有益真菌GydF4y2Bapiriformospora indica.GydF4y2Ba保护拟南芥GydF4y2Baverticillium dahliae.GydF4y2Ba下调植物防御反应感染GydF4y2Ba

背景GydF4y2Ba

verticillium dahliae.GydF4y2Ba（GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba）是一种土壤传播的血管病原体，导致各种植物中的严重枯萎的症状。通过病原体产生的微克洛蒂菌在土壤中存活超过15年。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

在这里，我们证明渗出物制剂在拟南芥根系中诱导细胞质钙升高，并且疾病发育需要乙烯活化转录因子EIN3。此外，有益的内生真菌GydF4y2Bapiriformospora indica.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba）显着减少GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba- 拟南芥的疾病发展。GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba抑制了生长GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在PDA平板上进行双培养，并对拟南芥根进行预处理GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba保护植物免受GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染。这GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba-经过预处理后的植株生长得更好GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染和生产GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在没有激活宿主的应激激素和防御基因的情况下，微菌核显著减少。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

我们得出结论GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba是一种有效的生物控制剂，可保护拟南芥GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染。我们的数据表明了这一点GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在存在的情况下，增长受到限制GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba附加信号来自GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba一定要参与调节免疫应答对抗吗GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

眼霉菌物种是广泛的土壤 - 传播的真菌，导致许多植物种类的血管疾病，并负责挫败农业生产的植物的破坏性疾病。血管枯萎的真菌GydF4y2Baverticillium dahliae.GydF4y2Ba（GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba)，感染超过200种植物，其中包括农业和园艺上的重要作物和观赏植物[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba] - [GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba］．估计GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染负责全球数十亿美元的年度作物损失。GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba具有广泛的宿主范围，感染温带植物到亚热带气候[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba］．黄萎病菌因其复杂的生活方式，用传统的农药或杀菌剂防治比较困难;因此，分离抗黄萎病品种是育种工作者的重要任务。GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba]).GydF4y2Ba

据报道了几种植物物种的遗传性抗生殖器枯萎病疾病[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba]. 这个GydF4y2BaveGydF4y2Ba该基因提供对1号小种分离株的抗性GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在番茄GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba]番茄基因也是在拟南芥中表达后的功能性[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba]. 许多研究利用拟南芥来分离GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba-Resistant种质[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba]或突变后新抗性性状的鉴定[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba] - [GydF4y2Ba14GydF4y2Ba］．此外，最近，已经描述了来自不同生物的大量蛋白质和代谢物以及植物激素，参与建立对患者的部分抗性[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba] - [GydF4y2Ba22GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

像其他叶霉素一样，GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba可以在宿主植物或土壤中冬过冬粉霉素。真菌还可以形成种质结构，称为微克罗罗罗基，长寿存的混合物细胞簇的长期存活结构，其具有厚壁，在没有宿主植物的情况下在土壤中存活或与植物材料结合长达20年[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba24GydF4y2Ba]. 微巩膜在根分泌物的刺激下萌发[GydF4y2Ba25GydF4y2Ba]. 这个hyphae penetrate and grow inter- and intracellularly through the root cortex toward the central cylinder of the root [26GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba27GydF4y2Ba]. 它们进入根的木质部细胞，在那里它们定植于下胚轴和叶的木质部。最终，水分运输被破坏，导致枯萎表型[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba] - [GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba]. 黄萎病属植物被认为是半生物营养型：根木质部内的生物营养期没有明显的病害表型，然后是植物地上部分的坏死营养期。GydF4y2Ba

病原体的传播主要由土壤中的根部感染。因此根际细菌菌株如GydF4y2Ba恶臭假单胞菌GydF4y2BaB E2，GydF4y2Ba假单胞菌chlororaphisGydF4y2BaK15或GydF4y2BaSerratia plymuthicaGydF4y2BaR12型[GydF4y2Ba28GydF4y2Ba]或细菌分离物[GydF4y2Ba29GydF4y2Ba已被证明可以用作有效的生物控制代理GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba传播。微生物生物生物诱导抗生素，寄生，竞争和分泌等酶如葡萄糖氧化酶，几丁质酶和葡聚糖酶，这导致宿主中疾病抗性的诱导[GydF4y2Ba12GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba30GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

据我们所知，内生真菌没有报告，可以用作生物管制剂反对GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在拟南芥中。GydF4y2Bapiriformospora indica.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba)是一种可栽培的担子菌，寄生在包括拟南芥在内的许多植物的根上[GydF4y2Ba31GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba32GydF4y2Ba]. 像皮脂纲的其他成员一样，GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在全球范围内找到与根部相关[GydF4y2Ba33GydF4y2Ba]并刺激宿主的生长，生物质和种子生产[GydF4y2Ba31GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba34GydF4y2Ba] - [GydF4y2Ba36GydF4y2Ba]. 这个fungus promotes nitrate and phosphate uptake and metabolism [35GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba37GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba还赋予非生物抵抗[GydF4y2Ba38GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba39GydF4y2Ba]和生物应激[GydF4y2Ba40GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

这里，我们将对此进行演示GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba是一种有效的生物控制剂，可保护拟南芥GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染GydF4y2Ba体外GydF4y2Ba和GydF4y2Ba体内GydF4y2Ba通过抑制生长GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在根。此外，我们还证明了aGydF4y2Bavd.GydF4y2Ba-渗出物复合物诱导胞质CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba（[CA.GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba})标高及GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba-Disease易于依赖于乙烯激活的转录因子EIN3。GydF4y2Ba

