水稻MEP途径的前两种酶DXS和DXR在类胡萝卜素代谢中的器官特异性差异作用gydF4y2Ba栽培稻gydF4y2Ba叶子和种子gydF4y2Ba

在本研究中，我们研究了水稻DXS和DXR作为MEP途径的前两种酶在水稻类胡萝卜素代谢中的差异作用。种子总类胡萝卜素含量提高了26%gydF4y2BaPGD1: OsDXS2gydF4y2Ba与NT株相比，平均增加3.4倍(最大增加5.4倍)gydF4y2BaPGD1: OsDXS2_Glb:: stPACgydF4y2Ba与gydF4y2BaGlb: stPACgydF4y2Ba线，但相比之下，减少了11%gydF4y2BaPGD1: OsDXRgydF4y2Ba行和50%在gydF4y2BaPGD1: OsDXR_Glb:: stPACgydF4y2Ba与NT植株的株系比较gydF4y2BaGlb: stPACgydF4y2Ba分别为水稻系(图;gydF4y2Ba5gydF4y2Ba和无花果。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)．考虑到水稻胚乳中植物素的生物合成十分有限[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]时，类胡萝卜素的积累大大增强gydF4y2BaPGD1: OsDXS2_Glb:: stPACgydF4y2Ba表明OsDXS2作为一种向类胡萝卜素代谢提供IPP/DMAPPs的限速酶，即使在种子中总类胡萝卜素含量gydF4y2BaPGD1: OsDXS2gydF4y2Ba种子的变化很小，只增加了26%。然而，在水稻叶片中，总类胡萝卜素平均减少了10%gydF4y2BaPGD1: OsDXS2gydF4y2Ba行和20%的gydF4y2BaPGD1: OsDXRgydF4y2Ba行。此外，总叶绿素也平均减少了11%gydF4y2BaPGD1: OsDXS2gydF4y2Ba15%的人gydF4y2BaPGD1: OsDXRgydF4y2Ba与NT植物相比(图;gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)．这些结果表明，OsDXS2仅在种子类胡萝卜素代谢中起限速酶作用，而在叶片中不起限速酶作用，而OsDXR既不在叶片中也不在种子中起限速酶作用。gydF4y2Ba

在拟南芥叶片中，AtDXS和AtDXR都是产生类胡萝卜素和叶绿素的生物合成途径中的限速酶[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]，然而，植物DXS和DXR酶的不同作用也在一些植物物种中得到了一致的报道。在胡萝卜中，的过度表达gydF4y2BaAtDXRgydF4y2Ba两种组织中总类胡萝卜素含量均未增加gydF4y2BaAtDXSgydF4y2Ba过表达通过改变叶片和根系中总类胡萝卜素的表达，提高了叶片和根系中总类胡萝卜素的含量gydF4y2BaPSY1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaPSY2gydF4y2Ba基因(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba］．在薰衣草中，过度表达gydF4y2BaAtDXSgydF4y2Ba不影响叶片中类胡萝卜素和叶绿素含量，但显著增加了挥发油单萜含量[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba］．相比之下,gydF4y2BaAtDXRgydF4y2Ba没有引起精油、类胡萝卜素或叶绿素含量的任何变化[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba］．这些研究清楚地表明，DXR酶的限速功能可能不一致，而DXS酶的限速功能可能在植物物种甚至不同组织之间有所不同。gydF4y2Ba

