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ABI4转录抑制的抗坏血酸调节VTC2在耐盐性拟南芥

BMC植物生物学体积21文章编号:112（2021.）引用这篇文章

摘要

背景

脱落酸(ABA)在植物非生物胁迫响应中发挥着重要作用，而ABA钝感4 (ABI4)是ABA信号通路中的关键转录因子。在拟南芥，Abi4负面调节耐盐性;然而，ABI4调节植物盐耐受的机制很差。我们以前的研究表明，ABI4直接与启动子结合维生素C有缺陷2（VTC2）基因，抑制转录VTC2和抗坏血酸(AsA)的生物合成。

结果

在本研究中，我们发现外源AsA处理可以缓解盐胁迫的敏感性ABI4 -overexpressing转基因植物。AsA含量降低，活性氧(ROS)水平升高ABI4 -盐胁迫下过表达的幼苗表明asa促进ROS清除与abi4介导的耐盐性有关。基因表达分析表明Abi4.是在盐胁迫早期诱导的，引起了减少VTC2表达式。因此，在相同的盐胁迫条件下，VTC2蛋白的丰度降低，并且在不存在Abi4.功能缺失突变体，提示ABI4对VTC2导致VTC2功能衰减。此外，AsA生物合成和循环途径中的其他编码基因对盐胁迫的响应也不同，说明AsA在盐胁迫下的稳态是复杂的。

结论

该研究通过调节ASA生物合成和植物中的ROS积累来阐明ABI4在盐胁迫耐受性的阴性调节。

同行评审报告

背景

抗坏血酸(AsA)在植物生长发育中起重要作用[1,2］．它是一种高效的非酶抗氧化剂，清除活性氧(ROS)，不仅调节生长发育，还调节应激反应[3.,4,5,6］．植物的生物合成及其调节机制已经获得了越来越关注的[7,8,9,10］．它在植物叶片中的生物合成受光和暗的调节[11，显示出昼夜节律，并对季节变化作出反应[12,13］．AsA含量也受温度的影响[14］．此外，参与ASA生物合成的基因的转录表达是通过植物激素或次生代谢物调节[15］．L-半乳糖途径是ASA生物合成的显性途径拟南芥．同源基因维生素缺陷2（VTC2),VTC5在该途径中编码键GDP-L-半乳糖磷酸化酶，和VTC2起主导作用[16,17,18］．茉莉酸(Jasmonic acid, JAs)通过诱导表达促进AsA的生物合成VTC2［15,19］．除了AsA的从头合成，AsA的回收也影响AsA的水平[17,20.］．

盐胁迫限制植物生长和发展，植物已经发展了各种适应机制来处理它。在盐度应力下的细胞中产生大量的RO，这使得ASA的抗氧化能力更重要[6,21,22,23］．前期研究发现，H2O2在AsA缺陷突变体中vtc1在盐胁迫下显著增加[24］．锌指蛋白SlZF3促进了AsA的积累，增强了植物的耐盐性[25］．许多研究也报道了外源供应AsA可以提高玉米、水稻和小麦等多种植物对盐胁迫的抗性[26,27,28]，说明AsA在植物耐盐性中起积极作用。

脱落酸(ABA)被称为植物应激激素[29,30.］．高盐度和干旱显著增加ABA水平，进而诱导许多参与胁迫反应的基因的表达[31］．Abscisic acid INSENSITIVE 4 (Abscisic acid INSENSITIVE 4, ABI4)是ABA信号通路下游的重要转录因子[32］．突变Abi4.首次从种子萌发过程中对aba不敏感突变体的筛选中分离出来[33]， ABI4在种子中的转录本表达量较高，但在苗期表达量较低[34］．ABA-deficient突变体的aba1,aba2,和aba3在盐或干旱胁迫下显示易萎的表型，但是Abi4.突变体表现出耐盐胁迫。植物过表达Abi4.的盐敏感性增加，因为ABI4下调Na+转运体HKT1; 1表达，表明植物的耐盐性与其减少地上部分钠积累的能力有关[35,36］．叶绿体发育基因AtDPG1通过ABI4参与盐应激反应[37］．因此，ABI4参与盐胁迫响应;但ABI4调控耐盐性的机制尚需进一步研究。