Pi抑制PDA琼脂平板上Vd的生长GydF4y2Ba

圆周率GydF4y2Ba和GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba如在PDA琼脂板上的方法中所述共培养3周。数字GydF4y2Ba1GydF4y2Ba（a和b）表现出来GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba强烈抑制GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba菌丝。这GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba双重文化的殖民地明显小于GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba殖民地没有增长GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba．此外，由此产生的微克罗特罗的数量GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在双培养条件下产生的菌核数小于小菌核数GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba同时生长。没有明显的抑制区可以检测到。相比之下，增长GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba几乎没有受到存在的影响GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．这促使我们测试的角色GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在保护拟南芥植物GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染。GydF4y2Ba

经Pi预处理的拟南芥幼苗对Vd有保护作用GydF4y2Ba

调查是否GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba可以保护拟南芥GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染，我们首先暴露幼苗GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba之前GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染。未暴露于任何两种真菌或仅暴露于其中一种真菌的幼苗作为对照(参见方法)。在10、14和21天后，通过目视检查和测量鲜重来测定幼苗的表现。共培养10天后，用GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba或者GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba与未处理的对照幼苗相比，单独表现出〜30％的生物量增加。当幼苗第一次暴露于幼苗时，观察到生物质的相当增加GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba然后到GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba或者GydF4y2Ba反之亦然GydF4y2Ba（数字GydF4y2Ba2GydF4y2Ba一种）。这种略微增加的生物量表明，两种真菌初始与幼苗形成有益的相互作用，并且与该阶段代表生物养基相互作用的想法一致GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥根。在14GydF4y2Ba^第GydF4y2Ba日，苗木受感染GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba单独或首先GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba紧随其后的是GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba)症状明显。与对照相比，这些幼苗的叶片变白，根系变褐GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba或者GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba尽管不同真菌处理的生物量没有显著差异，但GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba治疗（图GydF4y2Ba2GydF4y2Ba一种）。相比之下，在21GydF4y2Ba^圣GydF4y2Ba一天，幼苗暴露在一起GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba单独或暴露于GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在接触之前GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba）严重受损。他们的新鲜重量减少或不再可测量。GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba单独处理使鲜重增加了约30%(图GydF4y2Ba2GydF4y2BaA） 是的。有趣的是，用GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba然后暴露在一起GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba）具有与未处理的对照幼苗相同的新重量，尽管可见的检查显示一些照片漂白（图GydF4y2Ba2GydF4y2Bab）。这清楚地表明了这一点GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba保护拟南芥幼苗免受GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba全身枯萎。因此，本实验装置可用于研究黄酮的保护作用GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba更详细的细节。GydF4y2Ba

通过计算治疗的那些幼苗的疾病指数（PDI）来证实结果GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．经过10天的共同种植，PDI为GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba和GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba苗期~20%，14 d后40-50%。21天后，PDI几乎是100%。相反，经过预处理的幼苗GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在接触之前GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba)显示PDI缓慢增加，21天后达到约30%（图GydF4y2Ba2GydF4y2BaC）。GydF4y2Ba

此外，总叶绿素（CHL）的量是植物适合度的敏感标记。在4GydF4y2Ba^第GydF4y2Ba一天，射击GydF4y2Bavd-GydF4y2Ba和GydF4y2BaPi-GydF4y2Ba处理过的植株的叶绿素含量略高于对照苗（图1）GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba)．在10GydF4y2Ba^第GydF4y2Ba一天，chl含量GydF4y2Bavd-GydF4y2Ba处理的幼苗与未暴露于病原体的对照幼苗相当。此外，而且GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba幼苗具有相同的CHL作为GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba幼苗中Chl含量GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba幼苗显著减少(图GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba)．对14例进行了比较GydF4y2Ba^第GydF4y2Ba日，除了CHL内容GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba与...相比，幼苗减少GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba苗(图GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba). 在21号GydF4y2Ba^圣GydF4y2Ba日，GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba幼苗Chl含量最高，GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba幼苗的叶绿素含量与未接触真菌的对照幼苗相同，而对照幼苗的叶绿素含量与未接触真菌的对照幼苗相同GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba和GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba植物大量减少（图GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba)．这证实了保护功能GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba反对GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥的感染叶子。GydF4y2Ba

病原体相关分子模式的发病机制与应用诱导气孔闭合[GydF4y2Ba41GydF4y2Ba]. 在没有接触任何真菌的对照植物中，5%到12%的气孔是关闭的。根暴露于GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba~25%的气孔关闭(图GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba7 .【答案】bGydF4y2Ba^第GydF4y2Ba日。这GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba治疗在7时显示〜25％的气孔闭合GydF4y2Ba^第GydF4y2Ba天，这种值与用幼苗相媲美GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba独自的。相比之下，根部暴露于GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba或者先到来GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba紧随其后的是GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba没有导致气孔闭合，这些值与未经处理的对照的这些值相当（图GydF4y2Ba4.GydF4y2BaB） 是的。这表明GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba防止GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba- 诱导的气孔闭合。这些结果表明，气孔闭合与总叶绿素的量恰好相关。GydF4y2Ba

