图3.

验证玉米密码子优化的CAS9和三种POL-III启动子在玉米原生质体中驾驶GRNA表达。（一种）来自ZM的目标网站的序列HKT1.轨迹。PAM，推定的乳沟网站（红色箭头），以及XCM.指示I网站（盒装）。（公元前）突变分析XCM.我消化了PCR片段。GFP，201,301,401（b）：分别从用PUC-GFP（对照），PBUN201-ZT1，PBUN301-ZT1和PBUN401-ZT1分别转染的玉米原生质体的基因组DNA的PCR片段。三个CRISPR / CAS9载体具有相同的GRNA但不同Cas9.：HCAS9-1/2，两种类型的人密码子优化Cas9.;ZCAS9.那Zea Mays.密码子优化Cas9.。GFP，401,411,421（C）：PCR片段来自PUC-GFP，PBUN401-ZT1，PBUN411-ZT1和PBUN421-ZT1转染;三个CRISPR / CAS9矢量具有相同的Z.Cas9.和GRNA，但GRNA由三种不同的POL-III启动子驱动。- 并且+表明PCR片段是否被消化XCM.I.基于残余未消化的PCR片段（+泳道：569bp）的百分比百分比计算突变效率（％indel）对总PCR产物（ - 通道）;WT Indel值应被视为背景级别。（d，e）抗克隆PCR片段抗性突变等位基因序列的对准XCM.我消化了。突变的等位基因包括缺失（d）和插入（e）。点，删除的基础。突出显示表示对齐片段的同源性，并且仅示出了对准的感兴趣区域。表示indel的类型和相同类型的indel的数量。