增强GydF4y2Ba尼古利亚娜·宾夕法尼亚州GydF4y2Ba异源植物基因引起的免疫应答GydF4y2BaPinellia Ternata.GydF4y2Ba

背景GydF4y2Ba

Pinellia Ternata.GydF4y2Ba是一种中草药，用于治疗失眠、子痫和宫颈癌等疾病已有数百年的历史。多细胞生物的非自我识别可以启动固有免疫以避免病原体的入侵。采用无病原菌、杂种优势、鲜抗性设计GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交提出。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

通过图书馆功能筛选，我们发现了GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba基因,命名为GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba，有可能识别触发过敏反应的潜力GydF4y2Ba尼古利亚娜·宾夕法尼亚州GydF4y2Ba．显著诱导ROS和胼胝质沉积GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba叶子随着病因相关基因的激活。GydF4y2BaPR-1AGydF4y2Ba那GydF4y2BaPR-5GydF4y2Ba那GydF4y2BaPDF1.2GydF4y2Ba那GydF4y2BaNPR1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba朋友GydF4y2Ba那GydF4y2BaRBOHBGydF4y2Ba和GydF4y2BaERF1GydF4y2Ba观察抗氧化酶活性。后转型为GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba，致病相关基因表达显著上调，产生高水平的抗性GydF4y2Ba疫霉capsiciGydF4y2Ba不影响转化后种子的正常萌发和形态特征GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．UPLC-QTOF-MS分析GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba改变了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba揭示了催产素，Cuelure，Allantoin，二乙基雌激素和1,2-苯并噻唑-3（2H）的诱导为生物活性化合物。在这里，我们也证明了GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂种，通过杂交产生的GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba转换和非转换GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba，显示出显着的高水平GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba- 基因表达和病原体抵抗力。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

异源植物基因可以激活其他植物的抗病能力，进而产生FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交后，可以获得不受病原菌影响的新鲜植物免疫。本文还得出结论GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba在SA和JA/ET防御通路中发挥作用，激活对入侵病原体的抗性。GydF4y2Ba

在多细胞生物中，非自我识别是启动先天免疫的重要现象之一。它有助于防止病原体的入侵，并维持生物体的基因多态性[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba］．各种生物必须认识到外源DNA，RNA或入侵病原体的蛋白质的能力。非自识别是寄生虫的入侵的早期阶段的情况下，并播放克服感染病原体的重要作用，它发生的所有生物体细胞对细胞相互作用的基本特征中[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba那GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba］．在植物中，诱导抗病是由病原菌侵染引起的，这依赖于植物的非自我识别。由于非自我识别，在感染部位周围产生植物抗毒素和其他细胞壁强化物质，以抑制病原体的渗透[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

认为寄主和病原体之间的相互作用是它们共同进化的主要驱动因素。病原体在多种宿主存在时比单一宿主存在时毒性更强，反之亦然。病原体的攻击方式是决定宿主防御机制的关键因素[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba］．植物中防御反应的激活包括称为过敏反应（HR）的植物细胞的猝死[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba]，爆发活性氧(ROS) [GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba]，激活无国防相关的基因[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba]和生产抗菌化合物，例如植物抗毒素[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba］．在植物的非接种部分，除产生局部抗性外，植物还具有系统抗性。这种抗性通常分为两类:全身获得性抗性(SAR)和诱导性全身抗性(ISR) [GydF4y2Ba10GydF4y2Ba］．水杨酸（SA）和病程相关（PR）基因诱导的积累也都参与设立特别行政区。此外，SAR是持久和有潜力抑制病原体如真菌，细菌，线虫和病毒[广谱GydF4y2Ba11GydF4y2Ba］．另一方面，ISR依赖于植物生长促进细菌和茉莉酸（JA）和乙烯（ET）信号传导的植物根系殖民[GydF4y2Ba12GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

对于耐作物的发展，与宿主 - 病原体相互作用的基本机制的理解是必要的。它分为两种类型，不相容和兼容的相互作用导致分别加速性和易感性某些疾病。植物育种者使用不兼容互动作为抗病品种在可持续农业系统发展的一个基本工具。不兼容互动的激活主要是依赖于两层植物免疫系统的存在，以保护它们免受多种病原体。第一层，病原体相关分子模式（PAMP）触发免疫，则在识别病原体通过PRR（模式识别受体）活化，而所述第二层，效应触发免疫（ETI），是由病原体效应（活化AVR）由宿主植物的R基因[认可GydF4y2Ba13GydF4y2Ba］．作为该R基因识别特定无毒基因，然后引发的免疫反应，所以它也被称为R-基因介导的免疫[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba那GydF4y2Ba15GydF4y2Ba］．因为寄主的r基因是对相应病原体的基本选择力GydF4y2BaAVR.GydF4y2Ba导致修饰的基因GydF4y2BaAVR.GydF4y2Ba基因克服了宿主旧r基因的影响。该宿主病原体进化可以解释一种品种如何在现场中失去其阻力[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba那GydF4y2Ba17GydF4y2Ba］．考虑到这一点，制定一些新的和独特的策略来引入对潜在病原体的长期广谱耐药性是时间的基本需要。GydF4y2Ba