Pi抑制Vd诱导的新梢基因GydF4y2Ba

vd.GydF4y2Ba诱导芽中的防御基因表达。1天后，mRNA水平GydF4y2BaPR1型GydF4y2Ba和GydF4y2BaPR2型GydF4y2Ba代表Sa-Imcible基因和GydF4y2BaPDF1.2GydF4y2Ba对于JA / ET路径，GydF4y2BaERF1型GydF4y2Ba和GydF4y2Bavsp2.GydF4y2Ba因为ET途径在叶片中上调GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba- 梯形幼苗。除了GydF4y2BaPR2型GydF4y2Ba，其他基因都没有反应GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba曝光（图GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba). 14天后，GydF4y2Bavd-GydF4y2Ba暴露的幼苗表明叶子中的防御基因更强烈地升高（图GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)．幼苗的预处理GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba之前GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba与未处理的幼苗相比，侵染导致防御基因表达的抑制GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba．这为保护功能提供了额外的证据GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba反对GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染。此外，植物谷氨酸受体(GydF4y2BaGLRGydF4y2Ba）基因，GydF4y2BaGLR2.4级GydF4y2Ba那GydF4y2BaGLR2.5级GydF4y2Ba和GydF4y2BaGLR3.3.GydF4y2Ba推定CA的代码GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba转运体和参与防御反应[GydF4y2Ba42GydF4y2Ba] - [GydF4y2Ba44GydF4y2Ba］．我们观察到这一点GydF4y2BaGLR2.4级GydF4y2Ba（但不是GydF4y2BaGLR2.5级GydF4y2Ba和GydF4y2BaGLR3.3.GydF4y2Ba)在叶片中表达上调GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba-光照处理后的幼苗叶片中的光合酶活性和光合酶活性受到抑制GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba之前GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba曝光（图GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba和附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：图S2）。GydF4y2Barabgap22GydF4y2Ba是防御所必需的GydF4y2BaV. longisporum.GydF4y2Ba并有助于气孔免疫[GydF4y2Ba22GydF4y2Ba]. 为了GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba那GydF4y2Barabgap11.GydF4y2Ba是在暴露后上调的GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在预处理的幼苗中大大压抑GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（数字GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba

Pi强烈抑制Vd诱导的植物激素在地上部的积累GydF4y2Ba

Phytohormones Ja，Ja-Ile，OPDA，SA，ABA和ET对防御反应的激活至关重要。数字GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba说明这些植物激素积累后GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥幼苗的侵染。植物激素水平也很高GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba样本，而在所有其他情况下[控制（c），GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba那GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba，他们显示出明显较低的水平。因此,GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba-植物激素的诱导积累受到抑制，如果根是定殖的GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在接触之前GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．有趣的是，适用GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba已经暴露在一起的根源GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba没有压制灌注中植物激素的积累。GydF4y2Ba

Pi抑制Vd的传播和微巩膜的形成GydF4y2Ba

量化量的GydF4y2Bavd.GydF4y2BaDNA表现出来GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba和GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba幼苗含有两倍的病原体DNAGydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba两个根的幼苗(图GydF4y2Ba7.GydF4y2BaA和D）和射击（图GydF4y2Ba7.GydF4y2BaB和E)，有趣的是GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在根中的DNA是相同的GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba-处理的样品和不受前处理的影响GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba（数字GydF4y2Ba7.GydF4y2Bac和f）。此外，微观分析证明，在预处理的根组织中强烈降低了微克罗氏菌素的数量GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（数字GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba). 这表明GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba抑制GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba根部中的繁殖和微克罗罗基形成GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba不影响传播GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在拟南芥根。GydF4y2Ba

长期试验证实了苗木的结果GydF4y2Ba

为了研究长期相互作用，根据培养皿上的5个制度生长幼苗，在转移到无菌蛭石中另外14天。所有（c）幼苗和暴露于的人GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba）活着。的接触GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba- 植物到GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba导致约20%的植物损失。但是80%的植物GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba单独或首先GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba紧随其后的是GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba，去世（图GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba一种）。此外，我们测量了在治疗中幸存下来的幼苗的新鲜重量。植物暴露于GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba单独表现出鲜重的〜30％。新鲜的重量GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba植物与未暴露于任何真菌的植物相当。GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba- 和GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba- 与所有其他治疗相比，生命的幼苗显着降低了新鲜的重量（图GydF4y2Ba9.GydF4y2Bab）。最后，GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba射击和根部的DNA量较低GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba- 与治疗方法相比 - 治疗植物GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba单独或首先GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba紧随其后的是GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba） （数字GydF4y2Ba9.GydF4y2BaC） 是的。与培养皿中的幼苗获得的结果相当（图GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba）， 这GydF4y2Ba圆周率GydF4y2BaDNA含量完全相同GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba-处理过的根（图GydF4y2Ba9.GydF4y2BaC).这证实了GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba抑制GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba增长，但不是GydF4y2Ba反之亦然GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

EIN3是拟南芥对Vd完全敏感所必需的GydF4y2Ba

在存在的情况下生长的幼苗叶片中植物激素水平的强烈上调GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba进一步调查了等。Pantelides等。[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba]已经证明ET感知GydF4y2Ba通过GydF4y2BaETR1是必需的GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥感染。我们观察到EIN3的强烈要求GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba- 诱导拟南芥叶片的疾病发展。GydF4y2BaEIN3.GydF4y2Ba幼苗被暴露GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba单独或首先接受治疗GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba应用前GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba表现优于野生型幼苗（图GydF4y2Ba10GydF4y2BaA、 B和附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：图S3）。有趣的是，ET水平GydF4y2BaEIN3.GydF4y2Ba幼苗远高于野生型幼苗，即使在没有的情况下也是如此GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．幼苗暴露GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba刺激ET累积甚至进一步累积（图GydF4y2Ba10GydF4y2BaC和附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：图S4）。这表明GydF4y2BaEIN3.GydF4y2Ba幼苗通过进一步刺激Et生物合成来补偿缺乏ein3诱导的基因，特别是之后GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染。总之，这些数据表明ein3诱导的基因是致病性所必需的GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