我们之前证明了ABI4直接结合到的启动子VTC2，抑制转录表达VTC2，然后缓解AsA生物合成[10］．ABI4直接结合参与ROS产生和清除的关键基因，调节盐胁迫下种子萌发过程中ROS的代谢[38］．我们发现ASA部分地回收了盐应激敏感性ABI4 -过表达植株，AsA含量较低，ROS积累较多。盐胁迫最初抑制了VTC2通过推广Abi4.表达式。因此，ABI4-VTC2协同调控盐胁迫下AsA的生物合成。揭示了ABI4响应盐胁迫的分子机制是通过调控AsA的生物合成和ROS的积累拟南芥．

结果

抗坏血酸有助于ABI4调节的盐胁迫敏感性

抗坏血酸对清除盐胁迫下积累的ROS具有重要作用，增强植物的耐受性[6］．它被证明了Abi4.突变体表现出更高的耐盐性[35］．我们之前证明了ABI4抑制AsA生物合成[10]，因此我们通过提供外源AsA进一步分析AsA在abi4介导的盐胁迫响应中的作用。col0 3日龄幼苗，2个隐性敲除等位基因Abi4.（abi4 - 102和abi4 - 103)和两个Abi4.- c端截短肽线过表达谱(OEM1和OEM5) [39]转移到含40 μmol AsA或含或不含AsA的100 mM NaCl的1/ 2ms培养基上。再培养4天后观察幼苗的根长。在abi4-103中，不同基因型的根长仅在AsA处理下略有增加，而在盐胁迫下则有不同程度的根长减少(图4 - 103)。1一个)。statistical analysis indicated that, compared to Col-0 under normal growth conditions, the root lengths of theAbi4.突变体较短。根长度abi4 - 103和abi4 - 102与COL-0相比，盐胁迫下抑制较小，而ABI4-OEM1和ABI4-OEM5显示与COL-0幼苗相同的趋势。另外，用盐胁迫下的ASA补充部分回收COL-0和ABI4-OEM中的根部长度，但在不存在这种效果Abi4.突变体，可能是由于低浓度的外源AsA(图。1b和c)。这些结果表明AsA可以部分恢复abi4介导的盐抑制对根生长的影响。

图1
图1

抗坏血酸(AsA)缓解盐胁迫对abi4过表达幼苗根系生长的抑制作用。一个幼苗生长表型的COL-0，abi4 - 102,abi4 - 103和Abi4.在100 mM NaCl处理下，添加或不添加40 μM AsA的过表达细胞株。3日龄的幼苗转移到含或不含AsA的1/ 2ms培养基中，再生长4天。条= 1.4厘米。bCol-0的根长，abi4 - 102,abi4 - 103和Abi4.在100 mM NaCl处理下，添加或不添加40 μM AsA的过表达细胞株。值为平均值±标准差(n = 30).cCol-0的相对根长度，abi4 - 102,abi4 - 103和Abi4.- 与在控制条件下的那些相​​比，无论有或没有40μmAcAc的100mM NaCl处理下的大规模抑制线。值是±SDn = 3. The root length of all seedlings under control conditions were normalized as 100. Different letters indicate statistically significant differences among the indicated data (P< 0.05, Tukey’s检验方差分析)

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高盐度应力导致叶片漂白，甚至死于拟南芥［21我们观察了在150 mM NaCl下添加或不添加AsA的幼苗存活率。白化病的发生在Abi4.降低突变幼苗，而在150mM NaCl处理下，在OEM转基因中较高（图。2a).添加AsA显著提高了各基因型对盐胁迫的耐受性。在NaCl处理下，OEM1和OEM5的存活率分别约为18和42%，而在外源AsA处理下，OEM1和OEM5的存活率分别约为75和69%，显著高于Col-0幼苗(图2)。2b).补充AsA也可提高小鼠的存活率Abi4.突变体高盐度应力。这些结果表明，ABI4抑制的ASA合成介导盐应激敏感性Abi4.突变体和ABI4-OEM幼苗。

图2
图2.

