烟草光合器官的光抑制和类光抑制损伤GydF4y2Ba假单胞菌含油GydF4y2Bapv。GydF4y2Ba烟粉虱GydF4y2Ba在轻微和黑暗的条件下GydF4y2Ba

背景GydF4y2Ba

丁香假单胞菌GydF4y2Bapv。GydF4y2Ba烟粉虱GydF4y2Ba（GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba)是引起烟草野火病的病原菌，近年来受到广泛关注。本研究的目的是阐明光系统I（PSI）和光系统II（PSII）对细胞凋亡的反应GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟草叶子的感染。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

光合速率（Pn）和羧化效率（CE）受到抑制GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染。K阶归一化相对变量荧光(GydF4y2BaW.GydF4y2Ba_K.GydF4y2Ba)J阶相对可变荧光(GydF4y2BaV.GydF4y2Ba_jGydF4y2Ba）PSII的最大量子产量增加（GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba）和密度GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}-每个截面的还原性PSII反应中心（RC/CSm）减少，说明PSII的反应中心、供体和受体侧均受到严重损伤GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染。随着感染的进展，PSI活性降低。此外，我们观察到PsbO、D1、PsaA蛋白的整体降解和活性氧(ROS)的过度积累。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

在轻微和黑暗条件下观察到光裸露和光含量的损坏，之后GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟叶感染。黑暗中的伤害更大。ROS的过度积累不是光抑制和光抑制样损伤的主要原因。PsbO、D1和PsaA蛋白似乎是治疗的靶点GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在轻微和黑暗条件下感染。GydF4y2Ba

在自然条件下，除了非生物胁迫外，植物还受到各种生物胁迫，包括病原体的感染和食草动物的攻击[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba2GydF4y2Ba]. 生物胁迫使全球作物产量平均下降15%[GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba］．与真菌和病毒引起的植物感染的研究相比，关于细菌感染植物的研究相对较少[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]. 细菌病原体感染的效果取决于感染的严重程度和时间，但也取决于特定类型的细菌和基因型相关的宿主耐药性[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba］．细菌感染强烈影响光合作用。事实上，据报道，编码光合作用的基因是下调的[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba]光系统II（PSII）蛋白的变化发生在GydF4y2Ba丁香假单胞菌GydF4y2Ba来华的植物(GydF4y2Ba10GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

丁香假单胞菌GydF4y2Ba是能攻击多种植物的机会性细菌病原体[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba]. 至少有50个GydF4y2BaP丁香GydF4y2Ba基于其宿主植物特异性和疾病类型的病毒症状[GydF4y2Ba12GydF4y2Ba那GydF4y2Ba13GydF4y2Ba］．以前的研究表明，最大PSII量子产量（GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/F级GydF4y2Ba_mGydF4y2Ba)开放PSII陷阱的量子产率(GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba'GydF4y2Ba/F级GydF4y2Ba_mGydF4y2Ba'），并且非平淡细胞淬火（NPQ）降低GydF4y2Ba拟南芥GydF4y2Ba感染病毒的叶子GydF4y2BaP丁香GydF4y2Ba光伏GydF4y2Ba．番茄DC3000.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba美国专利商标局GydF4y2Ba) [GydF4y2Ba14GydF4y2Ba那GydF4y2Ba15GydF4y2Ba］．psii的实际光化学效率降低（φGydF4y2Ba_{PSII公司GydF4y2Ba})此外，还观察到NPQGydF4y2Ba动力输出轴-GydF4y2Ba感染GydF4y2Ba菜豆GydF4y2Ba树叶[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba]. 此外，NPQ的下降也被观察到GydF4y2BaP丁香GydF4y2Ba光伏GydF4y2Ba．phopololicola.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba产后大出血GydF4y2Ba)-受感染的豆科植物，而GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/F级GydF4y2Ba_mGydF4y2Ba保持稳定(GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]. 此外，ΦGydF4y2Ba_{PSII公司GydF4y2Ba}同时检测NPQGydF4y2Ba产后大出血GydF4y2Ba-感染“加拿大奇迹”GydF4y2BaP庸俗GydF4y2Ba树叶[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba］．相比之下，减少了GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba'GydF4y2Ba/F级GydF4y2Ba_mGydF4y2Ba’，在大豆叶片中NPQ增加GydF4y2BaP丁香GydF4y2Ba光伏GydF4y2Ba．glycineaGydF4y2Ba[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba］．作为最重要的悲欢访问之一，GydF4y2BaP丁香GydF4y2Bapv。GydF4y2Ba烟粉虱GydF4y2Ba（GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba)是一种半生物营养性细菌病原体，寄生在烟草叶片上，在被称为野火病的感染过程中引起褐色斑点的形成[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba那GydF4y2Ba19GydF4y2Ba]. 更好地理解如何管理GydF4y2BaP丁香GydF4y2Ba感染，我们把重点放在烟草上-GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba模型探病系统。虽然最近在宽容上完成了相当大的研究GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba[GydF4y2Ba20GydF4y2Ba-GydF4y2Ba22GydF4y2Ba]而受上述其它病原菌侵染的植物的光合性能，对烟草生长过程中光合性能的研究还很少-GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba交互。GydF4y2Ba

DGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba蛋白质是PSII反应中心的核心蛋白。PSII一级醌电子受体对光合电子传递（PET）的抑制作用(GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba})对PSII的次醌电子受体(GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_B.GydF4y2Ba)因此可能与D的降解有关GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba蛋白质[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba］．类似地，PSBO，氧气不断发展的复合物（OEC）的核心组分对OEC的功能至关重要[GydF4y2Ba24GydF4y2Ba］．此外，光照I（PSI）PhotoInhibition与PSAA的降级有关[GydF4y2Ba25GydF4y2Ba]. 在一些研究中，使用PET抑制剂3-（3,4-二氯苯基）-1,1-二甲基脲和2,5-二溴-3-甲基-6-异丙基苯醌模拟黑暗条件[GydF4y2Ba26GydF4y2Ba那GydF4y2Ba27GydF4y2Ba]. 然而，这项研究主要集中在PET的影响GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染。因此，这些抑制剂没有被使用。GydF4y2Ba

我们的目标是确定PSI和PSII对光照和暗照的反应的差异GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟草叶的感染。我们还旨在确定在期间发生光抑制GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染。为了解决这些问题，我们（1）评估了PSII的供体和受体侧、反应中心的变化以及术后的PSI活性GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染，（2）监测反应性氧物质（ROS）的生产，（3）对处理烟叶的紫胶膜蛋白的蛋白质印迹分析进行了蛋白质印迹分析。我们比较了光合仪器的响应GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在轻微和黑暗条件下感染。GydF4y2Ba

影响GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟叶渗透区叶绿素含量的感染GydF4y2Ba

在感染后第3天，我们观察到浸润区出现褪绿病变，而仅在黑暗中处理的叶片在感染后第3天观察到坏死。无论是在光照条件下还是黑暗条件下，烟草叶片的浸润区都表现出明显的野火症状（图1）。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba). 这个到T.一种l chlorophyll content in infected leaves at 3 dpi was lower than that of untreated leaves (Fig.2GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba

影响GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟草供体和受体的侵染及PSII反应中心的研究GydF4y2Ba