VD在WT根中诱导[Ca2 +] Cyt升高，但不是Ca2 +响应突变体的根部GydF4y2Ba

病原体相关分子模式触发免疫通常是由[CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}升高，可以通过致病性真菌的渗出化合物诱导[CF.[GydF4y2Ba45GydF4y2Ba]和参考。]其中]。由于推定的等离子体膜局部化了GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba-Transporter基因GydF4y2BaGLR2.4级GydF4y2Ba被上调GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba，我们测试了GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba可以诱导(CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}高程的根源。将菌丝的渗出液制备到表达Ca的转基因pMAQ2拟南芥的根上GydF4y2Ba^{2 + -GydF4y2Ba}传感器载脂蛋白。在静息条件下，21株d龄pMAQ2株系[Ca]GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}值70±0.6nm（GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 16）。[CA的快速和瞬态增加GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}在应用后40秒观察浓度GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba准备（图GydF4y2Ba11GydF4y2BaA） 是的。实验结束时的放电表明，在刺激后消耗的重组aequorin不到5%，这确保了样品中aequorin的量不受Ca的限制GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba信号（数据未显示）。[加利福尼亚州GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}90〜120秒后达到〜400 nm的峰值（图GydF4y2Ba11GydF4y2BaA） 是的。随后CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba水平稳步下降。没有(CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}用PBS缓冲液处理观察到升级（图GydF4y2Ba11GydF4y2BaA). The magnitude of TheGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}响应是依赖剂量（数据未显示）。此外，拟南芥GydF4y2Ba细胞质钙升高蛋白质1GydF4y2Ba（GydF4y2BaCycam1.GydF4y2Ba)不显示[CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}各种病原真菌分泌物制备的反应性升高[GydF4y2Ba45GydF4y2Ba]也未能诱发[加利福尼亚州GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}响应的海拔GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba准备（图GydF4y2Ba11GydF4y2BaB） 是的。这表明GydF4y2BaCycam1.GydF4y2Ba在渗出来自各种病原体的渗出物制剂的反应中受损。此外，我们将apoaeqorin基因交叉进入GydF4y2Baglr2.4GydF4y2Ba那GydF4y2Baglr2.5GydF4y2Ba和GydF4y2Baglr3.3GydF4y2Ba敲门背景。数字GydF4y2Ba11GydF4y2BaB证明GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba渗出的制剂诱导[加利福尼亚州GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}这表明这些假定的浆膜定位转运体并不参与CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba虽然基因GydF4y2BaGLR2.4级GydF4y2Ba是上调的GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba- 感染的幼苗（图GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba

调查[加利福尼亚州GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}疾病发展需要海拔，GydF4y2BaCycam1.GydF4y2Ba感染了GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba并将突变体幼苗的发育情况与野生型幼苗进行了比较。在地上部分未检测到明显的疾病症状，这表明[CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}海拔不是必需的GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba传播（附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：图S6）。GydF4y2Ba

我们的数据表明了这一点GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba是一个非常有效的生物控制代理GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥枯萎病。GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba限制GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在琼脂平板上生长（图GydF4y2Ba1GydF4y2Ba）和拟南芥根，特别是当他们首次殖民时GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在感染之前GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba（数字GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba). 分子生物学和生物化学分析表明，细胞的生长速率降低GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba-预处理的拟南芥根阻碍防御基因的表达（图GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba），抗辩相关的植物激素的积累（图GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba）和气孔闭合（图GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba)．幼苗的性能明显更好（图GydF4y2Ba2GydF4y2Ba)在将幼苗转移到蛭石上一段较长的时间后，这种情况也会继续（图1）GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba不仅抑制了GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥的菌丝体，但也防止了病原体的传播到植物的空中部位（图GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba)．此外，强烈减少了微克罗罗基形成（图GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba)．此前，已经鉴定了几种土壤传播的细菌作为Verticillium Wilt的生物防治剂[GydF4y2Ba29GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba46GydF4y2Ba] - [GydF4y2Ba48GydF4y2Ba］．GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在马铃薯中能诱导芦丁等抗菌代谢产物[GydF4y2Ba49GydF4y2Ba]拟南芥的致病相关蛋白[GydF4y2Ba12GydF4y2Ba]参与病原菌抗性。Prieto等人[GydF4y2Ba50GydF4y2Ba]证明了根发殖民化在中发挥着重要作用GydF4y2Ba假单胞菌GydF4y2BaSPP.-介导的橄榄根枯萎的生物控制活性。此外，这是GydF4y2Ba枯草芽孢杆菌GydF4y2Ba菌株NCD-2作为棉花黄萎病的生物防效剂，棉花PhoR/PhoP双组分调控系统参与了该细菌的生物防效[GydF4y2Ba51GydF4y2Ba］．法定感测也参与生物控制活动GydF4y2BaSerratia plymuthicaGydF4y2Ba反对GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba[GydF4y2Ba52GydF4y2Ba]. 中度干旱对丛枝菌根真菌防治辣椒黄萎病效果的影响[GydF4y2Ba53GydF4y2Ba］．看起来似乎是不同的机制控制真菌传播，可能是因为病原体的复杂生活方式，允许在不同水平和不同植物组织中进行微生物干扰。GydF4y2Ba

