图6

重组ghcyp3的PPIase活性测定体外。一个，GhCYP-3与囊我和BglPCR扩增II位点，克隆到原核表达载体pET-32a中。b重组ghcyp3基因的表达及纯化大肠杆菌．用1mm IPTG诱导重组ghcyp3表达3小时，用10% SDS-PAGE分离得到的蛋白，并用His抗体进行western blot分析。34.6 kDa在镍- nta琼脂糖柱上纯化重组TrxA-6×His-S-tag-GhCYP-3 (THS-CYP)蛋白(箭头)。米,标志;车道1-2，空载体pET-32a不带IPTG;3-4车道，pET-32a- ghcyp3不含IPTG;第五车道，空载体pET-32a, IPTG;6巷，pET-32a- ghcyp3, IPTG。c，采用蛋白酶偶联法测定重组ghcyp3的PPIase活性。四肽底物(su - ala - phe- pro - phe2,4 -二氟苯胺)的脯氨酰顺反异构反应在390 nm处的吸光度增加。这些曲线代表了在没有ghcyp3(空白)和存在200 nM重组ghcyp3蛋白的情况下，在350 s的过程中sucp - afpf - pna底物的异构化。数值代表三个生物重复的平均值