我们使用JIP-Test来检测PSII的变化GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba-在光照和黑暗条件下感染的烟叶。澄清的影响GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在PSII上，OJIP曲线标准化为(GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba−GydF4y2BaFGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba)水平。随着时间的推移，OJIP瞬态的形状发生了变化，K点和J点显著增加，振幅随着接种时间的增加而增加（图。GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba). 这个K.S.T.E.p (at 300 μs) of the chlorophyll一种GydF4y2Ba荧光瞬态（量化为GydF4y2BaW.GydF4y2Ba_K.GydF4y2Ba)在光合器官中被广泛用作放氧复合物（OEC）损伤的特异性指标[GydF4y2Ba28GydF4y2Ba那GydF4y2Ba29GydF4y2Ba]. 我们观察到GydF4y2BaW.GydF4y2Ba_K.GydF4y2Ba之后增加GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在轻微和黑暗条件下感染。随着时间的推移，增加更明显，表明PSII的供体侧的活性受到抑制，并且OEC受损。与未经处理的叶子相比，GydF4y2BaW.GydF4y2Ba_K.GydF4y2Ba在光照和暗条件下，3 dpi分别增加了12.9 %和25.6%。GydF4y2Ba4a级GydF4y2Ba那GydF4y2BaB.GydF4y2Ba). J阶相对可变荧光(GydF4y2BaV.GydF4y2Ba_jGydF4y2Ba)表示电子传输链的后续动力学瓶颈，导致瞬时最大累积GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}^−GydF4y2Ba[GydF4y2Ba30GydF4y2Ba那GydF4y2Ba31GydF4y2Ba］．GydF4y2BaV.GydF4y2Ba_jGydF4y2Ba是PSII反应中心关闭程度或氧化还原状态的指标GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}[GydF4y2Ba32GydF4y2Ba］．在这项研究中，与未经处理的叶子相比，GydF4y2BaV.GydF4y2Ba_jGydF4y2Ba在光和暗条件下分别在3 dpi下在渗透区增加13.9和103％（图。GydF4y2Ba4摄氏度GydF4y2Ba那GydF4y2BaD.GydF4y2Ba)．因此，电子传输GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}到GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_B.GydF4y2Ba之后被严重封锁GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟草叶子的感染。此外，在黑暗中抑制K和J步骤更加明显，如较大增加所示GydF4y2BaW.GydF4y2Ba_K.GydF4y2Ba和GydF4y2BaV.GydF4y2Ba_jGydF4y2Ba在黑暗中的价值GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba接种（图。GydF4y2Ba4a级GydF4y2Ba-GydF4y2BaD.GydF4y2Ba). 这个m一种ximum quantum yield of PSII (FGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba）和密度GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}^−GydF4y2Ba在3dpi条件下，每横截面还原PSII反应中心（RC/CSm）值分别下降到未处理叶片（光照条件下）值的94.7%和85.4%（图。GydF4y2Ba4e级GydF4y2Ba那GydF4y2BaGGydF4y2Ba). 这个GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba在3dpi时，处理叶片的RC/CSm值分别下降到未处理叶片（黑暗条件下）的91.9%和66.8%（图。GydF4y2Ba4楼GydF4y2Ba那GydF4y2BaHGydF4y2Ba)．GydF4y2Ba

影响GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟叶PSI复合物活性的影响GydF4y2Ba

我们观察到处理叶片之间的PSI活性有相当大的差异。在光照和暗照条件下，处理叶片的PSI复合物活性在3dpi时分别为未处理叶片的80.0%和70.8%（图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)．这表明P700光氧化迅速且有效地受损GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba光照和暗照条件下烟叶的侵染。此外，PSI活性的降低程度在黑暗中更大（图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba

影响GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟草叶片碳同化的影响GydF4y2Ba

在3dpi时，处理叶片的净光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）和羧化效率（CE）分别比对照低69.3、17.5和21.1%。相反，细胞间的COGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba在3 dpi时，处理叶片的浓度（Ci）值比模拟对照高23.6%（表1）。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba

相对活性氧水平变化GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba烟叶感染GydF4y2Ba

我们评估HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba生产GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba-在光照和暗照条件下，3dpi下烟叶的渗透区是由于HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba是最稳定的ROS可以容易测量[GydF4y2Ba33GydF4y2Ba]. 这个production of H_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba在GydF4y2BaPst公司-GydF4y2Ba光照和暗照条件下3dpi下烟叶的渗透带。HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba在光照和暗照条件下，处理叶片的含量分别比未处理对照高269%和112%（图。GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba)．这意味着ROS的过度累积诱导GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在光照条件下以及在较小程度上黑暗条件下烟草叶片中的感染。GydF4y2Ba