最近鉴定出越来越多的基因涉及建立对患者的部分抗性（CF.背景）。病原体攻击包括根殖民化GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba气孔关闭是植物防御的第一道防线(图GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba)．GydF4y2Barabgap22GydF4y2Ba防御需要GydF4y2BaV. longisporum.GydF4y2Ba促进气孔免疫[GydF4y2Ba20GydF4y2Ba］．GydF4y2Barabgap11.GydF4y2Ba基因是上调的GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba并被压抑GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（数字GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)．最后，防御素在植物防御中发挥作用GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

控制微菌核的形成对防止黄萎病菌在自然界和农业中的传播至关重要。我们的数据表明GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在限制拟南芥根系中的微克罗罗基形成（图GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba），推测，因为病原体在存在的情况下不能快速发展GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba．MicroSclerotia的形成也被verticillium本身抑制，即，通过真菌转录活化剂的粘合Vta2，并且Vta2中受损的真菌不能殖民化植物并诱导疾病症状[GydF4y2Ba21GydF4y2Ba］．一起携带，GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba限制GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba生长以及菌丝和小孢子的繁殖，反过来，这导致植物防御过程在较低的水平被激活GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba治疗方法可能取决于GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba——厂房,GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba互动模式和攻击策略GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．这不仅重要的是对个体植物的更好性能，而且对控制的严重后果也是严重的长期后果GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba传播GydF4y2Ba通过GydF4y2Ba生态系统和农业区域的Microclerotia。GydF4y2Ba

GRL同源物与Ca有关GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba通过质膜流入。数字GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba证明mRNA水平GydF4y2BaGLR2.4级GydF4y2Ba在叶子中上调GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba- 培养的拟南芥幼苗和这些反应受幼苗预处理的限制GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba．GLR3.3参与植物防御和抵抗力GydF4y2BaHyaloperonospora arabidopsidisGydF4y2Ba[GydF4y2Ba44GydF4y2Ba]. 这个protein also mediates glutathione-triggered [Ca^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}拟南芥的瞬时、转录变化和先天免疫应答[GydF4y2Ba54GydF4y2Ba］．GydF4y2BaGLR2.5级GydF4y2Ba在伤害时拟南芥细胞培养物上调[GydF4y2Ba43GydF4y2Ba] 和GydF4y2BaGLR2.4级GydF4y2Ba是由拟南芥根中的线虫诱导的[GydF4y2Ba42GydF4y2Ba]. GLR2.4，也称为AUGMIN亚基8，是一种微管加末端结合蛋白，促进微管在下胚轴中的重新定向[GydF4y2Ba55GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba56GydF4y2Ba］．微管和微管取向对于植物防御和免疫性很重要[GydF4y2Ba56GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba57GydF4y2Ba]也参与了GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥交互。胡等人[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba[证明，组蛋白H2B单体化参与在防御响应期间调节微管的动态GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥中的毒素。袁等。[GydF4y2Ba58GydF4y2Ba]表明了GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba毒素中断了拟南芥悬浮细胞中的微丝和微管。数字GydF4y2Ba11GydF4y2BaA表示从GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba诱导[加利福尼亚州GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}拟南芥根系的海拔。为了测试[caGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}升高是由三个GLRs之一介导的，我们产生了转基因GydF4y2Baglr3.3GydF4y2Ba那GydF4y2Baglr2.5GydF4y2Ba和GydF4y2Baglr2.4GydF4y2Ba在apoaequorin背景中发现[CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}响应不受三个GLR控制（图GydF4y2Ba11GydF4y2Bab），虽然mRNA水平GydF4y2BaGLR2.4级GydF4y2Ba被上调GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染(图GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)．这表明GLR有不同的功能GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥交互。然而，甲基磺酸乙酯诱导的拟南芥突变体命名为GydF4y2BaCycam1.GydF4y2Ba不能诱导[CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}回应渗出物制剂的升高GydF4y2Baalertaria brassicae.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba茄丝核菌GydF4y2Ba那GydF4y2Ba疫霉parasiticaGydF4y2Bavar。GydF4y2BanicotianaeGydF4y2Ba和GydF4y2Ba农杆菌肿瘤术GydF4y2Ba[GydF4y2Ba45GydF4y2Ba]没有回应GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba渗出液制备（图GydF4y2Ba11GydF4y2Bab）。这证明了至少一个GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba-诱导的导致Ca开放的信号事件GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba频道或频道本身与响应其他病原体的渗出性制剂的频道相同[GydF4y2Ba45GydF4y2Ba］．但是，减少了CAGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba反应在GydF4y2BaCycam1.GydF4y2Ba突变体不影响疾病的发展。尚不清楚哪一种是诱发[CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}在拟南芥根中的反应，以及在植物中的突变基因是什么GydF4y2BaCycam1.GydF4y2Ba突变体。GydF4y2Ba

已经假设了几种渗出的化合物以诱导植物的致病性。klosterman等。[GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba]提出，基于牙出物种的序列信息，致病性可能是由不同化合物和具有不同功能的不同化合物和具有不同功能的血管性的致病性。通常使用粗毒素制剂，尽管该制剂的精确组成和各种化合物的作用尚不清楚。例如，最近Yao等人。[GydF4y2Ba59GydF4y2Ba]已经证明GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba毒素制剂刺激拟南芥中的一氧化氮产生，其用作H的信号传导中间GydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba调节动态微管细胞骨架。这可以链接GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba毒素函数再次致触发器2.4，谁的mRNA水平是上调的GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染(图GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)．Wang等人。[GydF4y2Ba60.GydF4y2Ba[报道了一种名为PEVD1的新型过敏的响应诱导蛋白ELICITOR的纯化和表征GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba诱导烟草产生抗性反应。诱导[CaGydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}对诱导疾病反应的毒素的反应需要调查。GydF4y2Ba

