蛋白质组学分析表明，源库修饰影响小麦叶片衰老和籽粒质量gydF4y2Ba

源/水槽相互作用调节叶片衰老，光合效率[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba和籽粒灌浆能力，从而决定谷物产量[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］.具有足够储备的强源对于谷物填充是必要的，并且高温下降能力促进从源到水槽的储备重新化[gydF4y2Ba22gydF4y2Ba，gydF4y2Ba23gydF4y2Ba］.在本研究中，我们从单叶中测定了NDVI、PRI、SPAD和叶绿素荧光值，我们观察到，与完整对照相比，半降解增加了这些指标，而落叶降低了这些指标(表3)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba；无花果。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.在16块坝上的标志叶片细胞的超微结构观察表明，在半降解后保持更好的叶绿体状态（图。gydF4y2Ba2gydF4y2Bab）落叶后较差（图。gydF4y2Ba2gydF4y2Bac). NDVI、PRI和SPAD是最常用的光谱指数，与高等植物的叶绿素含量和叶片衰老有关[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba］.叶绿素荧光和叶绿素降解也广泛用作衰老和光合作用进展的典型指标[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba25gydF4y2Ba，gydF4y2Ba26gydF4y2Ba，gydF4y2Ba27gydF4y2Ba］.这些指数的高值与粮食产量密切相关[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba］.因此，本研究的证据表明，半降解可能导致叶片衰老晚，而落叶可能导致叶片衰老早。gydF4y2Ba

众所周知，ROS会加速植物衰老，而抗氧化酶在清除过量ROS和减少ROS对细胞膜的有害影响方面发挥着重要作用[gydF4y2Ba29gydF4y2Ba，gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba］.在小麦中，抗氧化防御系统的能力有助于延缓衰老[gydF4y2Ba31gydF4y2Ba］.在本研究中，尽管落叶显著提高了SOD、POD和CAT活性，但LDef组的ROS含量高于LC组，特别是在24 DAM，表明抗氧化酶水平的升高可能是ROS水平升高的反应。在iTRAQ分析鉴定的DEPs中，LDef组在16 DAM处SOD(片段)上调(见表)gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）.这些结果表明，部分源头的去除可能引起更积极的生理反应，从而导致活性氧的爆发和膜氧化，从而导致小麦植株早衰。这些抗氧化酶活性的提高可能是保护植物免受更严重的损害，部分缓解早期衰老，并试图增加灌浆期和粒重的一种策略。LDG组SOD、POD和CAT活性降低，ROS含量略有下降(图2)。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba；表格gydF4y2BaS1gydF4y2Ba对于POD），表明半污水可能对旗叶上的“负担”施加较低的“负担”，从而导致ROS生产较低。gydF4y2Ba

植物激素和相关激素串扰与源库关系、库容量、灌浆速率的改变显著相关[gydF4y2Ba32gydF4y2Ba，gydF4y2Ba33gydF4y2Ba，gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]、膜稳定性、叶片衰老和光合效率，可能是通过作为信号清除活性氧或阻止活性氧形成[gydF4y2Ba35gydF4y2Ba，gydF4y2Ba36gydF4y2Ba，gydF4y2Ba37gydF4y2Ba］.gydF4y2Ba

Cytokinins是调节叶片衰老的启动和时序的最重要的植物激素[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba，gydF4y2Ba38gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]并且与留在温度突变体中的叶片衰老的进展密切相关gydF4y2Batasg1gydF4y2Ba小麦[gydF4y2Ba31gydF4y2Ba]并且在玉米的温度绿色型（gydF4y2Ba玉米gydF4y2Ba) [gydF4y2Ba40gydF4y2Ba］.谷物CTK含量与最大粒度呈正相关[gydF4y2Ba35gydF4y2Ba，gydF4y2Ba41gydF4y2Ba，gydF4y2Ba42gydF4y2Ba］.等主要谷类作物小麦、CTK更高浓度存在于谷物和函数的胚乳细胞分裂期间在粮食发展的早期阶段,这与生长素的功能相结合,积极和显著相关的细胞分裂和灌浆期(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，gydF4y2Ba34gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39gydF4y2Ba，gydF4y2Ba42gydF4y2Ba，gydF4y2Ba43gydF4y2Ba，gydF4y2Ba44gydF4y2Ba，gydF4y2Ba45gydF4y2Ba]，因为增强的下沉强度[gydF4y2Ba46gydF4y2Ba，gydF4y2Ba47gydF4y2Ba］.gydF4y2Ba

玉米籽粒IAA浓度在灌浆早期迅速增加[gydF4y2Ba48gydF4y2Ba]，从而产生“吸引力”，并导致谷物中CTK浓度增加[gydF4y2Ba49gydF4y2Ba，gydF4y2Ba50gydF4y2Ba]，这与向发育中的谷物输送同化物的增加有关[gydF4y2Ba48gydF4y2Ba］.此外，植物蛋白与增强的水槽容量相关联，导致营养增量源营养素复合，细胞增大和籽粒灌装速度增加[gydF4y2Ba51gydF4y2Ba，gydF4y2Ba52gydF4y2Ba］.gydF4y2Ba