抗坏血酸(AsA)提高了黄瓜的高耐盐性Abi4.-overexpressing线。一个不同的生存表型Abi4.150 mM NaCl(添加或不添加40 μM AsA)处理后的基因型。将3日龄幼苗转移至含有或没有外源ASA的盐的1/2 ms培养基，并在另外生长四天。酒吧= 1.4厘米。b不同的生存率Abi4.150 mM NaCl(添加或不添加40 μM AsA)处理后的基因型。值为平均值±标准差(n= 3)。统计学上显著差异用不同的字母表示(P< 0.05, Tukey’s检验方差分析)

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ABI4调控盐胁迫下抗坏血酸生物合成和活性氧清除

抗坏血酸在清除ROS方面发挥重要作用，显著提高植物的抗应激能力[40,41,42］．我们之前发现Abi4.通过ABI4负调控AsA合成积累较少ROS [10］．本研究测定了盐胁迫下7日龄幼苗的AsA和ROS含量。结果表明，盐处理下的AsA含量较高abi4 - 103ABI4-OEM1和ABI4-OEM5突变体幼苗的基因表达量低于Col-0(图2)。3.a).我们比较了在Abi4.敲除突变体和OEM转基因植株，在正常条件和NaCl处理下添加或不添加AsA。根据二氨基联苯胺(DAB)或硝基蓝四唑(NBT)染色，H2O2和O2-在OEM1和OEM5的叶子中累积多于Col-0和Abi4.两个条件下的突变体。相比之下，h2O2和O2-内容的abi4 - 103叶片数量显著低于Col-0植株(图。3.b）。定量分析表明h的水平2O2在盐胁迫处理下，所有基因型均显著增加Abi4.突变体中，ABI4-OEM积累的H2O2比Col-0在盐胁迫处理下的处理效果好(图。3.c). O的含量2-低于abi4 - 103在正常和盐胁迫条件下，随着外源AsA的添加，O2-在ABI4-OEM植株中积累量明显降低(图2)。3.d).这些结果表明Abi4.突变体和过度抑制植物有助于盐胁迫处理下的ROS累积。

图3
图3.

ABI4促进盐胁迫下抗坏血酸(AsA)的合成和活性氧(ROS)的积累。一个Col-0中AsA含量abi4 - 102,abi4 - 103和Abi4.-过表达的细胞系在100 mM NaCl处理下。b二氨基苯甲酸（DAB）和Nitroblue四唑（NBT）在COL-0中ROS染色，abi4 - 102,abi4 - 103和Abi4.-过表达的幼苗，无论是否盐处理。的测量cH2O2和dO2-在Col-0，abi4 - 102,abi4 - 103和Abi4.盐处理或不处理过表达的细胞株。7日龄幼苗分别用100 mM NaCl(含或不含40 μM AsA)处理24 h。值一个,c和d为平均值±标准差(n= 3)。统计学上显著差异用不同的字母表示(P< 0.05, ANOVA with Tukey’s test)。FW，鲜重

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盐胁迫负调控VTC2通过诱导表达Abi4.表达式

结果表明，盐胁迫诱导了水稻的生长Abi4.表达拟南芥幼苗射击[36］．我们以前的研究表明ABI4抑制VTC2表达 [10］．因此，有必要进一步检测基因表达VTC2盐胁迫下。表达Abi4.通过定量聚合酶链反应(qPCR)分析，在盐处理2 h至24 h时，可以快速且显著地诱导(图。4一个)。VTC2在COL-0的盐胁迫4小时的开始时明显抑制了表达（图。4B)，而抑制被破坏abi4 - 103突变体(无花果。4c）ABI4-OEM1略微增加（图。4D，表明抑制VTC2盐胁迫的早期阶段的转录部分依赖于ABI4。

图4
图4.

盐胁迫对其表达的影响Abi4.和VTC2．表达式Abi4.在Col-0一个,VTC2在Col-0b,VTC2在abi4 - 103c,VTC2在abi4-oem1d对200 mM NaCl处理下的幼苗进行qPCR分析。在归一化到内部控制之后施，转录水平Abi4.和VTC2与0 h的处理时间进行比较，0 h归一化为“1”。误差棒代表三个生物重复的标准差。星号表示差异有统计学意义(P < 0.05, Mann-Whitney U检验)。eCOL-0和VTC2蛋白水平的比较Abi4.幼苗。波段下的数字表示所探测波段的相对光强PVTC2 :: VTC2-GFP/Col-0无NaCl处理归一化为“1”。提取总蛋白PVTC2 :: VTC2-GFP/ col-0和PVTC2 :: VTC2-GFP/abi4 - 103幼苗在100 mM NaCl处理24 h后，用抗gfp抗体检测。以肌动蛋白检测作为负荷控制