杂种优势，又称杂种优势，是描述杂种优势的一种现象GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂合的杂种比他们的纯合父母的杂交。它可以解释植物生物质，产量，生育，发展潜力和抗病性增加[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba］．为了更好地了解杂种优势，已经提出了三个不同的遗传假设，优势，跨国和超越，[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba那GydF4y2Ba19GydF4y2Ba］．杂种优势被广泛用于提高植物的产量和生产力[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba21.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

在我们的研究中，我们提出病原体触发的植物免疫是一种非自我识别的特殊形式和结果。我们还提出，病原体感染是非自我识别的形成和进化的驱动力。在物种形成的进化过程中，如果没有病原体，可能就没有非自我识别，甚至有些物种的边界可能会变得模糊。非自识别可能用于培养非病原性植物抗性。基于这些假设，我们设计了这项研究，并确定了来自GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba，可以启动局部和系统的防御反应GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba通过非自我识别的机制。为了进一步表征，将这些基因克隆并转移到GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba，发现它们可以增加烟草的基础抗性。GydF4y2Ba

植物材料和病原菌培养GydF4y2Ba

P. Ternata.GydF4y2Ba采自中国湖北省武汉市武汉市植物园，在20-26°C和14 h/10 h光照/黑暗条件下的控制生长室中生长。GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba和GydF4y2BaLycopersicon esculentumGydF4y2Ba种子在营养土壤上发芽，在24-28°C、16 h/8 h明暗间隔的控制生长条件下单独移栽。GydF4y2Bagossypium hirsutumGydF4y2Ba在24-28°C, 16 h/8 h光照和黑暗间隔的控制条件下，在营养土壤上生长。GydF4y2BaPectobacterium胡萝卜GydF4y2Ba在28℃黑暗条件下，置于LB培养基(10 g色氨酸、5 g酵母提取物、10 g NaCl /升蒸馏水)中。GydF4y2Ba疫霉capsiciGydF4y2Ba（LT263）GydF4y2Ba那GydF4y2Ba产自华中农业大学作物病害监测与安全控制湖北省重点实验室，武汉430070,V8 (V8果汁100 ml, CaCO 1 g)GydF4y2Ba_3.GydF4y2Ba每升蒸馏水）在25℃下介质在黑暗条件下。GydF4y2Ba

的建设GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba互补脱氧核糖核酸库GydF4y2Ba

P. Ternata.GydF4y2Ba与接种GydF4y2Bap .胡萝卜GydF4y2Ba用于建造cDNA文库。块茎GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba被清洗和浸透了GydF4y2Bap .胡萝卜GydF4y2Ba液体，在使用前在28℃下孵育24小时，10分钟。以不同的时间间隔（24,36和48小时）收集叶样品，在液氮中冷冻并储存在-80℃。GydF4y2Ba

用Trizol试剂提取总RNA。然后用PolyATtract®mRNA isolation systems (Promega)从总RNA中纯化mRNA。利用PrimeScript™双链cDNA合成试剂盒(TaKaRa)和Oligo dT引物(包含GydF4y2BaXBA.GydF4y2Ba我裂解网站）。三双适配器包含GydF4y2Ba囊GydF4y2Ba我将裂解位点添加到cDNA文库中。然后将图书馆消化了GydF4y2BaXBA.GydF4y2Ba我和GydF4y2Ba囊GydF4y2Ba我同时酶。用AxyPrep PCR cleanup kit (AxyGEN)去除短片段。随后，将产物连接到pTRV2Ex载体[GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba]（GydF4y2BaXBA.GydF4y2Ba我和GydF4y2Ba囊GydF4y2BaI酶用于预先消化载体）。随后将连接产物转化为反式DH5αGydF4y2Ba大肠杆菌GydF4y2Ba细胞。质粒的GydF4y2Ba大肠杆菌GydF4y2Ba用EasyPure®Plasmid MiniPrep Kit (TransGen)提取细胞，转化成GydF4y2BaA. Tumefaciens.GydF4y2Ba应变EHA105。单个菌落用牙签采摘，在28°C下孵育过夜。利用引物GF (5 ' -TACAGGTTACTGAATCACTTGCGCTA-3 ')和GR (5 ' -CCGTAGTTTAATGTCTTCGGGACA-3 ')进行菌落PCR，确认文库质量，然后在−80℃保存。GydF4y2Ba

cDNA文库的功能筛选和序列分析GydF4y2Ba

用于cDNA文库的功能筛选GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba，含有pTRV的农杆菌GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba，PTRV.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba空向量pTRVGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba例::目的基因分别在28°C含卡那霉素(50 mg/L)和利福平(50 mg/L)的LB中过夜。农杆菌细胞4000 rpm离心10 min，再悬浮于MMA溶液(10 mmol/L MgCl)中GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba，10 mmol / l mes，20 g / l蔗糖，100 mmol / l acetosyringone，pH = 5.6），调整到最终ODGydF4y2Ba_600GydF4y2Ba = 0.8–1.0 and left at room temperature for 3 h without shaking. The pTRV1 solution and target gene solution were mixed 1:1, and pressure-infiltrated into the leaf ofN. Benthamiana.GydF4y2Ba植物使用1ml没有针的注射器。GydF4y2BaAVR.GydF4y2Ba4-GydF4y2BaCF.GydF4y2Ba4用作阳性对照，而MMA缓冲液和空载体用作阴性对照。每天观察并记录注入叶片的症状变异。GydF4y2Ba