在我们的研究中，落叶降低了叶粒比CTK和IAA浓度(表1)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）.根据目前和以往的研究结果，我们假设，由于落叶造成的更高的来源竞争相对刺激了籽粒激素的生物合成，从而增加了库的强度，提高了它们从有限的来源吸收更多储备的潜力。与此同时，通过超微结构观察和植被指数测量发现，旗叶中相对较低的CTKs和IAA水平促进了籽粒灌浆大分子的降解，从而导致早期衰老(表)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba；无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）.这种观点与表明在具有较大沉降比率的品种中的结果中，对源光合作用供应的竞争更大，以满足谷物填充，导致过早衰老[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］.此外，本研究的数据表明，CTK和IAA浓度的叶粒比可能在调控小麦叶片衰老中起主导作用。gydF4y2Ba

半降解增加了CTK浓度的叶粒比(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）.基于这些结果,正如上面所讨论的,我们建议由于half-degraining源强度相对较高,因此较低的竞争压力源储备导致更高的ctk叶/谷物比和较慢的再活化的叶储备,造成延迟叶片衰老。gydF4y2Ba

CTKs和JA是对植物衰老具有拮抗信号作用的主要激素[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］.ROS和JA的积累导致叶片早衰，光合效率低[gydF4y2Ba53gydF4y2Ba］.对JA生物合成的特异性抑制导致水稻籽粒产量的增加[gydF4y2Ba54gydF4y2Ba］.在我们的研究中，我们观察到半降解降低了8 DAM下JA浓度的叶粒比，而落叶降低了试验期间JA浓度的叶粒比(表2)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）.考虑到JA对来源操纵的响应，我们假设较低的JA叶粒比可能有助于避免落叶植物的叶片过早衰老。gydF4y2Ba

叶片衰老与蛋白质组的基本变化有关。本研究采用基于iTRAQ的比较蛋白质组学分析方法，确定参与叶片衰老和籽粒灌浆的关键候选因子。BP、MF和CC类别中的GO项如图所示。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba．还进行了这些基因的Kegg途径浓缩分析（图。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

叶绿体是产生ROS的中央细胞器，而ROS的积累可能导致氧化损伤并抑制光合作用[gydF4y2Ba55gydF4y2Ba］.Ferredoxin：脑膜氧化辛还原酶是叶绿体开发所必需的gydF4y2Ba拟南芥蒂利亚纳gydF4y2Ba［gydF4y2Ba56gydF4y2Ba]并作为抗氧化防御系统的组成部分[gydF4y2Ba57gydF4y2Ba］.氧化还原系统的破坏导致ROS的爆发，例如超氧化物（O.gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{·−gydF4y2Ba})和过氧化氢(HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba），导致早期叶片衰老[gydF4y2Ba58gydF4y2Ba，gydF4y2Ba59gydF4y2Ba］.谷胱甘肽通过氧化/还原过程循环，因此参与氧化应激;它的代谢在维持氧化还原平衡、消除氧化损伤方面发挥着重要作用[gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］.叶绿烯脱氢酶与类胡萝卜素的生物合成途径有关，类胡萝卜素是一种膜抗氧化剂[gydF4y2Ba61gydF4y2Ba］.在LDG和LC基团之间进行比较，富勒氏蛋白酶：将硫氧嗪还原酶在MF中聚集，并在LDG组中上调。BP最普遍的GO术语参与ROS代谢过程，包括氧化还原过程，对氧化应激的反应H.gydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba代谢过程和ogydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{·−gydF4y2Ba}删除(表gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）.在这些过程中，根据PAS_Zscore判断，LDG组氧化还原过程的稳态增强最强(见表)gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.MF分析显示，两种氧化还原酶活性均受到显著影响，前10个KEGG通路中谷胱甘肽代谢均得到鉴定(图2)。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba一种）。上调囊体染料过氧化物酶（APX）（碎片）和甜菜碱醛脱氢酶（BADH;甜菜碱生物合成的重要酶）（表gydF4y2BaS1gydF4y2Ba)，并参与多种途径(图。gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）.APX和Betaine函数都作为ROS扫除者[gydF4y2Ba62gydF4y2Ba］.这些结果表明，半降解可能通过促进活性氧清除活性来增强叶片的抗氧化能力，至少部分促进了叶片延缓衰老(表1)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba；无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

LDG / LC组的Kegg途径分析表明DEPS主要参与氮和碳代谢。相应地，MFS，包括谷氨酸合酶，富勒森蛋白依赖性谷氨酸合成酶（FD-Gogat; EC 1.4.7.1）和吡哆醛5'-磷酸合酶（谷氨酰胺水解）活性和碳代谢（图。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba一个;表格gydF4y2BaS2gydF4y2Ba),受到影响。BP分析显示这些过程上调，表明LDG组的氮和碳代谢可能增强。事实上，根据CC分析，在蛋白质生物合成中发挥重要作用的类别，如胞浆核糖体和核糖体，在LDG组中具有高度代表性(图)。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba一个;表格gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.因此，上调了诸如60s核糖体和40℃的核糖体蛋白的DEP（表gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