太平洋标准时间GydF4y2Ba- 在烟草叶中诱导PSBO，D1和PSAA蛋白的降解GydF4y2Ba

D1蛋白池尺寸代表了完全组装的PSII中心的丰富，因为每个反应中心有一个D1亚基。当它纳入PSII反应中心时，成熟的蛋白质仅才积累。PSBO，D1和PSAA蛋白的含量分别降至67.0,65.1和70.0％，在光条件下分别在3 dpi下的水处理叶的值。在暗条件下，核心蛋白在3 dpi下降低至44.1,51.0和50.2％的水处理叶值的值（图。GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba

我们观察了由斑块覆盖的黑斑组成的病变，在黑暗中为3 dpi（图。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba). 根据侵染机理，植物病原菌一般可分为三类（坏死营养体、生物营养体和半生物营养体）。生物营养需要活组织来生长和繁殖。坏死营养在感染初期杀死宿主组织并以死亡组织为食。半生物营养在转入坏死营养阶段之前以生物营养体的形式存在[GydF4y2Ba34GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

我们的研究表明，叶绿素含量下降了相当大的过程中GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在光和暗条件下接种（图。GydF4y2Ba2GydF4y2Ba)．在几种植物 - 病原体相互作用中观察到叶绿素降解[GydF4y2Ba35GydF4y2Ba那GydF4y2Ba36GydF4y2Ba］．Kudoh和Sonoike报道，在PSI损伤后的早期恢复期，叶绿素降解发生以防止吸收过量的光能，否则会导致光系统的二次损伤[GydF4y2Ba37GydF4y2Ba］．此外，托马斯报道了塔毒素-β-内酰胺，最初被描述为来自的毒素GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba是一种二肽，其水解产物不可逆地抑制谷氨酰胺合成酶并诱导烟叶叶绿素降解[GydF4y2Ba38GydF4y2Ba]. 因此，推测的烟草毒素活性GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba而在PSI损伤后，烟草叶片对光保护的需要可能是观察到的叶绿素降解的原因。GydF4y2Ba

叶片Pn的降低可能是由于CO的限制GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba由于气孔导度降低或卡尔文循环中酶的过程的扰动而向羧化位点扩散[GydF4y2Ba39GydF4y2Ba]. Gs降低，Ci升高GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba渗透到叶子(表GydF4y2Ba1GydF4y2Ba）表明PN的降低可能是非气孔限制的结果。CE的减少（表GydF4y2Ba1GydF4y2Ba)表明核酮糖1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶活性可能受到抑制GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染，导致CO的抑制GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba同化。光合电子传递和羧化反应均受到抑制GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染。然而，目前尚不清楚对PET的影响是否是下游羧基化抑制的结果。GydF4y2Ba

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（ec4.1.1.31，PEPc）用HCO催化磷酸烯醇式丙酮酸的不可逆β-羧化GydF4y2Ba_3.GydF4y2Ba^−GydF4y2Ba作为产生氧乙酸和无机磷酸盐的反应中的基材[GydF4y2Ba40GydF4y2Ba］．有几篇论文表明，经盐处理后PEPc活性增加GydF4y2Ba高粱GydF4y2Ba（C4工厂），GydF4y2Ba普通大麦GydF4y2Ba（C3工厂）和GydF4y2BaAleuropus litoralisGydF4y2Ba（C3-C4中间装置）[GydF4y2Ba41GydF4y2Ba-GydF4y2Ba43GydF4y2Ba]. PEPc活性增强GydF4y2Ba马铃薯病毒Y.GydF4y2Ba或GydF4y2Ba马铃薯病毒A.GydF4y2Ba烟草叶中的感染[GydF4y2Ba44GydF4y2Ba那GydF4y2Ba45GydF4y2Ba]. 这种在生物和非生物胁迫下对PEPc活性的刺激将允许三羧酸循环的补充，以维持激活的内部氮代谢，尽管光合作用速率降低[GydF4y2Ba46GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