有趣的是，我们没有观察到繁殖之间的线性关系GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在幼苗和抗辩相关的植物激素水平的积累。例如，当幼苗暴露到时，植物激素水平总是很高GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba无论他们是否接触到GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba单独处理GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba或者首先GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba紧随其后的是GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（数字GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba）虽然，增长GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba被强烈减少了GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba预处理（图GydF4y2Ba1GydF4y2Ba)．这表明即使是低感染率GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba足以刺激防御激素的积累。尽管传播，这可能是一种预防措施GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba当根预处理时被抑制GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

各种报告显示植物激素参与在拟南芥中对伐霉菌生长的控制。细胞分裂素水平的稳定增强了拟南芥的抵抗GydF4y2BaV. longisporum.GydF4y2Ba[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]. 这种真菌还需要根中依赖于JA的COI1功能来引发拟南芥新梢的病害症状[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba］．乙烯感知GydF4y2Ba通过GydF4y2Ba受体ETR1是GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba拟南芥侵染[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba］．增强的抵抗力GydF4y2BaETR1-1.GydF4y2Ba植物，但不是SA-，JA-或其他ET缺陷突变体GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染表明ETR1在防御这种病原体方面起着至关重要的作用。我们观察到拟南芥具有特别显著的抗性GydF4y2BaEIN3.GydF4y2Ba突变体GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba感染GydF4y2Ba体内GydF4y2Ba和GydF4y2Ba体外GydF4y2Ba（附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：图S5）。这与Pantelides等人的报告一致。[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba] 为了GydF4y2BaETR1.GydF4y2Ba虽然他们没有观察到ein3在学习中的重要作用。我们的数据表明，EIN3在致病性中起重要作用，并提供了一个重要的工具来鉴定所需的EIN3调节基因GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba疾病发展。此外，ET水平GydF4y2BaEIN3.GydF4y2Ba突变体暴露于GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba比?高得多GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba-暴露WT幼苗(图GydF4y2Ba10GydF4y2BaC）。这表明反馈回路，其中缺乏EIN3引起的防御反应GydF4y2BaEIN3.GydF4y2Ba突变体导致ET合成的额外刺激。GydF4y2Ba

总之，我们的数据表明了这一点GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba是一个非常有效的生物控制代理GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．这主要是由于限制GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba成长在存在之中GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba．似乎有额外的机制，防止致病性GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在…面前GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba．例如，植物激素水平累积到可比水平GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba和GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba苗,虽然GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在存在的情况下，传播受到限制GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba（数字GydF4y2Ba1GydF4y2Ba). 自GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba预处理严重降低了防御基因的表达，尽管在这些组织中有相当的植物激素水平，额外的信号来自GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba一定要参与调节免疫应答对抗吗GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

幼苗和真菌的生长状况GydF4y2Ba

A.拟南芥GydF4y2Ba野生型（生态型哥伦比亚-0）种子，种子GydF4y2Baglr2.4GydF4y2Ba那GydF4y2Baglr2.5GydF4y2Ba那GydF4y2Baglr3.3GydF4y2Ba和GydF4y2BaEIN3.GydF4y2Ba突变体以及GydF4y2BaCycam1.GydF4y2Ba突变体[GydF4y2Ba45GydF4y2Ba]表面消毒，用MS培养基置于培养皿上[GydF4y2Ba61.GydF4y2Ba］．在4℃冷处处理48小时后，在长日条件下在22℃下在22℃温育11天（16小时光/ 8小时暗;80μmolmGydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba证券交易委员会GydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba如前所述，在KM培养基上生长3-4周[GydF4y2Ba62.GydF4y2Ba]. 有关详细信息，请参见Johnson等人的A节和B节[GydF4y2Ba63.GydF4y2Ba］．GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba（FSU-343，德国耶和华微生物资源中心）在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）中生长2-3周[GydF4y2Ba64.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

Co-cultivation化验GydF4y2Ba

用于13日龄的共培养试验GydF4y2BaA.拟南芥GydF4y2Ba使用相同的幼苗。coGydF4y2BaA.拟南芥GydF4y2Ba和真菌GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba和/或GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba正在进行中GydF4y2Ba体外GydF4y2BaJohnson等人描述的PNM培养基上尼龙膜上的培养条件([GydF4y2Ba63.GydF4y2Ba]，C1 - 方法1部分）具有几种修改。GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba生长了12天GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba在培养皿中的PNM培养基上的膜上10天。然后将13天的拟南芥幼苗转移到GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba或者GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba板或嘲弄治疗（无真菌; C）。对于换档实验，在4天后将幼苗与其他真菌一起转移到平板（来自GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba到GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba或者GydF4y2Ba亦然GydF4y2Ba)．包括（c），比较五种不同的治疗方法：（1）拟南芥幼苗生长GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba或者GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba（C）;（2）没有GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba与GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba（GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba）;(3)与GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba而且没有GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba); (4） 与GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba转移前4天GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba板块（GydF4y2Ba1p2v.GydF4y2Ba)（5）与GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba转移前4天GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba板块（GydF4y2Ba1V2P.GydF4y2Ba)．在暴露于第一个真菌（或模拟处理）后1至21天收获幼苗以进一步分析。时间方案显示在附加文件中GydF4y2Ba1GydF4y2Ba:图S1。光强度（80μmolmGydF4y2Ba^-2GydF4y2BaS.GydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba每周检查一下。单独收获芽和根，用于DNA和RNA分析。GydF4y2Ba