LDG组与LC组比较，与光合作用、前体代谢产物和能量产生相关的DEPs均上调(表)gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）并且显示出与光合生​​物中的碳固定的显着相互作用（图。gydF4y2BaS1gydF4y2BaB). MFs，如磷酸烯醇丙酮酸羧激酶和蔗糖-磷酸磷酸酶的活性受到影响(表gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）.最重要的是，蔗糖磷酸磷酸酶与源活性相关，增强其产物蔗糖从叶向库的运输[gydF4y2Ba63gydF4y2Ba]并影响小麦叶片衰老的进展[gydF4y2Ba64gydF4y2Ba］.gydF4y2Ba

在GDG组中，胺氧化酶，催化反应产生H.gydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba［gydF4y2Ba65gydF4y2Ba]较GC组下调，而Cu-Zn SOD和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)上调(表)gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）.SOD是一种重要的抗氧化酶，DHAR通过循环利用抗坏血酸(植物中的主要抗氧化剂)来降低叶片ROS的水平，从而影响叶片衰老的速率和光合活性[gydF4y2Ba29gydF4y2Ba，gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba］.因此，氧化石墨烯分析表明，伯胺氧化酶和氧化还原酶活性受到影响。蛋白谷胱甘肽化，氧化还原调节和信号转导的机制[gydF4y2Ba66gydF4y2Ba]，表达上调(表gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.这些变化表明，在源库比较高的半脱粒植物中，剩余颗粒可能具有较高的清除ROS的能力。gydF4y2Ba

蛋白质二硫异构酶(pdi)主要存在于真核生物的内质网中，在蛋白质折叠过程中起着重要作用。pdi的水平与蛋白质生物合成活动有关[gydF4y2Ba67gydF4y2Ba，gydF4y2Ba68gydF4y2Ba，gydF4y2Ba69gydF4y2Ba]和非生物抗压力[gydF4y2Ba68gydF4y2Ba］.在本研究中，GDG组的pdi水平上调(表)gydF4y2BaS1gydF4y2Ba)， 60S核糖体蛋白L29、40S核糖体蛋白S12和真核翻译起始因子4B1也上调(表)gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）.这些变化表明除谷物可能会影响GDG组颗粒中的蛋白质合成。gydF4y2Ba

光合作用，包括光合作用和光反应，光收获和黑暗反应，也显着上调;另外，塑性粘蛋白和gydF4y2Ba:gydF4y2Ba基因产物(片段)在GDG组中上调，表明可能有更高的光利用效率。的gydF4y2Ba:gydF4y2Ba基因参与碳、乙醛酸盐和二羧酸盐代谢[gydF4y2Ba70gydF4y2Ba］.这些变化表明，通过表达，半降解碳，甘油酯和二羧酸酯的代谢影响gydF4y2Ba:gydF4y2Ba如图所示。gydF4y2BaS1gydF4y2BaC。gydF4y2Ba

在植物中，乙酰辅酶a羧化酶通过乙酰辅酶a羧化成丙二酰辅酶a催化从头脂肪酸生物合成的第一步[gydF4y2Ba69gydF4y2Ba，gydF4y2Ba71gydF4y2Ba，gydF4y2Ba72gydF4y2Ba］.在本研究中，GDG组乙酰辅酶A羧化酶、质体乙酰辅酶A羧化酶(片段)和乙酰辅酶A羧化酶(片段)下调;CoA羧化酶、乙酰CoA羧化酶和生物素羧化酶活性也受到影响。质体乙酰辅酶a羧化酶与许多其他DEPs有相互作用(图)。gydF4y2BaS1gydF4y2BaC).这些结果表明，在GDG组中脂肪酸的生物合成可能受到影响。gydF4y2Ba

在分析GDG/GC组的MF类别时，确定了与琥珀酸脱氢酶(泛素)活性相关的过程(图)。gydF4y2Ba5gydF4y2Bac;表格gydF4y2BaS2gydF4y2Ba)，根据琥珀酸脱氢酶[泛素酮]黄蛋白亚基和线粒体上调，以线粒体电子传输等MF类为代表，琥珀酸转化为泛素酮(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bac）和柠檬酸循环（图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bab).这些过程可能发生在CCs中，如线粒体基质、线粒体呼吸链复合物II和琥珀酸脱氢酶复合物(泛素)(图2)。gydF4y2Ba5gydF4y2BaC）。此外，GMP生物合成方法，GMP代谢过程，水解酶活性（水解O-糖基化合物），显着表示糖基化合物代谢过程和糖基化合物生物合成过程（表gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.这些结果表明，半降解可能影响剩余晶粒的能量产生。在BP分析中，我们确实观察到与能量产生相关的类别上调，包括前体代谢物和能量的产生，以及电子传递偶联ATP合成偶联电子传递(表)gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