武汉Augct对植物中反复显示人力资源症状的菌落（GydF4y2Bahttp://wh.augct.com/GydF4y2Ba）使用GR底漆。NCBI（国家生物技术信息中心）进行爆炸搜查以确定菌落的同源物。GydF4y2Ba

ROS积累和胼胝质沉积的染色GydF4y2Ba

4-5-weeks老GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba植物用于研究ROS积累并致致沉积。烟草植物的叶子被渗透GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因和空载体作为对照。在症状开发开始时，收集叶子以检测ROS和胼unse。使用DAB套件（CWBIO）进行ROS染色。简而言之，将叶样品与DAB溶液混合物（1mL试剂A和50μL试剂B）一起温育1小时，然后在95％乙醇中煮沸30分钟以除去叶绿素。在尼康Eclipse 55i光学显微镜下观察ROS积累。将该实验重复三次重复。GydF4y2Ba

根据[中描述的方法进行愈合染色GydF4y2Ba24.GydF4y2Ba］．In brief, tobacco leaves were treated with Buffer I (90 mmol/L Na_2GydF4y2BaHPO.GydF4y2Ba_4.GydF4y2Ba，5mmol / L柠檬酸和1％戊二醛，pH7.4）过夜。之后叶子用DDH洗涤GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba用O和95%乙醇浸泡叶片，然后放入沸水中清除叶绿素。透明叶片依次用Buffer II(50%乙醇，67 mmol/L Na)洗涤GydF4y2Ba_2GydF4y2BaHPO.GydF4y2Ba_4.GydF4y2Ba，pH 12.0），然后在室温下在黑暗中进行染色，染色缓冲液（0.1％苯胺蓝，67mmol / L NaGydF4y2Ba_2GydF4y2BaHPO.GydF4y2Ba_4.GydF4y2Ba那P.H 12.0). Callose deposits were observed under Nikon eclipse 80i ultraviolet epifluorescence.

抗氧化活性分析GydF4y2Ba

对4 ~ 5周龄烟草植株的叶片进行渗透处理GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因和空载体作为对照。在渗透后以不同的时间间隔（0,24,48,72,96,120,120,144和168小时）收集样品，在液氮中冷冻并储存在-80℃。根据[中的方法，测量多酚氧化酶（PPO），过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）。GydF4y2Ba25.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba26.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba),分别。GydF4y2Ba

致病相关基因的相对表达分析GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因GydF4y2Ba

为了分析的诱导发病相关基因的相对表达GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba，叶GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba渗透了GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因和空载体作为对照。以不同的时间间隔（0,24,48,72,96和120h）收集样品，在液氮中冷冻并保存在-80℃以进一步使用。用三唑试剂萃取总RNA。通过使用HiFiscript快速GDNA去除CDNA试剂盒（CWBIO）合成cDNA，并调节浓度等于。进行实时定量PCR（RT-QPCR）以研究通过使用Sybr®Mifix除TaqTMII（Tlirnaseh Plus）（Takara Clontech）来研究几种致病相关基因的相对表达。特定的引物（附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：表S1）从[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba］．GydF4y2BaEF-1α.GydF4y2Ba用作参考基因。通过使用CFX96™实时PCR检测系统（BIO-RAD）处理PCR混合物：95℃，30s，30°C为95℃，5℃和60℃。熔化曲线从65℃至95℃建立。三种重复用于从每种治疗中扩增，也用于控制。2GydF4y2Ba^{——∆∆CTGydF4y2Ba}方法(GydF4y2Ba28.GydF4y2Ba用于量化与防御相关基因的相对表达。GydF4y2Ba

PCAMBIA3301表达载体的构建GydF4y2Ba

ptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba克隆到pCAMBIA3301二元表达载体[GydF4y2Ba29.GydF4y2Ba] 之间GydF4y2BaBglGydF4y2Ba二世,GydF4y2BaBSTE.GydF4y2BaII酶切位点。TF引物，其中含有GydF4y2BaBglGydF4y2BaII酶位点(5 ' - actggaagatcttacaggttactgaatcacttgcgcta -3 ')和TR引物(5 ' - atagatggtnaccccgtagtttaatgtcttcggac -3 ')GydF4y2BaBSTE.GydF4y2Ba用II酶位点进行扩增GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因在pTRV2 Ex载体中。随后对扩增的基因进行双酶切。将产物连接到pCAMBIA3301载体的相应位点GydF4y2Ba格斯GydF4y2Ba- 南部地区。正确的插入GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因序列分析证实。最后，将结构引入GydF4y2BaA. Tumefaciens.GydF4y2BaEHA105压力。GydF4y2Ba

转基因植物表达GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因GydF4y2Ba

转基因GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba植物表达GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba通过使用获得基因GydF4y2Ba农杆菌属GydF4y2Ba-介导的叶盘变换方法[GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba］．转基因TGydF4y2Ba_1GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba种子在含3 mg/L的MS培养基上筛选，通过PCR和序列分析进行验证。GydF4y2Ba

受控授粉开发fGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba混合动力GydF4y2Ba

女性花在第11阶段被阉割[GydF4y2Ba31.GydF4y2Ba为避免自花授粉，采用雄花开花期采集花粉进行人工授粉。人工授粉后，将花贴有相应的标签，并在一端包上5厘米的汽水吸管。授粉约60小时后，花冠随汽水吸管一同掉落。授粉20-25天后，采集种子并晒干[GydF4y2Ba32.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