在本研究中，涉及MEP、胡萝卜素和叶黄素通路的水稻胡萝卜素基因的表达谱表明，它们的表达模式与水稻转基因植株叶片和种子中类胡萝卜素代谢的变化不成正比。胡萝卜素基因的表达，如gydF4y2BaOsDXS1gydF4y2Ba，gydF4y2BaOsPSY1gydF4y2Ba，gydF4y2BaOsPSY2,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaOsBCH2,gydF4y2Ba是通过增强其中一种而上调的gydF4y2BaOsDXS2gydF4y2Ba或gydF4y2BaOsDXRgydF4y2Ba与类胡萝卜素和叶绿素含量的降低相比，大多数类胡萝卜素基因的表达只有轻微的变化，尽管种子类胡萝卜素的积累有很大的增加(图。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)．与我们的结果相反，dxs编码基因在番茄果实和马铃薯块茎中的过表达增加了内源性psys编码基因的表达，随后导致类胡萝卜素积累的大幅增强[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba，gydF4y2Ba35gydF4y2Ba］．在胡萝卜叶和根中的类胡萝卜素代谢中也观察到了类似的结果[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba］．这些结果表明，dxs介导的类胡萝卜素和叶绿素含量的增加与叶绿素含量的增加有关gydF4y2Ba小组gydF4y2Ba基因的表达。但在水稻叶片中不存在正相关。的表达式gydF4y2BaOsPSY1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaOsPSY2gydF4y2Ba与叶片中类胡萝卜素含量的降低相比，基因优先上调，而在水稻种子中没有改变，即使类胡萝卜素含量增加。同样，在番茄果实中，与β-胡萝卜素的增强相比，DXS-、PSY-和pds编码基因的表达优先下调[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]，在gydF4y2BaBixa奥雷利亚纳gydF4y2BaL.，盐胁迫处理提高了类胡萝卜素含量，但生胡萝卜素基因的表达不成比例地下调[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba］．这些结果表明，内在胡萝卜素基因(如DXS-和psy -编码基因)的转录表达可能与其编码蛋白的表达水平不成正比，中间生物合成酶的蛋白质稳定性可能与速率限制酶的活性增强一样重要，以增强类胡萝卜素的积累。gydF4y2Ba

在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba， AtDXS蛋白被报道翻译后被叶绿体生物发生6 (CLB6，一种羟基-2-甲基-丁烯基4-二磷酸还原酶)、Hsp100伴侣和几种Clp蛋白酶调控[gydF4y2Ba37gydF4y2Ba的蛋白质平衡gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaPSY蛋白由Clp蛋白酶和ORANGE蛋白直接控制[gydF4y2Ba38gydF4y2Ba］．在gydF4y2BaCatharanthus roseus也叫gydF4y2Ba， DXR蛋白的稳定性高度依赖Clp蛋白酶介导的降解[gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]，而PDS蛋白的酶活性在β-胡萝卜素增强的番茄果实中更稳定地维持，即使其转录物下调[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba］．同样，我们的研究表明，除了DXS和PSY等速率限制酶的增强外，种子类胡萝卜素的积累可以在不按比例上调中间生物合成基因的情况下大幅增加，这表明种子类胡萝卜素代谢可能优先由生胡萝卜素酶的稳定性或活性控制，而不是由它们的转录水平控制。gydF4y2Ba

总的来说，我们提出了一个“三个水龙头和水箱模型”来描述水稻种子类胡萝卜素的代谢(图。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)．术语“三个水龙头”表示三个速率限制步骤，涉及DXS, PSY和BCH酶，从上游到下游途径提供限制水平的前体。两个水龙头之间的中间类胡萝卜素生物合成机制被视为“蓄水池”，在我们的模型中充满了代表IPP/DMAPP、胡萝卜素和叶黄素的特定类胡萝卜素代谢物，其容量仅由活性蛋白的状态决定(图2)。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)．通过遵循“三水龙头和水箱模型”，OsDXS2的过表达在gydF4y2BaPGD1: OsDXS2gydF4y2Ba种子可能会打开第一个“水龙头”，以增加进入第一个“水箱”的代谢通量，类胡萝卜素含量可能会略微增加(1.3倍)，相当于第二个“水龙头”(水稻PSY基因)的容量，在水稻种子中保持在基础水平。的逐步相加gydF4y2BaOsDXS2gydF4y2Ba而且gydF4y2BastPACgydF4y2Ba同时打开第一个和第二个“水龙头”，增加从第一个“水箱”到第二个“水箱”的代谢流量，这些连续的代谢流可以增加蛋白质稳定性，增强“水箱”的容量，使α/β-胡萝卜素的积累大幅增强315.3倍，而“水箱”基因的表达没有任何变化。在这种情况下gydF4y2BaGlb: stPACgydF4y2Ba第二个“水龙头”(stPAC)在第一个“水龙头”没有任何增强的情况下打开，但类胡萝卜素含量增加了73.8倍。相反，在gydF4y2BaPGD1: OsDXRgydF4y2Ba在种子中，作为第一个“水箱”组成部分的OsDXR的增强并没有增加类胡萝卜素的积累，清楚地说明了“水龙头”和“水箱”之间的功能差异。换句话说，第二个“龙头”(stPAC)的增强可以增加从第一个“龙头”到第二个“龙头”的代谢通量，但“龙头”成分(OsDXR)的增加可能不会影响从上游步骤到第二个“龙头”的代谢通量，因此在水稻种子中没有观察到任何类胡萝卜素积累的增强。最后，无论添加哪一种，叶黄素的含量都逐渐增加gydF4y2BaOsDXS2gydF4y2Ba或gydF4y2BastPACgydF4y2Ba基因在水稻种子中从1.3倍增加到6.8倍，但在水稻种子中没有发现额外的增加gydF4y2BaPGD1: OsDXS2_Glb:: stPACgydF4y2Ba种子，胡萝卜素含量增加4.3倍gydF4y2BaGlb: stPACgydF4y2Ba这表明这可能是由于第三个“水龙头”的最大容量。gydF4y2Ba