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在Col-0和Abi4.对盐胁迫处理下的突变体进行分析，验证其下调VTC2与VTC2的酶促功能相关的表达。我们检测到由此驱动的VTC2-GFP融合蛋白VTC2促销员在Col-0和的背景中abi4 - 103用抗gfp抗体处理或不处理NaCl的突变体。我们发现VTC2-GFP蛋白在abi4 - 103而在col0背景下，盐胁迫降低了这一水平，但变化不大abi4 - 103突变背景（图。4a).这些结果提示ABI4的转录抑制VTC2赋予盐压力早期阶段的ASA内容物和累积的RO。

我们还检测了盐胁迫下参与AsA合成和循环的其他基因的表达。的转录水平VTC1和VTC5盐处理1 h显著增加(图;5a和c）。ASA合成的L- GAL途径的其他关键基因通过盐下调（图。5在盐胁迫的前24 h，抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因在盐胁迫下表达上调APX3和APX4(无花果。5F-5K）。结果表明，ASA含量下降与盐胁迫的早期阶段的ASA生物合成和再循环相关。

图5
图5.

盐胁迫对L-gal途径抗坏血酸(AsA)合成和抗坏血酸过氧化物酶(APX)编码基因表达的影响。的基因表达VTC1,VTC4, VTC5, GaIDH, GLDH, APX1, APX2, APX3, APX4, APX5，和APX6在Col-0下，通过QPCR分析200mM下的幼苗。在归一化到内部控制之后施，将指定处理时间的转录水平与0 h时的转录水平进行比较，0 h归一化为“1”。误差棒代表三个生物重复的标准差。有统计学意义的差异以星号表示(P< 0.05, Mann-Whitney U检验)。7日龄幼苗用200 mM NaCl处理24 h

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ABI4与VTC2协同调控耐盐性

根据Abi4.和VTC2基因表达对盐胁迫的响应，我们测定了耐盐性ABI4 VTC2.两个突变体来确认他们的协调工作。在正常条件下，双突变体的根长较Col-0短，根系生长受到抑制ABI4 VTC2.突变体比这更容易abi4 - 103而不是那样的vtc2在盐处理下(图。6a, b，和c)。进一步的统计分析表明，根长度abi4 - 103,vtc2和ABI4 VTC2.在NaCl处理下突变体相同，添加外源AsA后突变体部分恢复(图2)。6b).中AsA的内容vtc2和ABI4 VTC2.盐胁迫处理的突变体数量远少于Col-0(图。6d）和ROS积累ABI4 VTC2.高于Abi4.在盐胁迫下（图。6e和f）。这些结果表明VTC2下游的Abi4.在盐胁迫下调节AsA的生物合成和ROS的积累。

图6
图6.

VTC2下游的功能Abi4.通过修饰抗坏血酸(AsA)的生物合成和活性氧的积累来调节盐胁迫下幼苗的生长。一个幼苗生长表型abi4 - 103,vtc2和ABI4 VTC2.在100 mM NaCl处理下，添加或不添加40 μM AsA的突变体。条= 1.4厘米。b根的长度vtc2 abi4 - 103和ABI4 VTC2.突变体(A)。c（b）中根长的相对值。COL-0的根部长度和正常生长条件下的所有突变体归一化为“1”。dCol-0中AsA的含量abi4 - 103,vtc2和ABI4 VTC2.在盐胁迫处理下。eH2O2和fO2-在Col-0，abi4 - 103,vtc2和ABI4 VTC2.在用或没有40μMASA的盐应激处理下。7日龄幼苗分别用100 mM NaCl(含或不含40 μM AsA)处理24 h。值是指±SD（n = 3）。统计上显着的差异由不同的字母表示（P <0.05，具有TUKEY测试的ANOVA）。FW，鲜重