在我们的研究中，LDEF组中的相对ROS含量增加（图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba），这可能会抑制光合作用[gydF4y2Ba56gydF4y2Ba，如上所述。而谷胱甘肽s-转移酶、超氧化物歧化酶(片段)和氧化还原酶活性，作为受体作用于超氧化物自由基;SOD活性(图gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba）;氧化还原过程;氧化还原辅酶代谢过程;生育酚环化酶和谷胱甘肽s -转移酶gydF4y2BaS1gydF4y2Ba）上调生育酚环化酶活性（表gydF4y2BaS2gydF4y2Ba)，表明在LDef组中，可能已经发展出一些帮助植物清除ROS和消除氧化损伤的策略[gydF4y2Ba73gydF4y2Ba，gydF4y2Ba74gydF4y2Ba］.然而，活性氧代谢过程、超氧自由基的清除、细胞对超氧自由基的反应、细胞对氧自由基的反应、HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba代谢过程和细胞对ROS的反应下调(表)gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

有趣的是，在LDEF组中，前20名明显代表的BPS（表gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.与光合作用相关的术语是显着富集的，但显示出不同的变化趋势。例如，上调塑性组织和辅助因子代谢过程。还上调与光合作用 - 天线蛋白和碳代谢相关的DEPs（图。gydF4y2BaS1gydF4y2BaB).然而，叶绿素生物合成、叶绿素代谢和色素生物合成过程被下调(表)gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.这些结果表明叶片光合作用可能受到影响（图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bab).根据MF分析，铁硫团簇结合、2Fe-2S铁硫团簇结合和3Fe-4S铁硫团簇结合通过调节水稻的电子传递和叶绿素含量，在光合速率中发挥重要作用[gydF4y2Ba75gydF4y2Ba，受到了显著影响。因此，包括电子载体、质子转运atp酶、氢输出atp酶、氢离子跨膜转运酶和质体喹啉-质体青苷还原酶在内的许多MF类别的活性都发生了变化(图)。gydF4y2Ba5gydF4y2Bab;表格gydF4y2BaS2gydF4y2Ba)，说明能量供应在LDef组中可能非常重要。事实上，主要与能量代谢相关的氧化石墨烯类别被上调，包括甘油醛-3-磷酸代谢过程，葡萄糖- 6-磷酸代谢过程，碳水化合物衍生物的代谢过程和前体代谢物的产生和能量通过戊糖-磷酸盐途径和戊糖-磷酸盐分流(表gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

在LDef基团中，是肽基-脯氨酸gydF4y2Ba独联体gydF4y2Ba-gydF4y2Ba反式gydF4y2Ba异构酶和肽丙醇异构酶富集，影响蛋白质折叠，并与叶绿素a-b结合蛋白和细胞色素相互作用gydF4y2Bab-c1gydF4y2Ba配合亚基Rieske如图所示。gydF4y2BaS1gydF4y2BaB.脂质代谢方面，LDef组有机磷代谢、细胞脂质代谢、脂质生物合成和磷脂生物合成过程也上调。此外，蛋白谷胱甘肽化是氧化还原调节和信号转导的一种机制[gydF4y2Ba66gydF4y2Ba[和氧化还原过程是下调的，表明可以降低清除ROS的能力。gydF4y2Ba

在GDEF组的BP类别分析中，增强了有机腈复合代谢和细胞蛋白质代谢过程。然而，下调蛋白质折叠（表gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）;另外，下调翻译，肽生物合成，肽代谢和L-脯氨酸生物合成过程。结果，大量的低分子量谷丁蛋白（亚基）减少了（表gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.这些过程可能发生在内质网腔、预折叠复合物和核糖体中，调控核糖体的结构成分gydF4y2BaS2gydF4y2Ba)，特别是在内质网中，因为内质网中的蛋白质加工受到显著影响(图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bab）。gydF4y2Ba

在GDEF组中，下调葡萄糖6-磷酸盐代谢过程和前体代谢物和能量的产生（表gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.丙酮酸激酶降低，丙酮酸激酶活性降低（表gydF4y2BaS1gydF4y2Ba，gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.同时，叶绿素a-b结合蛋白(叶绿体)也下调。光合作用、光收获和光反应也降低。这些结果表明，在落叶植物的籽粒中，光合效率和能量产生可能受到影响。gydF4y2Ba

根据以上结果，我们进一步推测落叶对胚乳发育和种子发育成熟有一定的阻碍作用，如表所示gydF4y2BaS2gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

正常衰老叶片中的大量大分子被降解酶降解为小分子[gydF4y2Ba76gydF4y2Ba，这导致大量韧皮部可移动的营养物质从植物衰老的部分重新动员到正在发育的汇[gydF4y2Ba22gydF4y2Ba，gydF4y2Ba77gydF4y2Ba］.gydF4y2Ba