本研究研究了OsDXS2和OsDXR在水稻叶片和种子类胡萝卜素代谢中的差异作用，并测定了生胡萝卜素基因的表达变化。结果表明，OsDXS2在水稻种子中为类胡萝卜素代谢提供IPP/DMAPPs，但在水稻叶片中不提供，而在叶片和种子中没有OsDXR作为速率限制酶。类胡萝卜素基因的表达谱显示基因表达变化与代谢变化之间的非成比例相关，表明类胡萝卜素中间代谢物的生物合成活性可以在不增加转录物水平的情况下得到增强。综上所述，OsDXS2和OsDXR的这些不同作用可能以水稻植物特有的模式发生，并提出了“三水龙头和水槽模型”来描述水稻种子中的类胡萝卜素代谢。本研究为水稻类胡萝卜素代谢工程的优化设计提供了参考。gydF4y2Ba

植物材料和生长条件gydF4y2Ba

成熟的稻种(gydF4y2Ba栽培稻gydF4y2Bal .简历。在28°C光照16 h /暗8 h循环条件下，在温室土壤中发芽生长。从韩国国家农业科学研究所获得的水稻种子用于gydF4y2Ba农杆菌属gydF4y2BaDXS基因的介导转化和表达分析。在不同阶段采集器官特异性样本，用于实时定量pcr (qRT)。gydF4y2Ba

T0代转基因水稻植株先在生长室中生长，移栽到土壤中后，T1代和T2代在温室中同样条件下28℃光照循环16 h /暗循环8 h，夏季在田间种植，直到T4种子世代。所有实地研究都是在获得农村发展局(韩国)许可的情况下，根据当地立法进行的。T4种子用70%乙醇和2%次氯酸钠杀菌后，10天大的幼苗在28°C、12 h光照/12 h暗循环、70-90%相对湿度的房间中生长。以开花后40 d完全成熟(DAF)的T4种子为对照，进行qRT-PCR和代谢物分析。在脱壳(TR-200电动砻谷机，凯特，东京，日本)和抛光(珍珠抛光机，凯特)后，对种子胚乳颜色进行视觉比较。gydF4y2Ba

向量构造gydF4y2Ba

编码区域，包括的开放阅读框gydF4y2BaOsDXS2gydF4y2Ba(Os07g09190)和gydF4y2BaOsDXRgydF4y2Ba(Os01g01710)，分别使用基因特异性引物对F1/R1和F2/R2从10日龄幼苗的总RNA中扩增。每个扩增子都被进一步放大使用通用gydF4y2BaattBgydF4y2Ba引物对并引入gydF4y2BapDONR221gydF4y2Ba通过Gateway®BP Clonase®II酶混合物(Invitrogen, Waltham, MA)重组载体。将得到的亚克隆与载体进行重组gydF4y2Bap600-PGD1gydF4y2Ba(首尔国立大学，韩国平昌)，其中含有水稻磷酸葡萄糖酸脱氢酶1 (PGD1)启动子，用于水稻植物的本构表达，[gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]使用Gateway®LR Clonase®II酶混合物(Invitrogen)。这就产生了gydF4y2BapPGD1: OsDXS2gydF4y2Ba而且gydF4y2BapPGD1: OsDXRgydF4y2Ba水稻转化向量(图;gydF4y2Ba1gydF4y2Bab)。gydF4y2Ba

