图。1

GRNA靶位点和两个CRISPR复用构建体的示意图。一种。为每个人选择了三个GRNAGALTS.，属于五元半乳糖基转移酶（加尔特）基因家族。GRNA标记为3-1,3-2和3-3GALT3;4-1,4-2和4-3GALT4;6-1,6-2和6-3GALT6;这些GRNA用于1中所示的基因构建体B.。（绿色和橙色分别代表5'-UTR和3'-UTR区域;蓝色代表外显子;黑线代表内含子。在线软件名为CRISPR-P 2.0（http://crispr.hau.cn/cgi-bin/crispr2/crispr.）用于设计所有GRNA。PFAM域预测：PF01762对应于半乳糖基转移酶（GALT）结构域;PF00337对应于半乳糖结合凝集素（Galectin）结构域。B-1。五个GRNA（3-1,3-2,4-1,6-1和6-2显示为1一种）用每个GRNA与TRNA融合在单个多函数转录单元中以靶向GALT3那GALT4， 和GALT6同时。B-2。四个GRNA（3-3,4-2,4-3和6-3合1一种）组装为四个单独的转录单位以靶向GALT3那GALT4， 和GALT6。Both B-1 and B-2 were cloned in the pHEE401E vector, which contains a maize codon-optimized Cas9 gene (zCas9) driven by an Arabidopsis egg-cell specific promoter (E.C.1.1) fused with an egg-cell specific enhancer (E.C.1.2) [19.]