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讨论

研究表明，ABI4调控植物的耐盐性Abi4.突变体表现出盐胁迫抗性，这与植株芽部钠积累减少有关[35］．然而，基于我们之前的研究表明，ABI4介导了AsA生物合成中乙烯和ABA的交联[10，目前尚不清楚AsA含量的增加是否与耐盐性的增强有关Abi4.突变体。植物的盐度损伤是部分通过盐诱导的ROS引起的[43］．无论ABI4如何调节植物盐耐受的机制都没有报道氧化应激。在目前的研究中，我们发现在耐盐性中调节ABI4介导的ASA生物合成拟南芥．盐压力诱导Abi4.表达引起的减少VTC2胁迫早期AsA生物合成减少，ROS含量增加，导致幼苗生长受阻。因此，AsA参与了abi4介导的盐胁迫敏感性。

植物中累积的RO对植物生长和发展具有重要影响[6,44,45］．如果应激早期产生的ROS没有被及时清除，就会造成严重的细胞损伤。研究表明，降低ROS清除能力会显著降低植物对盐胁迫的耐受性[46］．这abi4 - 103突变体在体内累积了更多ASA，这可以减少ROS的损伤，而ABI4-OEM植物由于ASA含量下降而对盐更敏感。通过添加ASA，观察到在清除ROS中调节ASA并促进耐盐性和耐盐性的进一步证据。

植物中AsA合成途径的关键酶是VTC2，其活性对AsA合成有重要影响[9,47］．在体内，VTC2的活性可通过转录和转录后水平调控[16］．结合抑制VTC2在盐胁迫的早期表达和降低的VTC2蛋白质水平，VTC2蛋白的丰度更多Abi4.突变体中VTC2的酶活性较Col-0明显增强Abi4.突变体对盐胁迫下AsA的生物合成有促进作用。AsA和ROS的含量Abi4.表明ABI4对AsA生物合成的调控在盐胁迫响应中发挥了重要作用。因此，在盐胁迫的早期，AsA的生物合成被下调，从而导致ROS的积累，抑制幼苗的生长。随着ROS在盐胁迫下的积累，编码AsA生物合成最后两个步骤的基因，GalDH和GLDH，盐胁迫24 h诱导AsA生物合成并清除ROS。因此，参与AsA生物合成的酶在响应盐胁迫时可能具有复杂的调控模式。

同时，我们也检测了该基因的转录水平APX型AsA循环途径中的基因，这是保持ROS稳态的关键[48］．APX in.拟南芥三种胞质(APX1, APX2, APX6)，三种微粒体(APX3, APX4, APX5)和两种叶绿体(基质sAPX，类囊体tAPX)亚型[49］．在这项研究中，大多数APX型在盐胁迫前2 h，除其他基因无显著变化外，其余基因均无显著变化APX2．基因APX1,APX2,APX5,APX6分别在盐胁迫处理12 h和24 h诱导，而APX3和APX4表明盐胁迫早期AsA含量的降低直接影响过氧化物酶体定位的APX3 [50]和叶绿体定位APX4 [51]，同时积累的ROS可首先被胞质APXs消除。这些结果与之前的结论一致，即定位于不同细胞器的APXs具有不同的功能[52］．这些结果表明，盐胁迫下的ASA介导的ROS消除仍需要进一步研究。

由于负面调节Abi4.在VTC2，盐敏感性的相似性ABI4 VTC2.双突变体vtc2表示VTC2下游的Abi4.在调节耐盐性方面。的反应Abi4.在盐胁迫下表达量下降VTC2导致AsA生物合成减少，ROS积累增加。增加的耐盐性Abi4.功能缺失突变体与高水平的AsA密切相关。

结论

总之，我们的调查结果提供了对ABI4如何调节盐抑制幼苗生长的见解，以与VTC2协调。表达Abi4.在盐胁迫下，ABI4与VTC2抑制它的表达。因此，减少表达VTC2导致ASA生产和增加的ROS积累，最终抑制幼苗生长（图。7）.在正常情况下，较低的表达水平Abi4.引起更高的VTC2扫除ROS的表达和ASA内容。在盐度压力下，Abi4.被诱导和抑制了VTC2表达式。表达减少VTC2盐胁迫早期AsA产量降低;因此，植物体内积累了更多的ROS。高水平的活性氧会导致幼苗生长受到抑制或死亡。因此，ABI4-VTC2模块在盐胁迫早期的协同调控导致了ROS的积累，抑制了幼苗的生长。

图7
图7.