减少GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2BaRC/CSm是光抑制的常规指标[GydF4y2Ba47GydF4y2Ba]. 这个GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2BaRC/CSm值随时间的延长而显著降低GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染进展（图。GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba)，表明GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在光照条件下，感染可引起PSII的光抑制。GydF4y2Ba

当植物遇到胁迫时，光系统II被认为比PSI更脆弱，因为很少发现PSI比PSII更容易受到光抑制的物种[GydF4y2Ba48GydF4y2Ba那GydF4y2Ba49GydF4y2Ba]. Terashima等人首次报道了低温对黄瓜植株的光抑制作用[GydF4y2Ba50GydF4y2Ba]. 术后PSI活性下降GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染（图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)，表明PSI光抑制发生在GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在光照条件下接种。然而，我们观察到光合器官在生长过程中受到损伤GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在暗条件下接种，类似于光线诱导的光抑制引起的损坏。因此，这种损伤被称为“光抑制样损伤”，通过PSBO，D1和PSAA蛋白的降解进一步表明（图。GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba)．GydF4y2Ba

叶绿体是植物细胞中活性氧的主要来源。O的直接还原GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba通过与PSI相关的减少的供体发生在Mehler反应期间的过滤器[GydF4y2Ba51GydF4y2Ba]GydF4y2Ba．GydF4y2Ba光系统的损伤不可避免地会导致Mehler反应产生ROSGydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba接种（图。GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba). H有两个角色GydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba在植物中。在低浓度下，它作为信使分子参与与适应和各种应激防御机制触发相关的信号传递[GydF4y2Ba52GydF4y2Ba]. 在高浓度下，HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba促进细胞程序性死亡和氧化损伤[GydF4y2Ba53GydF4y2Ba］．此外,HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba可以抑制GydF4y2Ba从头GydF4y2BaD1蛋白质合成通过抑制伸长因子G [GydF4y2Ba54GydF4y2Ba那GydF4y2Ba55GydF4y2Ba］．若干报告表明ROS过度生产涉及各种压力期间的照片[GydF4y2Ba56GydF4y2Ba那GydF4y2Ba57GydF4y2Ba]. 然而，观察到的光系统损伤更大，HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba在黑暗中比在光明中小得多（图。GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba). 这些结果表明，ROS的过度积累并不是光抑制和光抑制样损伤的主要原因GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在烟叶。此外，PSI在暴露于应力时很可能受到ROS的攻击，但这种攻击只有在铁硫中心保持还原状态的情况下才会发生，而这需要可见光[GydF4y2Ba58GydF4y2Ba]. 然而，PSI在黑暗中受到的损害更大，进一步支持了上述观点。据此，Fan等人指出，黄花菜、柳树，GydF4y2Ba卓越japonicus.GydF4y2Ba在黑暗条件下，ROS的过度积累并不是玉米生长的主要原因[GydF4y2Ba59GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

在光抑制过程中，ROS对光合机构的负作用被抵消，H的丰度越高GydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba在光照条件下，Fenton反应可能导致羟自由基生成增加。在光照条件下，羟基自由基对病原菌有抑制作用[GydF4y2Ba60GydF4y2Ba]. 这可能是H的积极作用GydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba这有助于减轻光抑制和光抑制样损伤。GydF4y2Ba

光合作用期间的ATP和NADPH的生产在黑暗中减少了[GydF4y2Ba61GydF4y2Ba]. 用新合成的蛋白质替换受损的PSII蛋白（主要是D1蛋白）是一个ATP依赖的过程[GydF4y2Ba62GydF4y2Ba]. 此外，明亮的光刺激合成最快速合成的叶绿体蛋白PSII异二聚体的D1蛋白[GydF4y2Ba63GydF4y2Ba]. 因此，在黑暗条件下PSII的有限恢复可能是在黑暗中观察到的更大整体损伤的原因之一GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba接种。如果在光中部分修复的PSII使光系统的整体损伤最小化，那么为什么PSI在光中的损伤不如在黑暗中那么广泛还不清楚。PSI的修复是一个非常缓慢的过程，需要几天或更长的时间。因此，结果不能与PSI修复有关。需要进一步的研究来澄清这一点。GydF4y2Ba