工程防御反应保护烟草植物抵御真菌病原体GydF4y2Ba

叶子从3到4周脱离了GydF4y2Ba_3.GydF4y2Ba代的转变GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba和FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交植物，并放置在有盖培养皿中，培养皿内衬有无菌水湿润的组织。从未转化的分离叶子GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba用作控制。叶子被接种GydF4y2Bap . capsiciGydF4y2Ba通过使用[GydF4y2Ba33.GydF4y2Ba］．接种48 h后测量病灶直径，按公式[(对照病灶直径-处理病灶直径)/(对照病灶直径-病原盘直径)]× 100计算抑制率。GydF4y2Ba

罚款测试GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba

观察效果GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba种子萌发和形态特征的基因，每种种子30种，无转化和转化GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba在培养的滤纸内衬的培养板上生长。10天后，通过使用公式计算萌发百分比:(没有种子播种的种子/总种子播种）×100.在15天后测量形态特征，并计算平均值。GydF4y2Ba

UPLC-QTOF-MS分析转化GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba

对于不同代谢物的分析，根据[中的方法制备样品GydF4y2Ba34.GydF4y2Ba］．LC-MS分析采用Waters超高效液相色谱系统，方法参考文献[GydF4y2Ba35.GydF4y2Ba］．非转换GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba作为对照。内标:Ribitol (50 μg/mL)， Sigma Aldrich, USA (Cat#A9790)。利用MZmine2软件对原始数据进行处理。GydF4y2Ba

筛选GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba诱导过敏反应的基因GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba

互补DNA反向从总RNA转录GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba连接到pTRV二元表达载体，转化为GydF4y2BaA. Tumefaciens.GydF4y2BaEHA105压力。共筛选出1268个cDNA菌落，在−80°C下培养保存。为了检验文库的质量，随机选取100个cDNA菌落进行菌落PCR，发现95%的重组菌落插入范围在100 ~ 1000 bp之间，且很少重复(附文件)GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：图S1）。每个人GydF4y2Ba答:tumefeciensGydF4y2Ba菌落，菌落1268总共，渗入到GydF4y2Ba本草属，番茄属GydF4y2Ba和GydF4y2Bagossypium hirsutumGydF4y2Ba叶子与1毫升无针注射器。与空载体和缓冲液作为阴性对照相比，浸润后48小时，浸润部位周围观察到典型的HR症状(图)。GydF4y2Ba1GydF4y2BaA-H，附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba:图S2a-h)。共49个cDNA菌落可反复诱发典型的HR症状，占3.86% (49/1268)GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba基因可能导致非自我识别GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

经过改造GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因导入pCAMBIA3301载体，通过农杆菌介导的瞬时表达来确定典型的HR症状GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba和GydF4y2BaL. Esculentum.GydF4y2Ba叶子。可以清楚地观察到，这些基因诱导了HR症状GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba和GydF4y2BaL. Esculentum.GydF4y2Ba（附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba:图S2i-o)。GydF4y2BaP. Ternate.GydF4y2Ba叶子也被注射了GydF4y2Ba（GydF4y2Ba附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba(图s2 -q)用这些基因验证非自我识别，发现这些基因不能激活亲本源的防御机制。在最初的筛选过程中，GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba显示出非常有希望和一致的结果，与我们的目标相关，所以我们选择这两个基因进行进一步的实验。GydF4y2Ba

同源性分析GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba基因GydF4y2Ba

49个不同的菌落，反复诱发HR症状GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba选择叶片，进行测序。NCBI序列分析显示，25条序列与已知蛋白具有同源性，同源性在70 ~ 96%之间GydF4y2Ba（GydF4y2Ba附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：表S2），5个序列与转录因子共享同源性GydF4y2Ba（GydF4y2Ba附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：表S3），剩余19分享与被认为是新颖的已知蛋白质没有同源性GydF4y2Ba（GydF4y2Ba附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：表S4）。这些新发现的基因被命名为GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba（GydF4y2BaPinella ternataGydF4y2Ba高度敏感响应)基因。GydF4y2Ba

佩GydF4y2Ba基因诱导ROS积累和胼胝质沉积GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba树叶GydF4y2Ba

ROS的爆发和胼胝质沉积都是植物防御入侵病原体和抵抗其渗透的早期事件。ROS积累和胼胝质沉积，这两个实验都是用pTRV和pCAMBIA3301构建的。以pTRV和pCAMBIA3301空载体作为对照。与空向量相比，经过处理的叶片显微图像可以清晰地观察到它GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因诱导ROS积累(图。GydF4y2Ba1GydF4y2BaI-L）并胼shiposition inGydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba叶子(图。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba大学出版社)。GydF4y2Ba

佩GydF4y2Ba基因增强了抗氧化活动GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba

抗氧化剂是可以保护植物免受各种病原体的元素，具有抗性水平的植物通常具有一定量的这些元素。在渗透后从0到168小时测量SOD，POD和PPOGydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因。在豆荚的情况下，观察到其在治疗后24小时刺激的活性，达到96小时GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba，120 h forGydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba，然后逐渐下降(图。GydF4y2Ba2GydF4y2Baa).而在PPO的情况下，在48 h时观察到最大活性GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba72小时后GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba，然后开始逐渐下降(图。GydF4y2Ba2GydF4y2Bab）。Similar case was observed with SOD where maximum activity was observed at 120 h forptHR941GydF4y2Ba在144小时GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba（图。GydF4y2Ba2GydF4y2Bac），而控制比治疗较小。GydF4y2Ba