全面介绍gydF4y2BaPGD1: OsDXS2:: PinIIgydF4y2Ba或gydF4y2BaPGD1: OsDXR:: PinIIgydF4y2Ba卡带进入PGD1启动子区域，PinII终止子区域进入gydF4y2BastPACgydF4y2Ba表达式盒，其中产生gydF4y2BaβgydF4y2Ba-胡萝卜素在水稻胚乳特异性球蛋白(Glb)启动子的控制下[gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]，分别用F3/R3引物对扩增，然后克隆到agydF4y2BapGlb: stPACgydF4y2Ba向量使用gydF4y2BaXhogydF4y2Ba我也不服输gydF4y2BapPGD1: OsDXS2_Glb:: stPACgydF4y2Ba或gydF4y2BapPGD1: OsDXR_Glb:: stPACgydF4y2Ba用于水稻转化(图;gydF4y2Ba1gydF4y2Bab).所有pcr均使用PrimeSTAR®HS DNA聚合酶(Takara，志贺，日本)进行。所有引物如图所示。gydF4y2Ba3.gydF4y2Bab及其序列列在附加文件中gydF4y2Ba4gydF4y2Ba:表S7。gydF4y2Ba

水稻转化与转化材料的选择gydF4y2Ba

对于过度表达gydF4y2BaOsDXS2gydF4y2Ba或gydF4y2BaOsDXRgydF4y2Ba,gydF4y2BapPGD1: OsDXS2gydF4y2Ba，gydF4y2BapPGD1: OsDXRgydF4y2Ba，gydF4y2BapPGD1: OsDXS2_Glb:: stPAC,gydF4y2Ba而且gydF4y2BapPGD1: OsDXR_Glb:: stPACgydF4y2Ba最后的向量，分别被引入gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba然后是DH5αgydF4y2Ba根癌土壤杆菌gydF4y2BaLBA4404窝藏gydF4y2BapSB1gydF4y2Ba通过三亲本交配获得质粒[gydF4y2Ba41gydF4y2Ba］．与水稻成熟种子分化出的胚性愈伤组织共培养后(gydF4y2Bao .漂白亚麻纤维卷gydF4y2Bal .简历。Ilmi)，假定的转基因植株是根据先前发表的方法，在生长室条件下，使用含有磷菊酯(4 mg/L)和头孢噻肟(500 mg/L)的选择培养基生成的[gydF4y2Ba42gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

基因组DNA使用DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen)从叶片组织中纯化，用TissueLyser II (Qiagen)研磨，并按照制造商的说明使用MightyAmp®DNA聚合酶(Takara)进行pcr扩增。首先在T0叶代用引物F4/R4对PCR筛选转基因阳性植株gydF4y2BaOsDXS2gydF4y2Ba， F4/R5为gydF4y2BaOsDXRgydF4y2Ba，和F6/R6gydF4y2BastPACgydF4y2Ba转基因产品。选择3个品系，在T3叶代进行磷酸菊酯(4mg /L)分离试验，以评估T-DNA的纯合度，然后使用相同的PCR方案进一步验证。为了检测水稻基因组中的转基因拷贝数，使用NF/NR(一种定制的探针NP，用6-羧基荧光素染料标记)进行TaqMan实时PCRgydF4y2Ba号gydF4y2Ba终结者在gydF4y2Ba酒吧gydF4y2Ba盒(gydF4y2Ba35 s::酒吧::gydF4y2Ba)和定制的VIC染料标记α-微管蛋白探针(Os11g14220)，作为内部参考(Assay ID: Os03643486_s1;应用生物系统公司，福斯特城，CA)。使用TaqMan基因表达Master Mix (Applied Biosystems)进行PCR，并使用CFX Connect™Real-Time System (Bio-Rad, Richmond, CA)相对于T3纯合子代中1个拷贝的荧光测量gydF4y2BastPAC 25gydF4y2Ba米线[gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]使用PCR条件，如前所述[gydF4y2Ba43gydF4y2Ba］．在基因组DNA分析中使用的引物和探针的序列在附加文件中列出gydF4y2Ba4gydF4y2Ba:表S7。gydF4y2Ba