ABI4和VTC2通过抗坏血酸(AsA)清除活性氧(ROS)协同调节受盐抑制的幼苗生长。正常情况下，低水平的ABI4表达导致较高水平的VTC2表达和AsA含量，以清除ROS。盐胁迫下，ABI4诱导并抑制VTC2的表达。在盐胁迫早期，VTC2的表达减少导致AsA的产生减少;因此，植物体内积累了更多的ROS。高水平的活性氧可导致幼苗生长抑制或死亡

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方法

植物材料及生长条件

拟南芥生态型哥伦比亚（Col-0）用于本研究中的所有实验。这abi4 - 103(CS3838),abi4 - 102(CS3837)从拟南芥生物资源中心获得。这vtc2突变体、ABI4-OEM1、ABI4-OEM5和pVTC2::VTC2-GFP转基因植物已被描述[10,40,53］．植物在1/2 ms培养基上生长[54[含0.4% (w/v)植酸酯在16-h白光/8-h暗循环下22°C。

基因操作

双突变体ABI4 VTC2.是通过交叉产生的abi4 - 103和vtc2然后通过测序随后筛选来自交叉的F2后代。有关使用的引物的信息总结在补充表中1．

盐压力测定

将3天龄幼苗转移到含有100mM或150mM NaCl的1/2 MS培养基中，供应或没有40μmAsa。在盐处理四天后，采取了照片，其次是对根长和生存率的统计分析。对于基因表达检测，将7天龄幼苗转移到清洁过滤纸中，并用200mM NaCl用1/2 ms液体培养物处理。

用抗坏血酸含量测定

对于标准曲线，将0.175g抗坏血酸转移到1.5ml离心管中，1ml 6％的环氯酸（HClO4)，制备1mm AsA溶液。AsA母液用6% HClO稀释40.1μM, 0.2μM, 0.4μM, 0.6μM, 0.8μM, 1μM AsA标准的解决方案。然后将每个200 μl标准品放入2ml离心管中，加入1800 μl 0.2 M丁酸钠缓冲液(pH =12.7)。在A点测量每个样品的吸收值265.．

AsA含量的测量如前所述[28］．用100mM NaCl处理7天幼苗24小时，然后将约0.1g样品加入到2ml离心管中，并在液氮中冷冻，用植物破碎机粉碎成粉末，含有1ml 6％HCLO。4加入并放入冰中搅拌5分钟。样品在12,000 rpm离心10分钟。然后将200 μl上清转移到含有1800 μl 0.2 M琥珀酸钠缓冲液(pH = 12.7)的新管中。在265 nm处用分光光度计测量OD1 (Optical Density 1)。再取200 μl上清加入另一支含有1800 μl 0.2 M琥珀酸钠缓冲液(pH = 12.7)和4u抗坏血酸氧化酶(Sigma)的试管中。混合后置于室温黑暗中20分钟，在265 nm处测量OD2。同时，在含有1800 μl 0.2 M琥珀酸钠缓冲液(pH = 12.7)和60 μl 1 M二硫苏糖醇(DTT)的试管中再加入200 μl上清液。混合后在室温(25℃)黑暗中放置30分钟，用分光光度计在265 nm处测量OD3。根据标准曲线OD1-OD2和OD3-OD1的值分别计算AsA的还原或氧化形式的浓度。两者之和为每个样品中总AsA浓度。

反应性氧气染色

将用水(对照)或盐(NaCl)处理过的幼苗放入试管中，放入2ml DAB染色溶液(包括1mg /ml DAB;50 mM NaAc-HAc, pH = 3.8)2O2或NBT溶液(含1mg /ml NBT;25 mM Hepes, pH = 7.6)，然后抽真空10分钟。这些样品在37℃的黑暗中孵育约15分钟至数小时(根据染色程度)，然后将植株转入75% (v/v)乙醇中去除叶绿素。

活性氧测量

7日龄幼苗转移到干净的滤纸上，用1/2 MS加或不加100 mM NaCl的液体培养24 h。0.1 g样品用液氮冷冻，然后用H2O2超氧化物含量按H2O2测量套件（Solarbio）和超氧化物测量套件（Solarbio）协议。