蛋白质组学分析结果表明，源库修饰主要影响氮、碳代谢和能量生产。在植物叶片衰老过程中，编码蛋白酶的基因过度表达[gydF4y2Ba78gydF4y2Ba，gydF4y2Ba79gydF4y2Ba，gydF4y2Ba80gydF4y2Ba，gydF4y2Ba81gydF4y2Ba］.大量与衰老相关的蛋白酶上调，由此产生的分解代谢产物从叶片被动员到发育中的谷物中[gydF4y2Ba76gydF4y2Ba，gydF4y2Ba82gydF4y2Ba，gydF4y2Ba83gydF4y2Ba，gydF4y2Ba84gydF4y2Ba］.淀粉酶的活性在淀粉降解和非结构性碳水化合物从营养器官转移到发育库中起着至关重要的作用，因此对籽粒灌浆至关重要[gydF4y2Ba85gydF4y2Ba，gydF4y2Ba86gydF4y2Ba］.在本研究中，脱落增加了淀粉酶的活性（图。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)和酸性和碱性蛋白酶(图。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba）.在24块坝上在16和24坝和24个坝和淀粉酶活性下进行半降低蛋白酶活性。这些结果表明，脱落植物的较早衰老可能部分是由于这些水解酶的活性的增加和从脱落植物中的较小叶面积的较早的营养素重新染色，而半润泽植物中的延迟衰老可能部分地部分蛋白质和淀粉降低引起的。gydF4y2Ba

营养器官CTKs在调节衰老中发挥重要作用，这与延迟蛋白水解活性和氮再分配到发育中的粒体有关[gydF4y2Ba87gydF4y2Ba，gydF4y2Ba88gydF4y2Ba，gydF4y2Ba89gydF4y2Ba］.因此，我们推测CTK浓度的降低可能与LDef组蛋白水解活性的增加有关。gydF4y2Ba

在这项研究中，降低了沉降/源比由于半减少的延迟小麦叶片衰老，而导致落叶引起的较高的水槽/源极率导致较高量的ROS生产，并促进叶绿素 - 蛋白复合物和碳水化合物的降解，从而促进植物衰老。CTKS，IAA和JA和这些激素之间的相互作用在调节源能力和沉降力方面发挥了重要作用，从而影响了叶片衰老的过程。水槽和源操作诱导了许多差异表达的蛋白质，主要涉及ROS清除，叶片光合作用，碳和氮代谢，前体代谢物和能量和籽粒发育的产生。通过水解酶活性的碳水化合物和蛋白质的降解在脱落植物的旗叶中促进了叶片，但在半缩短植物的植物中延迟，这反过来又受到谷物中的碳和氮代谢。半尖峰去除增强但落叶抑制的单粒生长，表明小麦的产量潜力受到水槽容量和源可用性的限制。我们的结果表明，通过强化繁殖期间的源和陷阱能力，可以实现未来的产量改善，以增加小麦的产量潜力。gydF4y2Ba

网站，实验和设计gydF4y2Ba

实验是在山东农业科学院的实验站（36°42'n，117°4'e;高度48米）的田野的一个领域的2017-2018种植季节。土壤是一种很好的壤土。在本实验中使用了由山东农业科学院作物研究所开发的小麦品种Jimai 23。Jimai 23是由于其高谷物产量而在中国北方各次种植的品种的代表。在2017年10月10日，种子播种，以225种种子mgydF4y2Ba^{−2gydF4y2Ba}在三个墨水中（每个30米gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba）.在种植之前施肥的地块有10克gydF4y2Ba^{−2gydF4y2Ba}PgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_5gydF4y2Ba， 10g KgydF4y2Ba_2gydF4y2Bao M.gydF4y2Ba^{−2gydF4y2Ba}7.5 g N mgydF4y2Ba^{−2gydF4y2Ba}．在拍摄阶段(Zadoks阶段31)，15克氮米gydF4y2Ba^{−2gydF4y2Ba}被尿素覆盖。2018年6月6日，成熟谷物收获。gydF4y2Ba

来源和水槽操纵gydF4y2Ba

库源处理方法如下:(1)人工去除穗一侧的所有小穗，使剩余籽粒的同化物有效性增加一倍;(2)除旗叶外，所有茎叶均被去除，以降低源同化物的有效性。在每个地块开花后的2天，在3行2米的切片上进行每次操作。选取3个2米长的切片作为对照。gydF4y2Ba

植被指数的测量gydF4y2Ba

NDVI和PRI是用PlantPen仪器(Photon Systems Instruments, Brno, Czech Republic)从每个地块的30片旗叶中测量的。采用叶绿素仪(SPAD-502 plus，日本柯尼卡美能达公司)在8、16和24 DAM时测定每个地块至少30个旗叶的SPAD指数。对每个地块的数据求平均值。gydF4y2Ba

叶绿素荧光测定和成像gydF4y2Ba

在不同阶段进行叶绿素荧光分析gydF4y2Ba艘渔船gydF4y2Ba/gydF4y2Ba调频gydF4y2Ba和ΦgydF4y2Ba_{PSIIgydF4y2Ba}在kong等人描述的情况下，在旗叶使用动力学成像荧光计（荧光粉，光子系统仪器有限公司，布尔诺，捷克共和国）。［gydF4y2Ba90gydF4y2Ba］.gydF4y2Ba

透射电子显微镜gydF4y2Ba

TEM观察结果按照Kong等人先前报道的方法进行处理[gydF4y2Ba90gydF4y2Ba]使用透射电子显微镜（JEM-1200EX; JEOL Ltd.，Tokyo，Japan），在80 kV。gydF4y2Ba