我们评估了PSI和PSII的响应GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba光照和暗照条件下烟叶的侵染。光系统的反应中心、供体侧和受体侧均受到严重损伤，表明发生了光抑制和光抑制样损伤。我们还观察到PsbO、D1和PsaA蛋白的大量（净）降解和ROS的过度积累。而ROS的积累并不是光抑制和光抑制样损伤的主要原因GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在烟叶。psbo，d1和psaa蛋白似乎是目标GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba在光照和黑暗条件下感染。对光系统反应的进一步研究可能有助于确定GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba-烟草叶片的诱导损伤。这将有助于更好地理解植物-病原相互作用的机制，并有助于植物的育种GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba- 物种。GydF4y2Ba

植物材料和渗透GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba

烟草种子（GydF4y2Ba烟草GydF4y2Ba简历。感病品种龙江911由牡丹江烟草研究所孙建平博士提供，在蛭石上萌发。发芽45天后，将幼苗移栽到含有堆肥土壤基质的花盆中，在自然光照条件下在温室中生长。用6～8周龄植株上部两片完全展开的附着叶进行试验。GydF4y2Ba

丁香假单胞菌GydF4y2Ba光伏GydF4y2Ba. 烟粉虱GydF4y2Ba在金氏B琼脂平板上过夜培养[GydF4y2Ba64GydF4y2Ba)，用蒸馏水稀释至一定浓度GydF4y2Ba^6.GydF4y2Ba每毫升菌落形成单位。蒸馏水（模拟）或细菌悬浮液用无针注射器手工渗入叶肉。浸润面积约1cmGydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba并且测量在距渗透区域约0.5厘米的距离下进行。接种后，将叶子保持在14小时内（200μmolmGydF4y2Ba^-2GydF4y2BaS.GydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba)/10小时黑暗循环或在25°C下连续黑暗。GydF4y2Ba

不同处理后烟叶总叶绿素含量的测定GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染GydF4y2Ba

叶片总叶绿素用80%丙酮在4℃黑暗中提取72h。根据Porra（2002）的方法，使用紫外-可见分光光度计UV-1601（日本岛津）分析提取物[GydF4y2Ba65GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

烟叶中气体交换的测定GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染GydF4y2Ba

通过CIRAS-3便携式光合系统（PP系统，USA）测量PN，GS和CI，其控制800μmolM的光合光子通量密度GydF4y2Ba^-2GydF4y2BaS.GydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba，温度25°C和COGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba浓度为390μmolmolGydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba在叶室。CO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba每3分钟改变一次浓度，顺序为1600、1200、800、600、400、300、200、150、100和0μmolGydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba. 辐照度和COGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba通过系统的自动控制功能来控制浓度。根据PN-CI响应曲线的初始斜坡计算CE [GydF4y2Ba66GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

叶绿素的测量GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba烟株采后叶片的荧光瞬态（OJIP）和PSI活性GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染GydF4y2Ba