RNA提取和逆转录定量聚合酶链反应分析

用植物RNA分离迷你试剂盒(CWBIO)提取幼苗总RNA。RNA反转录使用HiScript II QRT Super mix for The qPCR (Vazyme Biotech)， qPCR使用SYBR Green Master mix (Vazyme Biotech)和iQ5系统(Bio-Rad)。三份生物样品用三个独立的技术重复进行分析。施(AT3G18780)作为归一化的内参基因。用2犬−ΔΔct方法 [55］．用三个独立的技术重复对三个生物学重复进行分析。误差棒代表三个生物重复的标准差。RT-qPCR所使用的引物见补充表1．

Western Blotting.

将7日龄幼苗转移到干净的滤纸上，用1/2 MS含或不含100mm NaCl的液体培养24 h。提取总蛋白，然后进行12% SDS/PAGE凝胶电泳。该蛋白通过湿罐转移转移到PVDF膜(BioRad)，并使用抗gfp抗体(Abmart)进行检测。以抗ACTIN抗体(Abmart)作为负载对照。采用ImageJ软件进行定量分析。

统计分析

统计数据采用单因素方差分析(Tukey’s test，P< 0.05)和Mann- Whitney U检验(p < 0.05) in SPSS16.0 (Polar Engineering and Consulting,http://www.winwriap.com.）.使用不同的字母和星形符号来表明统计学上显着的差异。

可用性数据和材料

可以通过联系相应作者来共享再现这些发现所需的所有数据和材料，wangjuan@caas.cn(J.W.)。

缩写

阿坝:

脱落酸

AsA:

L-抗坏血酸

APX型:

抗坏血酸过氧化物酶

轻拍：

Diaminobenzidine

绿色荧光蛋白:

Geen荧光蛋白

女士:

Murashige和Skoog.

电视台:

Nitroblue Tetrazolium.

OE:

过表达

QPCR：

定量聚合酶链反应

ROS:

活性氧

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下载参考

致谢

我们非常欣赏克里德斯大学克里斯汀H.·林纳博士，请善良地提供vtc2突变体。我们要感谢编辑（www.editage.com)作英文编辑。

资金

基金资助:国家自然科学基金(no . 31670280);中央公益性科研机构基本科研业务费专项资金(no . 1610392020004);中国农业科学院农业科技创新计划项目。

作者信息

从属关系

  1. 中国农业科学院生物技术研究所，北京100081

    Xiamusiya Kakan，小陵李，荣丰黄和王王

  2. 新疆农业大学农学院，乌鲁木齐830052

    Xiamusiya Kakan

  3. 河南农业大学农学院，河南郑州450002

    yanwen yu.

  4. 河北工程大学景观与生态工程学院，河北邯郸056038

    盛辉李

  5. 2 .作物基因资源与遗传改良国家重点实验室，北京100081

    黄荣峰，王娟

作者
  1. Xiamusiya Kakan
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  2. yanwen yu.
    查看作者出版物

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  3. 盛辉李
    查看作者出版物

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  4. 李小鹰
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  5. 荣丰黄
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  6. 胡安王
    查看作者出版物

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贡献

J.W.和R.H.构思了这个项目。X. K, Y.Y.， L. s.和X. L.进行了测定。X.K.， J.W.和R.H.分析了数据。x·k和j·w写的手稿。J.W.和R.H.审阅了手稿。作者阅读并批准了最终的手稿。

相应的作者

对应到胡安王．

道德声明

伦理批准和同意参与

不适用。

同意出版

不适用。

相互竞争的利益

作者宣称，这项研究是在没有任何商业或财务关系的情况下进行的，这些关系可以被解释为潜在的利益冲突。

额外的信息

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余永强，李淑娟。等等。ABI4转录抑制的抗坏血酸调节VTC2在耐盐性拟南芥．BMC植物杂志21，112(2021)。https://doi.org/10.1186/s12870-021-02882-1.

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关键词

  • Abi4.
  • 盐胁迫
  • 抗坏血酸
  • VTC2
  • ROS积累

BMC植物生物学

ISSN: 1471 - 2229

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