激素分析gydF4y2Ba

从8,16和24大坝的三个生物重复中收集每次治疗的标志叶或尖峰。立即在液氮中冷冻;然后储存在-80°C。然后，将叶子和晶粒用于每个激素分析。gydF4y2Ba

根据Liu等人的研究，提取和纯化玉米素、玉米素核糖体、激动素和IAA [gydF4y2Ba34gydF4y2Ba］.简单地说，样品(大约0.10 g旗叶或谷物)在预冷却的砂浆中研磨，其中包含5毫升80% (v/v)甲醇提取溶液，并加入1毫米丁基羟甲苯作为抗氧化剂。提取液4°C孵育过夜，12000×离心gydF4y2BaggydF4y2Ba4°C保存15分钟。上清液用N烘干gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba在40℃下溶解在200μl甲醇中并通过膜（0.45μm）过滤。使用高效液相色谱（HPLC; RIGOL L3000，北京，中国）使用Kromasil C18反向相柱测量激素浓度。通过以2：3（v / v）的比例将甲醇和超纯水混合来制备流动相。注射体积为10μL，流速为0.8ml / min，塔温为35℃，洗脱时间为60分钟，检测波长为254nm。进行三种独立的每个样品的生物学重复。gydF4y2Ba

对于JA分析，样品(约0.10 g)在液氮中研磨成细粉，并在4°C下用1.0 ml 90% (v/v)甲醇萃取过夜。粗提物在12000×离心gydF4y2BaggydF4y2Ba静置10 min，收集上清。然后用0.5 ml的90%甲醇重新提取沉淀2 h，再离心。2次提取后，将上清液混合，40℃孵育风干。用乙酸乙酯/环戊烷(1:1,v:v)和三氯乙酸(1mg /ml)分别溶解于1ml乙酸乙酯/环戊烷(1:1,v:v)和20 μl，旋转30 min, 8000×离心gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟。将顶部有机相干燥，溶解在流动相中，注入反相C18高效液相色谱柱中，采用荧光检测器进行JA分析。用甲醇和0.1%甲酸(65%:35%，v/v)混合制备流动相。进样量为10 μl，流速为0.8 ml/min，柱温为35℃，洗脱时间为30 min;230 nm监测。每个样品至少进行三个独立的生物学重复。gydF4y2Ba

蛋白质准备gydF4y2Ba

叶片(每个生物复制约0.1 g FW)在液氮中研磨成细粉，并彻底转移到Eppendorf管中。在试管中加入1 ml预冷苯酚提取缓冲液(100 mM Tris-HCl, 50 mM EDTA, 100 mM KCl, 2% (w/v) DTT, 30%蔗糖和2% SDS;加入pH 8.0)，室温孵育10 min。然后，加入1 ml酚饱和的Tris-HCl (pH 8.0)。在4°C搅拌40分钟。在12000×以12000×离心后gydF4y2BaggydF4y2Ba在4℃下持续15分钟，收集上酚相，除去碎片，并用预冷却为100mM乙酸铵 - 甲醇溶液沉淀蛋白质在-20℃下沉淀。离心后，用冷丙酮洗涤颗粒三次，用冷却5分钟。在600μl裂解缓冲液中重悬浮（4％SDS，100mM Tris-HCl，1mM DTT，pH 7.6），在室温下温育60分钟并以12000×离心gydF4y2BaggydF4y2Ba室温下静置10分钟。样品被收集并储存在−80°C用于iTRAQ分析。蛋白浓度根据Bradford assay (Bradford, 1976)测定。gydF4y2Ba

胰蛋白酶消化和iTRAQ标记gydF4y2Ba

每种生物重复约100μg蛋白质用于消化。首先，通过在60℃下加入120μL缓冲液（10mM DTT，8M尿素，100mM四乙基溴化铵（Temb），pH 8.0），将蛋白质样品在60℃下加入1小时，然后使用50mM碘乙酰胺烷基化40 min at room temperature in the dark. Subsequently, the proteins (precisely 0.1 mg) were diluted with 100 μl 100 mM TEAB. Then, 2 μl sequencing-grade trypsin (1 μg/μl; Promega) was added for digestion at 37 °C for 12 h. After centrifugation at 12000×ggydF4y2Ba20分钟，收集上清液并冻干。将冻干样品解冻并在100μl100mM泡沫中重构。将100μLItraq试剂转移到样品管中并通过在室温下孵育2小时标记。加入200μl水以淬灭标记反应后，溶液冻干。gydF4y2Ba

质谱（MS）分析gydF4y2Ba

标记的多肽在纳米喷雾Flex源下使用Q-Exactive质谱仪(Thermo，美国)进行分析。以下分析是根据Xu等人所描述的程序进行的。[gydF4y2Ba91gydF4y2Ba和Xiong等[gydF4y2Ba92gydF4y2Ba］.gydF4y2Ba