类胡萝卜素和叶绿素的定量gydF4y2Ba

如前所述，制备水稻植物的叶片和种子样品以提取类胡萝卜素[gydF4y2Ba43gydF4y2Ba］．在高效液相色谱分析中，加入β-apo-8 ' -胡萝卜素(0.05 mL, 25 μg/mL, Sigma-Aldrich Chemical Co, St. Louis, MO)作为内标，以二氯甲烷/甲醇50:50 (v/v)溶解制备分析样品，用己烷(1.5 mL)分离成层，液氮干燥。采用YMC ODS C-30色谱柱(3 μm, 4.6 × 250 mm;采用安捷伦1100系列高效液相色谱系统(安捷伦，加州圣克拉拉)，在洗脱条件下配备光电二极管阵列检测器，如前所述[gydF4y2Ba43gydF4y2Ba］．番茄红素和其他化合物的色谱图分别在472 nm和450 nm处生成，包括α-胡萝卜素、(all-gydF4y2BaEgydF4y2Ba）-gydF4y2BaβgydF4y2Ba胡萝卜素,9gydF4y2BaZgydF4y2Ba-gydF4y2BaβgydF4y2Ba胡萝卜素,13gydF4y2BaZgydF4y2Ba-gydF4y2BaβgydF4y2Ba胡萝卜素,gydF4y2BaβgydF4y2Ba-隐黄质，叶黄素，紫黄质和玉米黄质。定量由类胡萝卜素标准品相对于外部标准品校准曲线的HPLC峰面积确定，这些标准品购自胡萝卜素公司(Lupsingen, Switzerland)。数量gydF4y2BaβgydF4y2Ba-胡萝卜素测定为(所有-gydF4y2BaEgydF4y2Ba）-gydF4y2BaβgydF4y2Ba胡萝卜素,9gydF4y2BaZgydF4y2Ba-gydF4y2BaβgydF4y2Ba-胡萝卜素，13gydF4y2BaZgydF4y2Ba-gydF4y2BaβgydF4y2Ba胡萝卜素。gydF4y2Ba

为了提取叶绿素，将水稻植株的新鲜叶粉10 mg与1 mL 100%甲醇混合，在70°C下摇晃(500 rpm)，使用Comfort(型号5355,Eppendorf AG，汉堡，德国)恒温培养30分钟。在800度离心后gydF4y2BaggydF4y2Ba在4℃下10分钟，用分光光度计(Optizen Pop, Mecasys Co, Daejeon, Korea)在666 nm和653 nm处测量上清液的吸光度。叶绿素含量gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BabgydF4y2Ba均使用Wellburn公式(1994)计算。gydF4y2Ba

实时定量PCRgydF4y2Ba

在9周(营养期)和3个月(生殖期)从叶片、根和小花组织中纯化总RNA，比较其表达模式gydF4y2BaOsDXS1gydF4y2Ba，gydF4y2BaOsDXS2gydF4y2Ba，gydF4y2BaOsDXS3,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaOsDXRgydF4y2Ba基因。还从10日龄幼苗的叶片和未处理的成熟种子40 DAF中纯化总RNA，以分析每种转基因植物中胡萝卜素基因的表达模式。冷冻粉末(100 mg)样品在PureLink®植物RNA试剂(Invitrogen)中与DNase I (Qiagen, Hilden, Germany)分离，以去除残留的基因组DNA污染。使用AccuPower®RT Premix (Bioneer, Daejeon, Korea)合成了第一个cDNA，并与SYBR Green Real-time PCR master mix (Bio-Rad)混合。所有反应均使用CFX Connect™实时系统(Bio-Rad)，按照制造商的说明在以下条件下进行:95°C下3分钟的1个循环，95°C下15秒的40个循环，以及60°C下30秒的1个循环。采用基因特异性引物F7/R7对进行qRT-PCR进行转基因表达gydF4y2BaOsDXS2gydF4y2Ba， F8/R7 forgydF4y2BaOsDXRgydF4y2Ba，和F9/R9gydF4y2BastPACgydF4y2Ba，如图所示。gydF4y2Ba1gydF4y2Bab和附加文件gydF4y2Ba4gydF4y2Ba:表S7。利用基因特异性引物对22个水稻胡萝卜素发生相关基因的转录本进行了qRT-PCR检测。基因名称、登录号、引物序列和产物大小在附加文件中详细说明gydF4y2Ba4gydF4y2Ba:表S8。为了使RNA的数量归一化，所有的qRT-PCR值都相对于水稻进行计算gydF4y2Ba泛素5gydF4y2Ba该基因(Os01g22490)使用U5F/U5R引物对扩增[gydF4y2Ba44gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

