Glyma09g00210.1)作为阳性对照[gydF4y2Ba144gydF4y2Ba］．不含RNA的反应作为阴性对照。gydF4y2Ba

根据制造商的说明，使用Brilliant II SYBR®Green QPCR Master Mix Kit(安捷伦科技)对每个根样本进行RT-PCR反应，重复三次。RT-PCR引物序列在附加文件中提供gydF4y2Ba2gydF4y2Ba:表S2。使用DNeasy Plant Mini试剂盒(Qiagene, USA)从单个根中分离基因组DNA (gDNA)。每一个基因转化都要检查三个独立转化的根。gDNA作为模板，在PCR中包含特异性引物gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因。gydF4y2Ba

实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)gydF4y2Ba

收集3个单独的根(每个100毫克)，并用其中任何一种进行转化gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba，gydF4y2BaAtTGA2gydF4y2Ba，或空pRAP15向量作为对照。每个根表示一个独立的转换事件。使用超清洁植物RNA分离试剂盒(MOBIO, Carlsbad, CA)从每个根中提取RNA。使用DNase i去除基因组DNA。根据制造商的说明，使用SuperScript III First-Strand Synthesis System (Invitrogen, Carlsbad, CA)和oligo dT引物从RNA合成单链cDNA。所有qRT-PCR引物对都设计在包含一个内含子的区域侧面，以确保产物是从cDNA扩增而来。引物(附加文件gydF4y2Ba4gydF4y2Ba:表S4)均特异于拟南芥的侧翼区gydF4y2BaAtNPR1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaAtTGA2gydF4y2Ba基因，产生大约150bp的扩增子。大豆泛素-3 (gydF4y2BaGmUBI-3gydF4y2Ba作为qRT-PCR阳性对照，表明所有样品中均存在大豆RNA。大豆防御相关基因的表达水平gydF4y2BaERF1gydF4y2Ba(Glyma20g34570)，编码乙烯响应因子1;gydF4y2BaCHIB1gydF4y2Ba(Glyma10g27870)，编码一种碱性几丁质酶蛋白;而且gydF4y2BaPR-5gydF4y2Ba(Glyma05g38110)，编码一种渗透蛋白样蛋白。qRT-PCR的其他对照包括不含模板的反应和不含逆转录酶的qRT-PCR反应。qRT-PCR进行3个生物重复，每个反应重复3次。使用Stratagene Mx3000P Real-Time PCR系统(Stratagene, La Jolla, CA)按照制造商的描述测定转录本丰度。SYBR Green用于测定反应过程中DNA的积累。使用Stratagene Mx3000P Real-Time PCR系统提供的软件计算Ct值(第一次明显检测到荧光增加的周期)。放大产物的解离曲线被用来证明每个反应只产生一个产物。为了进一步确保每次反应只生成一个产物，PCR产物在0.8%琼脂糖凝胶上分析，并在紫外光下观察。转录本水平的绝对定量根据(Rutledge and Stewart, 2008)描述的s型模型进行[gydF4y2Ba62gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

雌性数量数据中的异常值使用Grubbs测试除去[gydF4y2Ba145gydF4y2Ba]在GraphPad QuickCalcs网站(gydF4y2Bahttp://graphpad.com/quickcalcs/grubbs1/gydF4y2Ba)．采用Shapiro-Wilk检验检验数据的正态性([gydF4y2Ba146gydF4y2Ba];在线版本由S. Dittami实现，gydF4y2Bahttp://scistatcalc.blogspot.com/2013/10/shapiro-wilk-testcalculator.htmlgydF4y2Ba)．均值比较采用Welch 's unpairedgydF4y2BatgydF4y2Ba方差不等检验[gydF4y2Ba147gydF4y2Ba，gydF4y2Ba148gydF4y2Ba]在GraphPad QuickCalcs网站(gydF4y2Bahttp://graphpad.com/quickcalcs/ttest1/gydF4y2Ba)．女性指数(FI)计算公式为:FI = (NgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba/ NgydF4y2Ba_cgydF4y2Ba) x100，其中NgydF4y2Ba_ggydF4y2Ba=感兴趣基因的雌性平均数量，NgydF4y2Ba_cgydF4y2Ba=空pRAP15对照的雌性平均数量。gydF4y2Ba

