图5

SDS-PAGE和western blot (一个)金属离子依赖性(b)及最适pH值(c)重组基因DzLAP1。M道:标准蛋白质阶梯。1和3道:原油rDzLAP1。通道2和4:纯化的rDzLAP1。将两微克粗蛋白和纯化蛋白装入SDS凝胶(一个)．3.5微克rDzLAP1与7.5 mM Cys-Gly在25 mM K中孵育_3.阿宝₄缓冲液(pH 7.2)在0 mM和1 mM Ca存在下^2＋、锌^2＋、镁^2＋、镍^2＋、锰^2＋37°C, 15分钟。总反应体积为50 μL。酶活性的测定采用改进的酸性茚三酮法[39在560nm (A₅₆₀)(b)．用7.5 mM Cys-Gly和1 mM Mg共培养3.5 μg酶，得到rDzLAP1的最适pH值^2＋在不同pH(醋酸缓冲液，pH 4-6;磷酸盐缓冲液，pH 6-8;三盐酸缓冲液，pH 8-9.5;甘氨酸- naoh缓冲液，pH 9.5-11)， 37°C, 15 min (c)．酶活性相对于最大值100%进行计算