佩GydF4y2Ba基因活化了与病因相关基因的表达GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba

为进一步研究其作用机理GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因诱导的植物抗性，我们分析了来自SA和JA / ET途径的病因相关基因的相对表达水平GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba渗透与GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba与空向量相比GydF4y2Ba（GydF4y2Ba无花果。GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba额外的文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba：图S3）。从结果来看，有人认为，GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因通过上调表达水平在增强植物防御中起着重要作用GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba-Genes。如果是GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba植物与渗透GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba，它被观察到GydF4y2BaPR-1AGydF4y2Ba和GydF4y2BaPR-5GydF4y2Ba分别在渗透后48 h和72 h表达量最高(图2)。GydF4y2Ba3.GydF4y2BaA-B），然后开始下降。虽然在渗透后24小时，GydF4y2BaPdf1.2, npr1, pal, rbohbGydF4y2Ba和GydF4y2BaERF1GydF4y2Ba表现出最大的上调GydF4y2Ba（GydF4y2Ba无花果。GydF4y2Ba3.GydF4y2BaC，D，E，F和G）。从目前的结果，我们推测了这一点GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba941年和GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba375在SA和JA/ET途径中起作用，参与抗性机制。GydF4y2Ba

表达转基因烟草植物的产生GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba

采用农杆菌介导的叶盘转化方法，阳性转基因GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba获得的植物（图GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba）.与非转基因植株相比，转基因植株的叶片出现了典型的表型变异(图。GydF4y2Ba4B-C.GydF4y2Ba）.从这些变异中，我们假设目标基因整合为阳性，但为了进一步确认，在提取基因组DNA后，利用基因特异性引物进行PCR，发现变异植株均为阳性且含有GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因。从阳性植株中收集种子，在MS培养基上筛选抗Bialaphos抗菌素，为后代的发育做准备。GydF4y2Ba

N. Benthamiana.GydF4y2Ba表达GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因增加了致病相关基因的转录组水平GydF4y2Ba

研究抵抗水平，转录组水平GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba对12个独立转化的-基因进行了定量分析GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba相对于未转换的行GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．为了确定抗性水平，它是否遗传给下一代，GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba-GENE表达水平测量到TGydF4y2Ba_3.GydF4y2Ba一代(图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba）.从结果中观察到，在此情况下GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba改变了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba-基因相对于其未转化的基因表现出显著的上调GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba控制(无花果。GydF4y2Ba5.GydF4y2Baa和c).的重要表达GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba转化中也观察到基因GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba（附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba:图S4)。FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交后代经TGydF4y2Ba_3.GydF4y2Ba一代又一代的转变GydF4y2BaN. BenthaminaGydF4y2Ba与非转换GydF4y2Ban . benthaminaGydF4y2Ba接着GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba-基因表达量测定。这是从所有人都考虑的结果中观察到的GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba在F.GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba相对于转化(T3)表现出显著的上调GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba控制(无花果。GydF4y2Ba5.GydF4y2BaB和D），而表达水平GydF4y2Ba佩GydF4y2BaF.中的基因GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba与转化(TGydF4y2Ba_3.GydF4y2Ba）GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba（图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Bae).从这些结果来看，考虑到杂种优势现象，FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交种通过增强抗病性，获得了相当水平的病原菌独立抗性GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba- 基因转录水平。GydF4y2Ba

工程防御反应保护烟草植物抵御真菌病原体GydF4y2Ba

转化获得的抵抗力GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba为了应对GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba针对真菌病原体测量，GydF4y2Bap . capsiciGydF4y2Ba，在12条独立的线条。从结果中，发现GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba在抑制感染方面发挥了重要的作用GydF4y2Bap . capsiciGydF4y2Ba（图。GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba）.结果显示转化的叶子GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba和FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交种显著地限制了水稻的生长GydF4y2Bap . capsiciGydF4y2Ba与非转化相比GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

N. Benthamiana.GydF4y2Ba表达GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba表现出正常的形态学GydF4y2Ba

测量种子萌发和形态特征，观察罚球GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba在改变了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．结果表明，未转化与转化之间无显著差异GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba无花果。GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba）GydF4y2Ba．从这些结果中，我们可以得出结论：GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因在不影响植株正常萌发和形态特征的情况下提高了植株的抗性水平。没有重大处罚是由GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因改造GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

诱导的生物活性化合物GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba改变了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba

对于诱导代谢物的分析，GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba改变了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba被考虑并与未转化的相比GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．UPLC-QTOF-MS检测结果显示，该植物中检测到一些特异性的生物活性化合物GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba改变了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba(表GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba:图S5和表S5)。在这些检测到的化合物中，Cuelure的含量始终处于较高水平，可以作为其生物标志物GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba因为它很容易被发现。GydF4y2Ba