所有实验至少进行了3次生物重复，结果以均数±标准误差(SE)表示。两组之间任何统计学上的显著差异都是使用双尾学生来确定的gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。一个gydF4y2BapgydF4y2Ba值< 0.05为有统计学意义。gydF4y2Ba

本研究中使用和/或分析的材料和数据集可根据合理要求从通讯作者处获得。gydF4y2Ba

BCH:gydF4y2Ba

β-胡萝卜素羟化酶gydF4y2Ba

CYP97B:gydF4y2Ba

p450型胡萝卜素羟化酶基因gydF4y2Ba

DMAPP:gydF4y2Ba

二甲基烯丙基焦磷酸盐gydF4y2Ba

DXP:gydF4y2Ba

5-磷酸脱氧木质素gydF4y2Ba

DXR:gydF4y2Ba

脱氧木质素5-磷酸还原异构酶gydF4y2Ba

dx:gydF4y2Ba

脱氧木质素5-磷酸合成酶gydF4y2Ba

Glb:gydF4y2Ba

一种水稻胚乳特异性球蛋白gydF4y2Ba

IPP:gydF4y2Ba

异戊基焦磷酸盐gydF4y2Ba

议员:gydF4y2Ba

4-磷酸甲基赤藓糖醇gydF4y2Ba

MVA:gydF4y2Ba

甲戊酸gydF4y2Ba

PDS:gydF4y2Ba

一种pytoene去饱和酶gydF4y2Ba

PGD1:gydF4y2Ba

水稻磷酸葡萄糖酸脱氢酶1gydF4y2Ba

小组:gydF4y2Ba

一种pytoene合成酶gydF4y2Ba

stPAC:gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba合成植烯合成酶:2A:CrtIgydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

这项工作得到了韩国农村发展局资助的下一代生物绿色21计划(PJ01334601和PJ01368801 to SH Ha)的资助。资助者在研究设计、数据分析和解释以及手稿撰写中没有任何作用。gydF4y2Ba

从属关系gydF4y2Ba

1. 庆熙大学生命科学学院基因工程系和生物技术研究生院，龙仁，17104，大韩民国gydF4y2Ba

   游可，李永杰，哈诗gydF4y2Ba

2. 仁川国立大学生命科学部和生物资源与环境中心，仁川，22012，韩国gydF4y2Ba

   Kim JK & Baek SAgydF4y2Ba

3. 忠南国立大学农业与生命科学学院，大韩民国大田34134gydF4y2Ba

   全丫gydF4y2Ba

4. 国家农业科学院，农村发展管理局，大韩民国全州54874gydF4y2Ba

   Lim SHgydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

SHH协调了这个项目并监督了手稿。MKY与SHH一起设计了这项研究，并撰写了手稿。YJL、YAJ和SHL构建了本研究中所有水稻转基因植株，JKK和SAB分析了类胡萝卜素和叶绿素的含量，MKY和YJL进行了所有类胡萝卜素基因的表达谱分析。所有作者均已阅读并批准最终稿。SHH为通讯作者，负责所有联系和通信。gydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2BaHa SHgydF4y2Ba．gydF4y2Ba

伦理批准并同意参与gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

发表同意书gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者宣称他们之间没有利益冲突。gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Ba

施普林格自然对出版的地图和机构从属关系中的管辖权主张保持中立。gydF4y2Ba

开放获取gydF4y2Ba本文遵循知识共享署名4.0国际许可协议，允许以任何媒介或格式使用、分享、改编、分发和复制，只要您对原作者和来源给予适当的署名，提供知识共享许可协议的链接，并注明是否有更改。本文中的图像或其他第三方材料包含在文章的创作共用许可协议中，除非在材料的信用额度中另有说明。如果材料未包含在文章的创作共用许可协议中，并且您的预期使用不被法定法规所允许或超出了允许的使用范围，您将需要直接获得版权所有者的许可。如欲查看本牌照的副本，请浏览gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/gydF4y2Ba．创作共用公共领域奉献弃权书(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/gydF4y2Ba)适用于本条所提供的资料，除非在资料的信用额度中另有说明。gydF4y2Ba

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