无菌蛭石长期共培养GydF4y2Ba

将30 g蛭石放入一个品红盒（Sigma-Aldrich，德国）中，并在121℃下高压灭菌30分钟。添加40 ml无菌液体PNM培养基后，将在培养皿中生长10天的拟南芥幼苗转移到无菌蛭石盒中（每盒1株）。对每种处理的16株幼苗进行了分析。10d后测定存活植株数、生物量和真菌DNA含量。GydF4y2Ba

基因表达分析GydF4y2Ba

使用ICCLER IQ实时PCR检测系统和ICYCLER软件版本2.2（BIO-RAD），从芽和实时定量PCR分析中分离RNA，用于实时定量PCR分析。从拟南芥芽的5个独立的生物实验中分离出总RNA。使用1μgRNA使用OMNIScript cDNA合成试剂盒（qiagen）合成cDNA。对于RT-PCR产物的扩增，根据制造商的方案在20μL的最终体积的情况下使用IQ SYBR Green Supermix（Bio-rad）。将ICYCLER编程为95°C 3分钟，40×（95°C 30秒，57°C 15秒，72°C 30秒），72℃10分钟，然后是熔化曲线程序55°C至95°C增加0.5℃的步长。所有反应一式三份进行。相对于甘油 - 醛-3-磷酸脱氢酶归一化每个cDNA探针的mRNA水平（GydF4y2BaGAPDH.GydF4y2Ba)mRNA水平。引物对在附加文件中给出GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：表S1。GydF4y2Ba

通过PCR定量真菌DNAGydF4y2Ba

基因组DNA提取采用DNeasy植物小试剂盒。取12.5ng DNA作为PCR模板。这些反应是用基因特异性引物进行的，见附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：表S1。有关详细信息，请参阅Camehl等。[GydF4y2Ba65.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

PI和VD的双重文化GydF4y2Ba

二元文化GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba和GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba如Johnson等人所述进行琼脂平板。[GydF4y2Ba66.GydF4y2Ba］．一种GydF4y2Ba圆周率GydF4y2Ba直径为5 mm的插头放置在PDA板的一端和aGydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在板的另一端插入相同的尺寸。将板在22-24℃下在黑暗和75％相对湿度下孵育。在共同培养3周后采取了照片。GydF4y2Ba

百分比疾病指数（PDI）计算GydF4y2Ba

疾病指数计算公式如下:GydF4y2Ba

NGydF4y2Ba_1-5GydF4y2Ba=各疾病的受影响叶子的数量。GydF4y2Ba

严重程度等级（0-5），xGydF4y2Ba_1-5GydF4y2Ba=基于受影响叶面积百分比的疾病严重程度等级。1, 1% ≤ × ≤ 10%; 2, 10% < × ≤ 20%; 3, 20% < × ≤ 30%; 4, 30% <× ≤ 40%; 5, × > 40%; ×100：按百分率计算。根据病叶面积估算病害严重程度。Naik和Lakkund描述了1-5个疾病严重程度等级[GydF4y2Ba67.GydF4y2Ba]，[GydF4y2Ba68.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

茉莉酸(JA)、茉莉异亮氨酸(JA- ile)、脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)、氧植二酸(OPDA)和乙烯(ET)的定量分析GydF4y2Ba

从每种处理中收集250mg芽材料的独立样品。通过加入含有60 ng D的1ml乙酸乙酯来进行植物激素萃取（JA，JA-ILE，ABA，SA和OPDA）GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba-JA和40 ng的DGydF4y2Ba_6.GydF4y2Ba-Aba，DGydF4y2Ba_4.GydF4y2Ba-SA和JA-GydF4y2Ba^13GydF4y2BaCGydF4y2Ba_6.GydF4y2Ba- ILILE（OPDA具有与JA相同的内部标准物）至100毫克地面组织。然后将所有样品涡旋10分钟并在4℃下以13,000rpm以13,000rpm离心20分钟。收集上清液并使用真空浓缩器在30℃下蒸发至干。将残留物重新悬浮在500μlmeoh：h中GydF4y2Ba_2GydF4y2BaO（70:30，V / V）并以13,000rpm离心10分钟。收集上清液并用API 3200 LC-MS / MS系统（Applied Biosystems，Framingham，USA）测量，如前所述[GydF4y2Ba69.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

对于ET测量，将来自每种处理的100mg芽材料收集到4ml小瓶（德国罗斯）中。在4小时内累积后，用ETD-300乙烯检测器进行测量（传感器感测B.V.，Nijmegen，荷兰）进行。GydF4y2Ba

叶绿素含量GydF4y2Ba是由Yang等人确定的[GydF4y2Ba70GydF4y2Ba]以g鲜重为基础。GydF4y2Ba

微克洛蒂碧罗基的量化GydF4y2Ba

3种处理对拟南芥幼苗根系的影响GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba在培养皿中共培养3周后收获并转移到具有80μL乳酸/甘油/ H的微观玻璃载玻片中GydF4y2Ba_2GydF4y2Bao（1：1：1）。在光学显微镜下可视地计算在根中形成的微克罗特菌的数量平均值（放大率：x200）。实验独立进行3次，对于每种处理，分析了12个幼苗的根。GydF4y2Ba