快速荧光诱导动力学及820nm调制反射信号GydF4y2Ba_{820纳米GydF4y2Ba})如前所述，使用多功能植物效率分析仪M-PEA（Hansatech Instrument Ltd.，UK）同时记录[GydF4y2Ba67GydF4y2Ba]. 所有的叶子在测量前都是暗适应的。叶绿素GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba用JIP试验分析荧光瞬态：GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba= 1−(GydF4y2BaFGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba/GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba）;GydF4y2BaV.GydF4y2Ba_jGydF4y2Ba = (FGydF4y2Ba_{2女士GydF4y2Ba} − FGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba） / （FGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba − FGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba）;GydF4y2BaW.GydF4y2Ba_K.GydF4y2Ba = （GydF4y2BaFGydF4y2Ba_{0.3毫秒GydF4y2Ba}−GydF4y2BaFGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba) / (GydF4y2BaFGydF4y2Ba_{2女士GydF4y2Ba}−GydF4y2BaFGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba）;RC / CSm =φGydF4y2Ba_{阿宝GydF4y2Ba} · (GydF4y2BaV.GydF4y2Ba_jGydF4y2Ba/GydF4y2BamGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba•(ABS / CSm)， MGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba= 4 (GydF4y2BaFGydF4y2Ba_{0.3毫秒GydF4y2Ba}−GydF4y2BaFGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba) / (GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba−GydF4y2BaFGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba）;φ.GydF4y2Ba_{阿宝GydF4y2Ba} = GydF4y2BaFGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba．先生GydF4y2Ba_{820纳米GydF4y2Ba}在820nm处测得的信号提供了PSI氧化状态的信息，包括质体蓝素和P700。磁共振诱导曲线GydF4y2Ba_{820纳米GydF4y2Ba}红光饱和处理后的叶片，有一个快速氧化阶段和一个随后的还原阶段。MR氧化相的初始斜率GydF4y2Ba_{820纳米GydF4y2Ba}在饱和红光的开始处，表示P700被氧化的能力，用于反映PSI的活性[GydF4y2Ba68GydF4y2Ba那GydF4y2Ba69GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

H的检测GydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba烟株生长后叶片中的代谢物GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染GydF4y2Ba

HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba根据Patterson的方法提取和确定[GydF4y2Ba70GydF4y2Ba]. 叶段（0.5g）在液氮中研磨，用5ml 5%（w/v）三氯乙酸提取，然后在16000℃下离心 × GydF4y2BaGGydF4y2Ba10分钟。上清液用于HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba化验。GydF4y2Ba

烟叶中psbo、D1和PsaA蛋白的检测GydF4y2Ba太平洋标准时间GydF4y2Ba感染GydF4y2Ba

用等量的叶绿素进行westernblot检测类囊体膜蛋白。在冰冷隔离缓冲液[100 mM蔗糖，50 mM Hepes（pH 7.8），20 mM NaCl，2 mM EDTA和2 mM MgCl]中使叶片均质GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba]，然后过滤通过三层编织物。将滤液以3000×离心 GGydF4y2Ba用分离缓冲液洗涤沉淀物，再离心，最后悬浮在分离缓冲液中。用12%聚丙烯酰胺梯度凝胶对类囊体膜蛋白进行变性和分离。然后将凝胶中的变性蛋白质电印迹到PVDF膜上，用Fan等人提供的抗体进行探测[GydF4y2Ba59GydF4y2Ba]然后用化学发光法观察。用凝胶Pro分析仪4.0软件进行蛋白质定量图像分析。GydF4y2Ba

研究中使用的化学物质GydF4y2Ba

本研究中使用的所有化合物均由Sigma公司生产。GydF4y2Ba

统计分析GydF4y2Ba

给出的结果是至少三次独立测量的平均值。均值比较采用方差分析和5%显著性水平的LSD极差检验。GydF4y2Ba

所有支持数据都作为附加文件包含。GydF4y2Ba

总工程师：GydF4y2Ba

羧化效率GydF4y2Ba

CI：GydF4y2Ba

细胞间有限公司GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba浓度GydF4y2Ba

Dpi:GydF4y2Ba

感染后的天GydF4y2Ba

FGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

FGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba，初始和最大荧光GydF4y2Ba

FGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba/F级GydF4y2Ba_mGydF4y2Ba：GydF4y2Ba

PSII的最大量子产率GydF4y2Ba

FGydF4y2Ba_V.GydF4y2Ba'GydF4y2Ba/F级GydF4y2Ba_mGydF4y2Ba'：GydF4y2Ba

开放PSII陷阱的量子产率GydF4y2Ba

GS：GydF4y2Ba

气孔导度GydF4y2Ba

记者：GydF4y2Ba

K，叶绿素的中间步骤GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba荧光之间升高GydF4y2BaFGydF4y2Ba_O.GydF4y2Ba和GydF4y2BaFGydF4y2Ba_mGydF4y2Ba