从7-16个试验株和10个或更多对照株中计算雌性指数如下所示[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba60gydF4y2Ba，gydF4y2Ba61gydF4y2Ba，gydF4y2Ba139gydF4y2Ba，gydF4y2Ba140gydF4y2Ba，gydF4y2Ba149gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba153gydF4y2Ba］．拟南芥基因在大豆复合植株根部过表达的实验参照Golden等已发表的方法进行[gydF4y2Ba153gydF4y2Ba]，里格斯及施米德[gydF4y2Ba149gydF4y2Ba，gydF4y2Ba150gydF4y2Ba金等人。[gydF4y2Ba151gydF4y2Ba]和Niblack等人。[gydF4y2Ba152gydF4y2Ba］．在Golden等人的实验中[gydF4y2Ba153gydF4y2Ba]，最初开发和修改FI的实验室，FI通常从总共3-10个实验植物和3-10个对照植物中计算，每个单独的植物作为复制。实验复制可以进行，也可以不进行。这里介绍的所有实验在这方面都超过了这些已发表的研究，并且进行的植物数量与最近发表的研究相似[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba，gydF4y2Ba60gydF4y2Ba，gydF4y2Ba61gydF4y2Ba，gydF4y2Ba139gydF4y2Ba，gydF4y2Ba140gydF4y2Ba，gydF4y2Ba154gydF4y2Ba］．在本分析中，实验植株数量达到或超过了转基因大豆SCN感染检测的数量[gydF4y2Ba155gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba158gydF4y2Ba］．在此，我们还报告了试验组和对照组的平均标准误差(SEM)。gydF4y2Ba

支持数据的可用性gydF4y2Ba

支持本文结果的数据包含在本文中。gydF4y2Ba

AOC:gydF4y2Ba

烯氧化物环化酶gydF4y2Ba

代谢:gydF4y2Ba

烯氧化物合酶gydF4y2Ba

CM:gydF4y2Ba

Chorismate变位酶gydF4y2Ba

戴:gydF4y2Ba

接种后天数gydF4y2Ba

等:gydF4y2Ba

乙烯gydF4y2Ba

FI:gydF4y2Ba

女性指数gydF4y2Ba

gDNA:gydF4y2Ba

基因组DNAgydF4y2Ba

国际宇航科学院:gydF4y2Ba

吲哚乙酸gydF4y2Ba

集成电路:gydF4y2Ba

Isochorismate变位酶gydF4y2Ba

是:gydF4y2Ba

茉莉酸gydF4y2Ba

液态氧:gydF4y2Ba

脂氧合酶gydF4y2Ba

OPR3:gydF4y2Ba

12-氧植二烯酸还原酶gydF4y2Ba

子:gydF4y2Ba

开放阅读框gydF4y2Ba

朋友:gydF4y2Ba

苯丙氨酸解氨酶:PAMP，病原体相关分子模式gydF4y2Ba

聚合酶链反应:gydF4y2Ba

聚合酶链反应gydF4y2Ba

公关:gydF4y2Ba

Pathogenesis-relatedgydF4y2Ba

RKN:gydF4y2Ba

综合国内线虫gydF4y2Ba

山:gydF4y2Ba

水杨酸gydF4y2Ba

特别行政区:gydF4y2Ba

全身获得性耐药性gydF4y2Ba

视交叉上核:gydF4y2Ba

大豆囊肿线虫。gydF4y2Ba

作者感谢Leslie Wanner博士对手稿的严格审查，Patrick Elias的DNA测序，Hua Lu博士的讨论，以及Andrea Maldonado的克隆基因。联合大豆理事会的财政支持。感谢1254。gydF4y2Ba

提及商品名称、专有产品或供应商不构成美国农业部对产品的担保或保证，也不意味着其批准排除其他可能合适的产品或供应商。作者之间没有利益冲突。gydF4y2Ba

从属关系gydF4y2Ba

1. 美国农业部，农业研究局，大豆基因组学和改良实验室，马里兰州贝尔茨维尔，20705，美国gydF4y2Ba

   Benjamin F Matthews, Hunter Beard, Eric Brewer, Sara Kabir, Margaret H MacDonald和Reham M YoussefgydF4y2Ba

2. 法尤姆大学，埃及法尤姆gydF4y2Ba

   Reham M YoussefgydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2Ba本杰明·马修斯gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者之间没有利益冲突。gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

BM构思和设计实验，分析数据，起草手稿;HB种植植物，改造植物根系，修剪根系;MM用线虫接种根系，收获计数线虫;SK修剪根部，收获并计数线虫，克隆基因;EB克隆基因，改造植物根系，修剪根系;RY克隆了这些基因，修剪了根系，收获并统计了线虫数量。所有作者都阅读并批准了最终的手稿。gydF4y2Ba

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