细胞质Ca2 +（[Ca2 +] cyt）测量GydF4y2Ba

使用21天大的野生型（WT）植物和在Hoagland培养基中生长的突变体进行基于aeqourin的发光测量[GydF4y2Ba71.GydF4y2Ba］．Wt Aequorin（PMAQ2）植物用作对照[GydF4y2Ba72.GydF4y2Ba］．突变体(GydF4y2Baglr2.4GydF4y2Ba那GydF4y2Baglr2.5GydF4y2Ba和GydF4y2Baglr3.3GydF4y2Ba）被交叉回野生型表达AEQUORIN。基于[CA的2代选择后GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}T-DNA插入检查的反应和RT-PCR，纯合子种子用于所述实验。用于纯合子测试的引物在附加文件中给出GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：表S1。对于[加利福尼亚州GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}通过测量，每株幼苗约70%的根系被解剖，并在黑暗中于20℃在96孔板（Thermo Fischer Scientific，Finland，cat）中于150μl 7.5μM柯伦曲嗪（P.J.K.GmbH，德国）中培养过夜。编号9502887）。用微板光度计（Luminoskan Ascent，2.4版，芬兰热电公司）将根的生物发光计数记录为相对光单位（RLU）。GydF4y2Ba

从VD菌丝体的制备GydF4y2Ba

一个5毫米GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba如zhen等人所述，在Czapek的媒体中接种真菌塞。[GydF4y2Ba73.GydF4y2Ba]生长3周。然后，通过双层滤纸过滤真菌培养物，将滤液以10,000离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba30分钟，去除孢子。上清用透析膜(MWCO) (Spectra/Por®Float-A-lyzer®)在pH 7.0的10 mM磷酸盐缓冲液中透析24小时，透析液冷冻并冻干。将粉末溶解在蒸馏水中，通过0.45 μm孔径的Millipore (Roth，德国)过滤器过滤。所得滤液用作进一步实验的渗出液。GydF4y2Ba

统计数据GydF4y2Ba

所有统计分析都是使用Excel或SPSS 17.0（SPSS Inc.，IL，USA）进行ANOVA进行的。GydF4y2Ba

支持数据的可用性GydF4y2Ba

所有支持数据作为附加文件包含。GydF4y2Ba

vd.GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

verticillium dahliae.GydF4y2Ba

圆周率GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

piriformospora indica.GydF4y2Ba

[加利福尼亚州GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba]GydF4y2Ba_{cyt.GydF4y2Ba}：GydF4y2Ba

胞质钙GydF4y2Ba

Cycam1.GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

细胞溶质钙升高蛋白质1GydF4y2Ba

GLR.GydF4y2Ba谷氨酸受体GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

突变体GydF4y2Ba

EIN3.GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

乙烯 - 不敏感3突变体GydF4y2Ba

JA：GydF4y2Ba

茉莉酸GydF4y2Ba

JA-Ile：GydF4y2Ba

茉莉基异亮氨酸GydF4y2Ba

阿坝:GydF4y2Ba

脱盐酸GydF4y2Ba

SA：GydF4y2Ba

水杨酸GydF4y2Ba

opda：GydF4y2Ba

Oxophytodinoic酸GydF4y2Ba

等:GydF4y2Ba

乙烯GydF4y2Ba

WT：GydF4y2Ba

野生型GydF4y2Ba

我们要感谢Sarah Mußbach和Claudia Röppischer，感谢他们出色的技术援助。特别感谢来自德国哈勒莱布尼茨植物生物化学研究所的Justin Lee博士提供的帮助GydF4y2BaEIN3.GydF4y2Ba突变种子和德国基尔大学的笪光彩教授提供GydF4y2Bavd.GydF4y2Ba引物。C.S.是由德国科学基金会和德国交流计划（Daad）的支持。R.O.和k-w.y。由旅行交换项目（DAD）提供支持。GydF4y2Ba

隶属关系GydF4y2Ba

1. 植物生理研究所，弗里德里希 - 席勒大学耶拿，Dornburger str。159，耶拿，07743，德国GydF4y2Ba

   Chao Sun，Khabat Vahabi，Irena Sharameti＆RalfOelmüllerGydF4y2Ba

2. 马克斯·普朗克化学生态学研究所，汉斯·克诺尔大街8号，耶拿，D-07745，德国GydF4y2Ba

   永琪邵，景路，Samik Bhattacharya＆Ian T BaldwinGydF4y2Ba

3. 长江大学生命科学学院，荆州GydF4y2Ba

   董雪琴GydF4y2Ba

4. 台湾大学植物生物学研究所，台湾台北GydF4y2Ba

   Kai-wun yehGydF4y2Ba

5. 浙江大学生物技术研究所，杭州310058GydF4y2Ba

   宾根娄GydF4y2Ba

6. 浙江大学昆虫科学研究所，中国杭州310058GydF4y2Ba

   景璐GydF4y2Ba

通讯作者GydF4y2Ba

对应到GydF4y2BaRalfoelmüller.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

相互竞争的利益GydF4y2Ba

提交人声明他们没有竞争利益。GydF4y2Ba

作者的贡献GydF4y2Ba

CS设计并执行了大部分实验。YQS准备了GydF4y2BaV. Dahliae.GydF4y2Ba. KV有助于根系显微镜和土壤长期试验。JL和SB进行了植物激素分析。SD、K-WY、BL和ITB参与了讨论。CS，IS和RO写了这篇文章。罗指导了这项研究。所有作者都阅读并批准了最后的手稿。GydF4y2Ba

开放存取GydF4y2Ba本文根据创意公约归因于4.0国际许可证，这允许在任何中或格式中使用，共享，适应，分发和复制，只要您向原始作者和来源提供适当的信贷，提供了一个链接到Creative Commons许可证，并指出是否进行了更改。GydF4y2Ba

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