先生GydF4y2Ba_{820纳米GydF4y2Ba}：GydF4y2Ba

820nm调制反射信号GydF4y2Ba

MSR705：GydF4y2Ba

修正红边比GydF4y2Ba

NPQ：GydF4y2Ba

非细胞化学淬火GydF4y2Ba

组织工程：GydF4y2Ba

析氧复合体GydF4y2Ba

Pepc：GydF4y2Ba

磷丙酮酸羧化酶GydF4y2Ba

宠物：GydF4y2Ba

光合作用电子传递GydF4y2Ba

Pn:GydF4y2Ba

净光合速率GydF4y2Ba

产后大出血GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

假单胞菌GydF4y2Ba光伏GydF4y2Ba．phopololicola.GydF4y2Ba

磅/平方英寸：GydF4y2Ba

照相我GydF4y2Ba

PSII:GydF4y2Ba

光系统IIGydF4y2Ba

太平洋标准时间GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

丁香假单胞菌GydF4y2Bapv。GydF4y2Ba烟粉虱GydF4y2Ba

美国专利商标局GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

丁香假单胞菌GydF4y2Bapv。tomatao DC300GydF4y2Ba

问：GydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}：GydF4y2Ba

PSII的主要醌电子受体GydF4y2Ba

问：GydF4y2Ba_B.GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

PSII的次级醌电子受体GydF4y2Ba

RC / CSM：GydF4y2Ba

密度GydF4y2Ba问：GydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}^−GydF4y2Ba还原PSII反应中心GydF4y2Ba

活性氧：GydF4y2Ba

活性氧物种GydF4y2Ba

V.GydF4y2Ba_jGydF4y2Ba：GydF4y2Ba

J步骤的相对变量荧光GydF4y2Ba

V.GydF4y2Ba_T.GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

随时的相对变量荧光GydF4y2Ba

W.GydF4y2Ba_K.GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

K阶归一化相对变量荧光GydF4y2Ba

φ.GydF4y2Ba_{PSII公司GydF4y2Ba}：GydF4y2Ba

PSII的实际光化学效率GydF4y2Ba

这项工作得到了中央大学基础研究基金（中国科学院自然科学基金第31070307号）2572014AA18和黑龙江省哈尔滨市科技创新人才优秀学术领袖的支持（2013RFXXJ063）。GydF4y2Ba

作者笔记GydF4y2Ba

从属关系GydF4y2Ba

1. 东北林业大学生命科学学院，哈尔滨，150040GydF4y2Ba

   程丹丹，孙兴斌，赵敏，孙光宇，周华顺GydF4y2Ba

2. 山东农业大学园艺科学与工程学院生命科学作物生物学国家重点实验室，泰安，271018GydF4y2Ba

   张子善GydF4y2Ba

3. 澳大利亚澳大利亚国立大学医学院生物与环境学院植物科学研究室，Acton，第2601幕，美国GydF4y2Ba

   曹华顺GydF4y2Ba

相应的作者GydF4y2Ba

通信GydF4y2Ba孙广宇GydF4y2Ba或GydF4y2Ba曹华顺GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

相互竞争的利益GydF4y2Ba

作者声明他们没有相互竞争的利益。GydF4y2Ba

作者的贡献GydF4y2Ba

DDC、ZSZ、GYS和XBS设计了本研究。DDC和ZSZ进行了大部分实验和数据分析。DDC、WSC和MZ构思了这项研究，并帮助起草和修改了手稿。所有作者都阅读并批准了最后的手稿。GydF4y2Ba

开放存取GydF4y2Ba本文根据创意公约署署署的条款分发了4.0国际许可证（GydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/GydF4y2Ba)，允许在任何介质中不受限制地使用、分发和复制，前提是您给予原始作者和来源适当的信任，提供到知识共享许可证的链接，并说明是否进行了更改。知识共享公共领域放弃(GydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/GydF4y2Ba)适用于本条提供的数据，除非另有说明。GydF4y2Ba

重印和权限GydF4y2Ba