在植物抗性育种中，瓶颈是植物抗性基因的缺失和易于克服。在这项研究中，我们试图研究两种不同植物物种之间的非自我识别机制，GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba和GydF4y2Ban . benthamianaGydF4y2Ba提出了解决植物抗病育种瓶颈的策略。为此，我们从GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba，可反复诱发非自我识别反应，提高机体的基础抵抗水平GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

P. Ternata.GydF4y2Ba是中国著名的传统草药之一，用于治疗多种疾病。对其提取物的提取和化合物的鉴定进行了广泛的研究[GydF4y2Ba36.GydF4y2Ba］．到目前为止，没有任何研究可用于其潜在用途，用于抑制植物病变。因此，为此目的，CDNA图书馆建成了[GydF4y2Ba37.GydF4y2Ba]并通过使用瞬态表达系统筛选。发现特定基因来自GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba，可以改变响应GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba植物侵犯病原体。GydF4y2Ba

活性氧物种参与植物防御机制，并在植物发育过程中发挥作用。氧化爆发是植物防御的早期事件，在那里产生局部ROS以抑制病原体的扩散。ROS突发与病原体/微生物相关的分子图案（PAMPS / MAMPS）有关，并导致HR [GydF4y2Ba38.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba39.GydF4y2Ba］．植物细胞壁是病原菌进入植物体内的第一道屏障，并通过与侵入的病原菌相互作用部位形成乳头来修饰细胞壁。乳突的形成是植物在细胞水平上最早的防御反应，化学分析表明胼胝质是该结构的主要成分[GydF4y2Ba40GydF4y2Ba那GydF4y2Ba41.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba42.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba43.GydF4y2Ba］．在我们的研究中发现GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因可以激活ROS突发和胼胝质沉积如在防御反应的早期事件GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．这种植物防御系统早期活动的激活表明GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba具有抑制潜在病原体渗透的潜力，有助于保持植物在不利环境下的活力。GydF4y2Ba

抗氧化剂是可以改变植物内部环境以消除入侵病原体的蛋白质化合物。选择一些这些抗氧化剂/酶以响应于GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba基因。POD通过使病原体进入植物组织变得困难，从而阻止病原体进入植物组织，因为它参与了由单木质素聚合形成木质素的过程[GydF4y2Ba44.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba45.GydF4y2Ba］．醌类化合物是多种微生物的有毒化合物。多酚氧化酶在酚类化合物氧化成醌中起着重要作用，并在一定程度上促进了对病原菌的抗性[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba］．SOD是一种在植物防御机制中起关键作用的重要酶。它负责保护植物免受氧化损伤的ROS爆发[GydF4y2Ba46.GydF4y2Ba］．在本研究中，已经发现GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba这些抗氧化剂的含量在被GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因。GydF4y2Ba

许多研究表明，许多入侵病原体可以引发与发病性相关蛋白的表达相关的生物化学途径，例如SA途径标记基因GydF4y2BaPR-1AGydF4y2Ba和GydF4y2BaPR-5GydF4y2Ba[GydF4y2Ba47.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba48.GydF4y2Ba]GydF4y2Ba那GydF4y2BaJA/ET通路标记基因GydF4y2BaPDF1.2GydF4y2Ba[GydF4y2Ba49.GydF4y2Ba]和途径标记基因GydF4y2BaERF1GydF4y2Ba[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba］．在植物中，诱导GydF4y2BaPR-1GydF4y2Ba那GydF4y2BaPR-2GydF4y2Ba那GydF4y2BaPR-5GydF4y2Ba和GydF4y2BaPR-8.GydF4y2Ba是SAR的基本特征，如在tmv感染的烟叶组织中，GydF4y2BaPR-1GydF4y2Ba占总叶片蛋白的1％[GydF4y2Ba50.GydF4y2Ba］．的表达GydF4y2BaPDF1.2GydF4y2Ba由病原体在感染部位局部发作诱导，以及其他无感染的植物部位GydF4y2Ba51.GydF4y2Ba］．GydF4y2BaPDF1.2GydF4y2Ba也已经报道以编码的小蛋白具有抗真菌潜力[GydF4y2Ba52.GydF4y2Ba］．研究表明GydF4y2BaERF1GydF4y2Ba增强对眼斑引起的疾病的抵抗力GydF4y2BaRhizoctonia cerealis.GydF4y2Ba在小麦中，通过诱导GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba来自ET途径的基因[GydF4y2Ba53.GydF4y2Ba］．据记载，克隆GydF4y2BaERF1-VGydF4y2Ba来自野生种类，GydF4y2BaHaynaldia摘要GydF4y2Ba，可以诱导对粉末状霉菌的高水平抗性，并改善非生物胁迫耐受性[GydF4y2Ba54.GydF4y2Ba］．GydF4y2BaNPR1GydF4y2Ba涉及Sa-and Ja依赖性防御途径的交叉功能，是系统获得性抗性（SAR）的关键调节器，以激活其他有致病相关基因的表达[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba55.GydF4y2Ba］．NPR1还与可以与之结合的TGA转录因子成员相互作用GydF4y2Ba激活序列-1GydF4y2Ba（GydF4y2Ba1GydF4y2Ba)或在启动子中确定的元素GydF4y2BaPR-1GydF4y2Ba基因[GydF4y2Ba56.GydF4y2Ba］．PAL是苯基丙基化合物生物合成途径中的第一种酶，其通过产生植物氧锌素，木质素和其他酚类化合物等抗微生物化合物而涉及植物防御，以产生对病原体的障碍。GydF4y2Ba朋友GydF4y2Ba已知基因通过提供前体来参与这些抗微生物化合物的合成[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba57.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba58.GydF4y2Ba］．已经有报道指出ROS的破裂，特别是HGydF4y2Ba_2GydF4y2BaO.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba刺激GydF4y2BaRBOHBGydF4y2Ba（GydF4y2Ba呼吸爆发氧化酶同系物GydF4y2Ba)基因，在植物抵御生物和非生物胁迫中起重要作用[GydF4y2Ba59.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba60.GydF4y2Ba］．也有报道在真菌感染的细胞中诱导死亡，并立即抑制游离水杨酸和乙烯，以避免邻近细胞的死亡[GydF4y2Ba61.GydF4y2Ba］．在该研究中，观察到这些基因的阳性表达诱导抗性GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．因此，人们认为，植物防御反应的机制可能是GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba是由SA和JA/ET信号通路共同调控的，但仍需进一步研究明确准确的信号通路。GydF4y2Ba