蛋白质识别和量化gydF4y2Ba

使用Sequest®搜索引擎使用Proteome Discover™1.3（Thermo，USA）软件分析了MS / MS谱数据文件，并被搜索到UniProtgydF4y2Ba小麦属植物aestivugydF4y2Ba．小麦的Fasta数据库为1％FDR。前体离子和片段离子的质量误差分别设定为10ppm和0.02da。gydF4y2Ba

可靠蛋白的筛选标准为:唯一肽≥1，剔除无效值和反文库数据，基于可靠蛋白筛选差异表达蛋白。筛选差异蛋白，学生的gydF4y2BatgydF4y2Ba-测试gydF4y2BapgydF4y2Ba对照籽粒样品中，旗叶样品< 0.05和折数变化> 1.3或< 0.77，或大于1.5倍或小于0.67倍，并在两个试验基础上应用两个处理。gydF4y2Ba

生物信息学分析gydF4y2Ba

数据库（gydF4y2Bahttp://www.omicsbean.com:88/gydF4y2Ba)及OmicsBean软件(gydF4y2Bahttp://www.ebi.ac.uk/Interpro/gydF4y2Ba)用于基因本体论(GO)注释。在OmicsBean软件中，每个蛋白质被分配到生物过程、细胞成分和分子功能。注释后，将蛋白质映射到京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库(gydF4y2Bahttp://www.kegg.jp/gydF4y2Ba）.使用Cytoscape软件还进行PPI分析。gydF4y2Ba

酶化验gydF4y2Ba

对于总淀粉酶活性，从三次重复收集标志叶（约0.1g FW）并在预充电的砂浆和杵中均化，用1ml冷却的蒸馏水。加入另外9ml蒸馏水后，将混合物置于室温下20分钟以提取总淀粉酶。然后，将匀浆以12000×离心gydF4y2BaggydF4y2Ba4°C保存15分钟。将上清液分离，作为酶提取液。加入1 ml酶提取物，1 ml可溶性淀粉(1%，w/v)或1 ml蒸馏水(对照)，40℃孵育5 min。随后，将2 ml 3,5-二硝基水杨酸试剂(1% (w/v) 3,5-二硝基水杨酸和100 mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)加入混合物中，然后在沸水浴中加热。用分光光度计在540 nm处测定吸光度。酶活性表示为每分钟每毫克蛋白质催化产生1毫克还原糖的酶的量。gydF4y2Ba

以酪蛋白为底物，分光光度法测定蛋白酶(EC 3.4.21.40)活性。旗叶(约0.1克FW)在臼中研磨。匀浆在12000×离心gydF4y2BaggydF4y2Ba4°C孵育15 min，上清转移至试管中测定蛋白酶活性。将含有1ml酶提取物和1ml酪蛋白(2%)的反应混合物在40°C下加热10分钟。在40℃下加入三氯乙酸溶液(2ml 5%)，反应20分钟。离心后(12000×gydF4y2BaggydF4y2Ba，10分钟），含有1ml上清液，5ml Na的反应混合物gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba有限公司gydF4y2Ba_3.gydF4y2Ba（0.5μm）和1ml叶啉试剂制备，然后在680nm处度上测量其吸光度。酸蛋白酶，中性蛋白酶和碱性蛋白酶缓冲溶液的孵育培养基的pH分别为3.6,7.5和11。通过根据标准曲线测量从水解蛋白释放的酪氨酸和其他芳族氨基酸来估计蛋白酶的活性。活性表示为每分钟释放的Nmol酪氨酸，每Mg蛋白质释放。gydF4y2Ba

谷物质量gydF4y2Ba

每块地在成熟时收获80根秆，人工脱粒。谷物在60°C的烘箱中烘干至恒重。然后称重，计数粒数，得到单粒质量。籽粒质量和粒数根据半穗确定。gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

对获得的生理指标使用数据处理系统(DPS)软件进行统计分析(v.14.10, Refine Information Tech. Co.， Ltd, Hangzhou, Zhejiang, China)。采用邓肯多极差检验评价结果的统计学意义。gydF4y2Ba