利用农杆菌介导的叶盘转化法获得了正向转化的烟草植株。对阳性植株进行筛选，以3 mg/L的双歧杆菌抗生素作为选择标记，提取基因组DNA后，利用基因特异性引物进行基因整合检测。从我们的结果来看，在TGydF4y2Ba_0.GydF4y2Ba在转化植物的初始叶片上观察到阶段坏死病变，同时这些病变不存在于未转化的叶子上，后来没有出现在t上GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba，T.GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba和TGydF4y2Ba_3.GydF4y2Ba一代又一代。我们从1268个基因中进行选择GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba两个基因，这两个基因可以引发严重的反应GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba坏死病变出现在TGydF4y2Ba_0.GydF4y2Ba阶段。然而，转化的烟草植物可以在一定程度上适应这两个基因，并且坏死病变在t处消失GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba的一代。在TGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba代，虽然坏死病变消失，但抗性水平仍较未转化植株显著提高。为什么坏死灶消失而异物转化GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因仍然在T细胞中发挥作用GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba一代?增强的GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba基因表达水平（以及其他证据，如次级代谢物和抵抗GydF4y2Bap . capsiciGydF4y2Ba）在tGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba一代可以提供一个线索，但对于潜在的机制，它仍然需要进一步的研究。还有人在tGydF4y2Ba_0.GydF4y2Ba阶段GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba基因与烟草基因组的相互作用不稳定，坏死病变的发生是基因整合阳性的标志，随后利用基因特异性引物进行PCR验证。GydF4y2Ba

在植物-微生物相互作用中，质外体空间是许多生物化学相互作用发生的地方，包括攻击酶和宿主植物抑制剂之间的相互作用[GydF4y2Ba62.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba63.GydF4y2Ba］．在植物中，超敏反应(局部感染)可以产生强烈的防御信号，激活整个植物对即将入侵的病原体的防御反应[GydF4y2Ba64.GydF4y2Ba］．GydF4y2BaNPR1GydF4y2Ba是系统获得的抵抗（SAR）的关键调节器，以保护植物免受各种病原体[GydF4y2Ba55.GydF4y2Ba］．在目前的研究中，我们使用了一种真菌病原体，GydF4y2Bap . capsiciGydF4y2Ba[GydF4y2Ba33.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba63.GydF4y2Ba]，发现GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba有可能抑制病原体的生长，并产生病原体独立的耐用性，这可以在生成后继承生成。转化中病原体的侵染区域减少GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba线，将其显示出高GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba基因表达也显示出明显的相关性GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba和GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba基因表达与病原菌抗性。GydF4y2Ba

杂种优势是一种已经用于解释F中某些角色的改善的现象GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba不同作物的杂交种[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba］．在我们的实验中，被转化了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba与未转化的交叉GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba以生成FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交种。从F的分析GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交，观察到表达GydF4y2Ba公关GydF4y2Ba-genes是显著上调。还有，因为它被评价对抗升高的基础阻力一级GydF4y2Bap . capsiciGydF4y2Ba．综上所述，杂种优势对FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba因为它也被用来提高了不同作物的产量潜力[混合抗病GydF4y2Ba18GydF4y2Ba那GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba65.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba66.GydF4y2Ba］．生成的f时GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba混合动力汽车，我们采取了GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因转化GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba(TGydF4y2Ba_3.GydF4y2Ba代)为父系，未转化GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba作为母系血脉。的功能GydF4y2Ba佩GydF4y2BaF基因GydF4y2Ba_1GydF4y2Ba混合动力车或多或少GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因转化为T.GydF4y2Ba_0.GydF4y2Ba的一代。这可以解释我们的结果，新鲜的FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba杂交种具有鲜明的抗病性。此外，该策略产生的抗性与任何特定病原体无关，具有较宽的光谱抗性。本发现可能改变植物抗性育种的模式，因为FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba利用这一策略产生的杂交品种可用于开发不同的和持久的抗性品种，以管理大田作物疾病。GydF4y2Ba