本研究过程中生成和分析的数据集和本研究中使用的植物材料可在合理要求的情况下由通讯作者提供。gydF4y2Ba

ACP：gydF4y2Ba

酸蛋白酶gydF4y2Ba

自动增益控制:gydF4y2Ba

自动增益控制gydF4y2Ba

正义与发展党:gydF4y2Ba

碱蛋白酶gydF4y2Ba

BADH:gydF4y2Ba

甜菜碱醛脱氢酶gydF4y2Ba

BP：gydF4y2Ba

生物过程gydF4y2Ba

猫：gydF4y2Ba

过氧化氢酶gydF4y2Ba

CC：gydF4y2Ba

电池组件gydF4y2Ba

与原:gydF4y2Ba

cytokinins.gydF4y2Ba

大坝:gydF4y2Ba

操作后的日子gydF4y2Ba

部:gydF4y2Ba

差异表达的蛋白质gydF4y2Ba

达尔：gydF4y2Ba

Dehydroascorbate还原酶gydF4y2Ba

DPS:gydF4y2Ba

数据处理系统gydF4y2Ba

德勤:gydF4y2Ba

dithiothreitol.gydF4y2Ba

EDTA：gydF4y2Ba

乙二胺四乙酸gydF4y2Ba

FD-Gogat：gydF4y2Ba

Ferredoxin-dependent谷氨酸合酶gydF4y2Ba

罗斯福:gydF4y2Ba

错误发现率gydF4y2Ba

呃：gydF4y2Ba

内质网gydF4y2Ba

艘渔船gydF4y2Ba/gydF4y2Ba调频gydF4y2Ba：gydF4y2Ba

最大PSII量子产额gydF4y2Ba

GC:gydF4y2Ba

控制植物的谷物gydF4y2Ba

GDEF：gydF4y2Ba

落叶植物中的谷物gydF4y2Ba

GDG:gydF4y2Ba

植物中的谷物gydF4y2Ba

HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba：gydF4y2Ba

过氧化氢gydF4y2Ba

HPLC：gydF4y2Ba

高效液相色谱gydF4y2Ba

国际宇航科学院:gydF4y2Ba

Indoleacetic 3-acidgydF4y2Ba

ITRAQ：gydF4y2Ba

用于相对和绝对定量的Isobaric标签gydF4y2Ba

JA：gydF4y2Ba

茉莉酸gydF4y2Ba

KEGG:gydF4y2Ba

京都基因和基因组百科全书gydF4y2Ba

LC：gydF4y2Ba

叶子在控制植物中gydF4y2Ba

数值模拟:gydF4y2Ba

落叶植物中的叶子gydF4y2Ba

爬下:gydF4y2Ba

脱粒植物中的叶子gydF4y2Ba

MF：gydF4y2Ba

分子功能gydF4y2Ba

女士:gydF4y2Ba

质谱分析gydF4y2Ba

归一化植被指数:gydF4y2Ba

归一化植被差指数gydF4y2Ba

NP:gydF4y2Ba

中性蛋白酶gydF4y2Ba

OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{·−gydF4y2Ba}：gydF4y2Ba

超氧化物gydF4y2Ba

PDI:gydF4y2Ba

蛋白质二硫化物异构酶gydF4y2Ba

圆荚体:gydF4y2Ba

过氧化物酶gydF4y2Ba

PPI:gydF4y2Ba

蛋白质相互作用gydF4y2Ba

革命制度党:gydF4y2Ba

光化学反射率指数gydF4y2Ba

SDS:gydF4y2Ba

十二烷基硫酸钠gydF4y2Ba

草皮：gydF4y2Ba

超氧化物歧化酶gydF4y2Ba

SPAD:gydF4y2Ba

土壤和植物分析仪的开发gydF4y2Ba

茶巾：gydF4y2Ba

四乙铵溴化gydF4y2Ba

ΦgydF4y2Ba_{PSIIgydF4y2Ba}：gydF4y2Ba

有效PSII量子产额gydF4y2Ba

感谢上海路明生物技术有限公司在蛋白质组学分析方面提供的技术支持。gydF4y2Ba

本工作得到了中国国家重点研发计划（2016YFD0300403，2017YFD03002），中国国家自然科学基金（31801282），山东现代农业技术和行业体系（SDAIT-01-06）和国家专门标准现代农业工业技术研究体系基金（Cars-3-1-21）。资金用于实验实施，采样，蛋白质组学分析和数据诠释。gydF4y2Ba

隶属关系gydF4y2Ba

1. 2 .山东省农业科学院作物研究所，山东济南250100gydF4y2Ba

   吕雪梅，张燕，孔林安gydF4y2Ba

2. 山东师范大学生命科学学院，济南250014gydF4y2Ba

   Xuemei LV，严张，云秀张，寿金樊望大山gydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

LK构思和设计了实验;XL和YZ进行了实验;YXZ和SF对数据进行了分析;XL和LK写了手稿。所有的作者阅读并批准了最终的手稿。LK同意作为作者负责联系并确保沟通。所有的作者阅读并批准了手稿。gydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应于gydF4y2BaShoujin风扇gydF4y2Ba要么gydF4y2BaLingan香港gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

伦理批准和同意参与gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

同意出版gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

利益争夺gydF4y2Ba

作者声明他们没有利益冲突。gydF4y2Ba

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施普林格《自然》杂志对已出版的地图和机构附属机构的管辖权要求保持中立。gydF4y2Ba

开放获取gydF4y2Ba本文是基于知识共享署名4.0国际许可,允许使用、共享、适应、分布和繁殖在任何媒介或格式,只要你给予适当的信贷原始作者(年代)和来源,提供一个链接到创作共用许可证,并指出如果变化。本文中的图像或其他第三方材料都包含在本文的知识共享许可中，除非在该材料的信用额度中另有说明。如果资料不包括在文章的知识共享许可协议中，并且你的预期用途没有被法律规定允许或超过允许用途，你将需要直接从版权所有者获得许可。如欲查阅本许可证副本，请浏览gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/gydF4y2Ba．创作共用及公共领域专用豁免书(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/gydF4y2Ba）适用于本文中提供的数据，除非另有用入数据的信用额度。gydF4y2Ba

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