次生代谢物概况GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba改变了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba揭示存在一些未转化的生物活性化合物的存在GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．这些生物活性化合物因其生物活性而被报道，如土霉素报道用于治疗衣原体和支原体感染[GydF4y2Ba67.GydF4y2Ba］．Cuelure被报道用于监测果蝇[GydF4y2Ba68.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba69.GydF4y2Ba]丙二醇素有可能激活植物系统对重金属的影响[GydF4y2Ba70GydF4y2Ba那GydF4y2Ba71.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba72.GydF4y2Ba］．在害虫管理方面，使用了己烯雌酚，因为它可以使雄性不育[GydF4y2Ba73.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba74.GydF4y2Ba和1,2-苯并异噻唑-3(2H)- 1的衍生物是强抗菌和抗真菌药物[GydF4y2Ba75.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba76.GydF4y2Ba］．可以认为，这些生物活性化合物的诱导也具有促进耐药的作用GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba改变了GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

通过本研究，我们可以得出结论，两种不同植物之间的非自我识别是启动对病原体的免疫应答的重要机制。因为这些GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba也有能力在其他重要作物上引发HR症状，比如GydF4y2BaL. Esculentum.GydF4y2Ba和GydF4y2BaG. HirsutumGydF4y2Ba（附加文件GydF4y2Ba1GydF4y2Ba(图S2)，所以在未来，这些基因可以用来制造其他重要经济作物的抗性。这里我们试图证明当异源基因从GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba被引入到GydF4y2Ban bentamianaGydF4y2Ba植株的基础抗性水平提高了好几倍。这一概念为植物-微生物互作研究打开了一个新的窗口，有助于开发新的遗传体系，引进新的潜在抗病品种，促进可持续农业的发展。在作物驯化改良过程中，遗传多样性降低，植物抗性丧失。这里介绍一种GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba进入现代作物植物的基因，植物可能会进入素质状态，并且防治损失可能会得到赔偿。在下一研究中，基于这些研究GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因，我们将评估，在多大程度上，失去的自然抗性从野生作物到栽培作物可以得到补偿。GydF4y2Ba

两个GydF4y2Ba佩GydF4y2Ba基因，GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba和GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba从被确定GydF4y2BaP. Ternata.GydF4y2Ba有可能触发人力资源部门。这两种基因参与了不同的抗性途径。GydF4y2BaptHR375GydF4y2Ba参与JA / ET路径的激活，而GydF4y2BaptHR941GydF4y2Ba也在SA通路中。这些异源植物基因可以激活植物的抗病能力GydF4y2BaN. Benthamiana.GydF4y2Ba而且，通过生成FGydF4y2Ba_1GydF4y2Ba通过杂交，可以获得不受病原菌影响的新鲜植物抗性。这种杂交设计的可行性可能有助于改进育种策略，以开发经济重要作物的持久抗性。GydF4y2Ba

HPI：GydF4y2Ba

小时后渗透GydF4y2Ba

人力资源：GydF4y2Ba

过敏反应GydF4y2Ba

荚：GydF4y2Ba

过氧化物酶GydF4y2Ba

PPO:GydF4y2Ba

多酚氧化酶GydF4y2Ba

公关GydF4y2Ba基因:GydF4y2Ba

发病相关基因GydF4y2Ba

佩GydF4y2Ba：GydF4y2Ba

Pinellia Ternata过敏反应GydF4y2Ba

存在:GydF4y2Ba

定量逆转录PCRGydF4y2Ba

ROS：GydF4y2Ba

反应性氧气GydF4y2Ba

SOD:GydF4y2Ba

超氧化物歧化酶GydF4y2Ba

我们要感谢万康康、周伦、欢娇娇和王敏对矢量的构建和有益的讨论。国家转基因生物育种重大专项(no . 2011ZX08003-001, no . 2016ZX08003-001);湖北省科技创新计划项目(no . 2016ABA093)。关键词:黄土，边坡，边坡稳定性，边坡稳定性GydF4y2Ba

资金GydF4y2Ba

该工作得到了转基因生物育种的国家重大项目（2011ZX08003-001和2016ZX08003-001）和湖北省技术创新计划（2016ABA093）。GydF4y2Ba

作者捐款GydF4y2Ba

HMKA、JX和ZA进行了转化、HR分析、UPLC-QTOF-MS分析、杂交和抗性试验。JX和LW进行图书馆建设和筛选。HMKA和WD进行了实验设计、数据分析和论文撰写。所有作者阅读并批准了最终的手稿。GydF4y2Ba

利益冲突GydF4y2Ba

作者声明他们没有利益冲突。GydF4y2Ba

数据和材料的可用性GydF4y2Ba

本研究中生成和分析的数据集可由通讯作者根据合理要求提供。GydF4y2Ba

从属关系GydF4y2Ba

1. 植物病理学，植物科学技术和作物病害监测与安全控制湖北省，华中农业大学的重点实验室学院，武汉，430070，湖北省，中国科GydF4y2Ba

   Hafiz Muhammad Khalid Abbas，Jingshu Xiang，Zahoor Ahmad，Lilin Wang＆Wubei DongGydF4y2Ba

相应的作者GydF4y2Ba

对应到GydF4y2BaWubei董GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

伦理批准和同意参与GydF4y2Ba

不适用。GydF4y2Ba

同意出版GydF4y2Ba

不适用。GydF4y2Ba

出版商的注意GydF4y2Ba

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再版和权限GydF4y2Ba